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材料无菌细胞培养，如1X104～1X106个细胞，24孔板3H-亮氨酸。无血淸培养基中2MBq/ml(～50uCi/ml)(特异活性并不重要，因为它将由培养基中的亮氨酸浓度决定）非无菌SLS或SDS，1%(35mmol/L)溶于0.3mol/LNaOH三氯醋酸（TCA)液闪瓶Eppendorf管闪烁液，最小含水为10%操作步骤1.细胞生长至所需密度。2.从孵箱中取出培养板，加人预温的溶于培养液或BSS中的放射性同位素，稀释度为1:10(如l00ul/ml/孔）。3.尽快地将细胞放回孵箱。4.继续培养4～24h。提示：不同的蛋白质更新率不尽相同。本操作程序并不针对任何特定的一种蛋白质，而可用于快速生长细胞中的总蛋白。当第一次用来测定一个细胞系的蛋白质合成时，要核实合成率在所选的孵育时间内是否呈线性。如果氨基酸池比饱和时低，可发生延迟。5.从孵箱中取出培养物，小心从孔中吸去培养液至适当的废弃放射性液体容器中（见7.7.2节）。1.用冷HBSS或D-PBSA轻轻地清洗细胞。提示某些单层培养，特别是一些松散贴附的连续细胞系，诸如HeLa-S,可能在清洗时便离散开来。如遇这种情况，移去同位素，并加入甲醇，将单层固定，静止lOmin，小心地移走甲醇，令其晾干。7．将培养板置于冰上，加人0.6mol/LTCA，于4°C静置lOmin，：然后吸去所有未掺入的前体物。8.重复第七步2次，但每次只许5min。9.以MeOH清洗培养物，晾干培养板。10．加人0.5ml0.3mol/LNaOH，内含1%SLS，室温下静置30min。11.混合每孔中的培养物，将它们移人液闪瓶中。12.加入5ml闪烁液，在闪烁仪中计数。提示：生物降解性闪烁剂（如Ecoscint)，比以甲苯或二甲苯为基础的闪烁液更好，因为只要是放射活性低于规定量，前者毒性较小，可以与大量的水一起倒入水池中。对于悬浮培养的细胞，在第5步用1000g离心l0min，去除培养基，除了第9步外6，7，8也须重复此步骤，第9步的培养板也可在磷光成像仪（phosphorimager)上直接定量测定。
