土壤DNA提取试剂盒品牌：MP Biomedicals美国MPbio盖德 ...
| 实验方法原理 | 毛细血管内皮细胞在形态上与心血管系统其它部位内皮细胞相似，但实验证明，在生物学性状上却大不相同，不能相互代替，因此必须单独进行培养。毛细血管细小，结构简单，内皮细胞外有较多的结缔组织，进行分离培养有很大困难。近年毛细血管培养已获成功；材料取自血管丰富组织，利用人的小儿包皮、人脾脏、牛肾上腺、癌组织（如卵巢癌）等均可。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 小鼠细胞 试剂、试剂盒 | 胰蛋白酶Eagle血清胶原酶 仪器、耗材 | 培养瓶离心机滤膜 实验步骤 | 一、材料 1. 肿瘤条件培养基制备 （1）取C3H小鼠的S-180实体肉瘤组织； （2）胰蛋白酶消化，Dulbecco改良Eagle氏培养液15ml（含10%小牛血清），接种到T-75Falcon产培养瓶中培养； （3）在细胞生长接近完全汇合时，收集培养液制成条件培养基；再用含10%小牛血清的新培养液后，也每隔两天收集一次，可获多量条件培养基； （4）4000转/分，离心后，再通过0.22μm微孔滤膜滤过，-20℃冻存备用（临用前融解）。 2. 凝胶底层制备 （1）取60mmFalcon产培养皿，加1%Difco产明胶（用不含钙和镁的Hanks液配制），铺盖瓶底，形成薄层； （2）置4℃过夜；用前再用不许培养液冲洗一次。 二、初代培养 （1）取材 取新鲜牛肾上腺数个，先用Hanks液洗除血污； （2）剥除被膜，分离出皮质，切成1立方毫米小块，加0.5%胶原酶室温中消化1 小时；每隔10分钟用吸管吹打悬液令消化充分； （3）通过不锈钢纱网滤过，网眼要求只允许能通过小于110微米长的毛细血管小段； （4）650rpm，4℃，离心7分钟后，弃掉上清胶原酶； （5）沉淀物用培养液重悬并离心，再重悬，再离心，共两次； （6）末次沉淀物仍用含10%小牛血清的Dulbecco改良Eagle氏培养液重悬后，稍吹打； （7）接种入铺有明胶底层的培养皿中，37℃培养；在培养头1~3小时中，毛细血管小段和内皮细胞最先贴附于底物上，而肾上腺细胞和成纤维细胞却仍在培养液中漂浮； （8）趁此时，吸除培养液，再加入肿瘤条件培养液；每两天换液一次。毛细血管小段一般成自1~4个内皮细胞，以后每个小段在底物上慢慢展成特殊形态的细胞岛，能持续2~5天。 三、毛细血管内皮细胞分离培养 毛细血管细胞初代培养细胞往往杂有其它非内皮细胞成分，此时需进一步纯化。原理与培养肿瘤细胞时排除成纤维细胞类似，可采用机械刮除法。但刮除其它细胞后，剩余毛细血管内皮细胞岛有时数量很少，此时细胞很给生长增殖，需用特殊饲细胞法等才易成功。 （1）初代培养2~3天后，镜下确认几个毛细血管内皮细胞岛，在培养皿背面，用不脱色笔划圈圈起； （2）镜下检查，如圈内残有非内皮细胞时，可用显微细针在倒置显微镜下挑除；此操作用细胞解剖器或用手操做均可，宜在净化台无菌气流中、打开培养皿盖进行，但时间不宜过长（15~20分钟）；圈外非内皮细胞可用无菌胶刮刮除； （3）用培养液漂洗两次，以去除漂浮细胞； （4）剩余内皮细胞岛如小（5~20个细胞）而少时，生长增殖常变得缓慢或完全不生长，此时需加入3T3等饲细胞；饲细胞接种量为4000细胞/cm3； （5）当内皮细胞充满所有饲细胞空间后，用胰蛋白酶消化、离心、加入肿瘤条件培养基； |
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-08-06
阅读（190）
▍
相关分类
▍
相关文章
啤酒酵母培养生产单细胞蛋白实验 实验方法
App(Object object) | 微信开放文档 QQ
实验一 巨噬细胞吞噬功能实验
Pepstatin A (天冬氨酸蛋白酶抑制剂)(SG2016100mg)
为什么要构建cdna文库_为什么真核生物需要构建cDNA文库_完美...
人雌三醇(E3)ELISA试剂盒科研专用
redis主从部署使用sentinel做监控 为什么failover 无法切换到 ...
siRNA转染时细胞铺板密度为什么很重要? 分子生物 分子生理...
逆转录酶和反转录酶有什么不同吗?
细胞计数仪器 | 细胞成像仪 | ViCELL XR 细胞计数分析... 贝克曼库尔特
FDA批准来那度胺治疗套细胞淋巴瘤
比较分子生理基因组学—cDNA阵列的异种杂交实验(一)资讯分析...
▍
相关问答
