马玉山Green Max品牌介绍口碑评价中国品牌网
| 实验方法原理 |  经30min反应后，加入2、4-二硝基苯肼终止反应，并与反应液中的二种a-酮酸生成相应的2、4二硝基苯腙、在碱性条件，两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在500－520nm处差异最大，以等摩尔浓度计算，丙酮酸苯腙的显色温度约为a-酮戊二酸苯腙的3倍.据此计算出丙酮酸的生成量． |
|---|---|
| 实验步骤 | 一、实验试剂： l.0.1mol/L磷酸氢钠溶液：磷酸二氢钠（含二个结晶水）17.8g溶于水中并加水至1000ml，冰箱内保存。 2.0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：磷酸二氢钾13.6g溶解于水中，加水至1000ml，冰箱内保存。 3.0.lmol/L磷酸盐溶液（PH7.4）：将420mol0.1L磷酸氢钠溶液180ml0.1moL/L磷酸二氢钾溶液混匀，加氯仿数滴。置冰箱内保存。 4.底物缓冲液（DL-丙氨酸200mmol／L.a-酮戊二酸2mmol／L）：精确称 取1.79gDL丙氨酸和29.2mga-酮戊二酸先溶于约50m10.1mol/L磷酸盐缓冲液中用lmol/L氢氧化钠（约0.5ml）调节至PH7.4在加磷酸盐缓冲液至100ml，置冰箱保存.可稳定2周，每升底物缓冲液可加入麝香草酚0.9g或加氯仿数滴防腐，置冰箱中至少可保存1个月，分装安瓶灭菌后，室温至少可用3个月。 5.1.0mmol/L2，4-二硝基苯肼溶液：称取19.8mg，2，4硝基苯肼，溶于10mmol/L的盐酸中．完全溶解后，加蒸馏水至100ml，置棕色玻璃瓶，室温中保存若有结晶析出，应重新配制。 6.0.4mol／L氢氧化钠溶液，将16.0g氢氧化钠溶解于水中，并加水至1000ml，置具塞塑料试剂瓶内，室温中可长期稳定。 7.2mmol/L丙酮酸标准液：准确称取22.0mg丙酮酸钠（AR）置于100ml，置容量瓶中加0.05mol／L硫酸至刻度。 二、实验操作：在测定前取适量的底物溶液在37℃水浴箱内预温5min后使用，具体操作接表1进行．  各管温匀后，在37℃水浴保温20min，然后各管加人0.4mol/L氢氧化钠溶 液5ml，室温放置5min，用分光光度计在波长505nm处以蒸馏水调零点，读取各管吸光度，测定管吸光度减去样本对照管吸光度，从校正曲线查得ALT活力单位。 标准曲线绘制 1.按表2向各管加入相应试剂  2.各管加人2，4二硝基苯肼溶液0.5ml，混合37℃20min后加入0.4mol/L 氢氧化钠溶液5ml。 3.根匀，放置5min后用分光光度计在波长505nm处，以蒸馏水调零点，读取吸光度，各管吸光度减去“0”号管吸光度所得差值所对应的卡门酶活力单位做图。 参考值：5-25卡门单位 |
| 注意事项 | 1.赖氏比色测定由于受底物a-酮戊二酸浓度和2，4二硝基苯肼浓度的不足以反应产物丙酮酸的反馈抑制等因素的影响，标准曲线不能在延长至200卡门单位。 2.血清中ALT在室温（25℃）可以保存2天，在4℃冰箱可保存一周，在25℃以下可保存一个月。 3.严重脂血，黄疸或溶血血清可能会引起测定管吸光度增高，因此，检测此类标本时，应做血清标本对照。 4.当血清标本酶活力超过150卡门单位时，应将血清用生理盐水稀释5倍或10倍后再进行测定。 5.加人2,4-二硝基苯肼溶液后，应充分混匀，使反应完全，加入氢氧化钠溶液的速度要一致，不同的加入速度会导致吸光度读数的差异。 6.底物中的a-酮戊二酸和2,4-二硝基苯肼均为显色物质，称量必须很准确，每批试剂的空白管吸光度上下波动范围不应超过0.015A如超过此范围，应检查试剂及仪器方面问题。 7.成批ALT测定时各管加入血清后，试管架应置37℃水浴中操作，以一定的时间间隔各管加人底物缓冲液，每管即时混匀，以加人第一管开始计时，准确每反应30min。立即依相同的时间间隔，依次向各管加人2,4二硝基本肼亦每管即时混合，这样，才能保证成批ATL测定的准确性。 |
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-08-03
阅读（112）
▍
相关分类
▍
相关文章
▍
相关问答
