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Haematologic Technologies/Chloromethylketones | Chloromethylketones | Inhibitors | Products | Haematologic Technologies, Inc./FPRCK-01/FPRCK-01-1 mg
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Haematologic Technologies/Chloromethylketones | Chloromethylketones | Inhibitors | Products | Haematologic Technologies, Inc./FPRCK-01/FPRCK-01-1 mg
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HTI
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FPRCK-01-1mg
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Tri-peptide chloromethylketones have been utilized extensively to irreversibly inhibit various serine proteases (1-5). Among the most common chloromethylketones are FPRCK (Phe-Pro-Arg-chloromethylketone; commonly referred to as PPACK), which is a rapid thrombin inhibitor and EGRCK (Glu-Gly-Arg-chloromethylketone; commonly referred to as GGACK), which is a rapid factor Xa inhibitor (1). Both FPRCK and EGRCK are used extensively during protein isolation procedures to inhibit serine protease activity and prevent further conversion of zymogens to active enzymes. Recently, the modification of these tri-peptide chloromethylketones with reporting groups, such as fluorescent probes (6-8,14), radioactive labels (9) or thioreactive-labels (10), has provided a unique approach to the study of various serine proteases. These probes are useful because they allow a means of reporting molecular changes in an enzyme, and not its zymogen, while also inhibiting the enzymatic activity.

The use of biotin as a reporting group has been used extensively with antibodies in ELISA based assays and in western blotting. The biotin, in conjunction with avidin, creates a highly sensitive method for detecting antibodies, and therefore, antigens. By modifying the tripeptide-chloromethylketones with a biotin group, the sensitivity of the avidin/biotin system can be extended to study serine proteases without the need for specific antibodies to the active enzymes.

Biotinylated tripeptide chloromethyl ketones can be used in a variety of ways (11-13). First, the compounds can be reacted with unwanted serine proteases in a sample or preparation, and can then be removed along with the protease using avidin-Sepharose (11). Second, the biotinylated-serine protease can be visualized on a blot without the use of specific antibodies (11). Third, the biotinylated serine protease can be quantitated in an active-site specific immunoassay (12,13,15), such as the tPA-CASSIA (see Assay Kits). The spacer utilized on these compounds has been optimized to allow good reactivity of the biotinylated FPRCK and the biotinylated EGRCK in the above mentioned procedures.

In addition to biotinylated chloromethyl ketones, fluorescein labelled compounds are also available. The fluorescein labelled compounds are useful in both Western blot and fluorescent imaging applications.

Biotinylated and fluorescein labelled FPRCK and EGRCK are prepared by the method of Williams et al. (11).

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简介生物体的激酶组是其基因组中的一组蛋白质激酶,这些蛋白修饰酶是很多治疗领域的潜在靶标。 近年来关于表征人类激酶组的研究和对可用激酶晶体结构的探索导致对激酶作为药物干预潜在靶标的关注日益增加。自从制药行业在 20 世纪 80 年代末开始关注激酶起,研发的大多数激酶抑制剂都以酶的 ATP 结合位点为靶标。 然而,Gleevec™ 的研发为此领域的研究注入了新的活力,该药物是一种酪氨酸激酶抑制剂,可诱导靶标 BCR-Abl 激酶发生结构... 查看更多>
2017-08-29
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相关疾病:高血压慢性心力衰竭冠心病心肌梗死糖尿病1977年施贵宝公司科学家ondetti等根据血管紧张素转换酶底物的化学结构推测设计出ACE的活性部位模型,1981年全球第一个血管紧张素转换酶抑制剂类药物卡托普利上市并用于治疗高血压,被列入降压药物......

《血管紧张素转换酶抑制剂在心血管病中应用的中国专家共识》.PDF(242.69k)
1、不可逆抑制剂:如烷化剂、有机磷、重金属盐、氰化物等
2、可逆抑制剂:包括
a、竞争性抑制剂,抑制剂与底物竞争性结合酶反应中心,使Km增大,而Vmax不变 b、非竞争性抑制剂,酶与抑制剂结合后还能与底物结合,但活性降低,使Vmax减小,而Km不变
c、反竞争性抑制剂,酶只能与底物结合后才能与抑制剂结合,Vmax与Km都减小
可逆抑制剂可用透析等方法除去,使酶恢复作用
(血管紧张素转换酶抑制剂)包括卡托普利,贝那普利,依那普利,培哚普利等;(血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂)包括缬沙坦,氯沙坦,厄贝沙坦,坎地沙坦等。这两类药物除了降压的作用外还可保护肾功能消减尿蛋白,但是ACEI(血管紧张素转换酶抑制剂)主要的副作用是咳嗽和血管性水肿,此时可以换副作用相对较少的ARB(血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂)。
以前生化方面的实验接触很少,最近做一个酶抑制剂筛选工作,酶活性通过生成物吸光度测定。查了一些文献,发现酶的用量和底物用量文献之间差别很大,我想问一下
1.对于抑制剂筛选工作(求ic50)是不是体系内酶与底物的量(底物应该是过量的)对实验结果影响不大。
2.如果要求算Km值,是不是需要知道反应产物的绝对量。反应时间文献上都是5分钟,反应速度就用反应产物量除以反应时间即可。
3.酶是进口分装的,规格5U,一次用不完,用PBS稀释后如何保存
谢谢
这是本人给研究生讲课的有关酶抑制剂的幻灯,该幻灯图文并貌,有许多动画。本课程是以郭宗儒编蓍的《药物化学总论》为参考书。

下载地址:/pub/其他资料/药化ppt/
本人最近在做中药里酪氨酸酶抑制剂的筛选,存在一些疑惑,望大家帮忙解答。
1、测定酶比活力:底物需要过量么?测定时间多长?是否可以加入过量的底物,然后测定3min吸光度的增加值,从吸光度的变化值计算比活力。

2、在酶抑制剂筛选的过程中,是否需要保证底物过量?还是要水浴一定时间让反应完全?我看到文献说用终浓度为0.1μmol/mL的底物,终浓度为45U/ml的酶,我想问,假设总体积为1ml,那么终浓度为45U/ml的酶岂不是每分钟能转化4.8μmol的底物?那么0.1μmol/mL的底物不就几秒钟就反应完了?那么怎么测定初速度?
相关疾病:卵巢癌癌症研究人员报告,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs),包括丙戊酸和SAHA,有效地抑制了人类卵巢癌细胞的增生,并诱发了凋亡。&n......