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| 试剂、试剂盒 | TE缓冲液胃蛋白酶溶液SYTOXGreen染色缓冲液
实验步骤 | 1.生长和收集细胞。细胞生长至5X106个/ml，离心收集10ml样品，并用5mlTE缓冲液洗一次。再次离心收集并悬浮在1.5ml水中。 2.乙醇固定细胞。每份1.5ml样品中加人3.5ml无水乙醇，使乙醇的终浓度达70%。 在室温中放置1h，如有必要，可在4°C放置样品。 3.洗去乙醇并超声波处理分散细胞。离心收集细胞并用5mlTE缓冲液洗一次。超声波处理分散细胞（每次5~10s，共3轮） 4.核酸酶处理细胞。Tris缓冲液稀释核酸酶储存液至1mg/ml(IX)。离心收集细胞，移去缓冲液并加入2mlIX核酸酶溶液重新悬浮。37°C振荡温育样品lh，如有必要可4°C过夜。核酸酶消化充分十分关键，这一步可以通过在荧光显微镜下观察细胞来检测。细胞核因染色会非常明亮，而细胞质除线粒体DNA之外不会被染色。 5.胃蛋白酶处理细胞。离心收集细胞并用新鲜配制的1~2ml胃蛋白酶溶液悬浮，室温温育样品5min。 6.SYTOXGreen染细胞，方法见Haase和Reed(2002)。配制SYTOXGreen的TE缓冲液（pH7.5)，每2.5ml的50mmol/LTE缓冲液中加入1ulSYTOXGreen。每份样品加入0.5ml的SYTOXGreen的TE缓冲液，使SYTOXGreen终浓度为1umol/L。 免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
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发布于 ： 2018-08-05
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