二氢硫辛酰胺乙酰基转移酶实验——Stopped实验资讯分析测试百科...
| 实验方法原理 | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 酶样品 试剂、试剂盒 | Tris-HClCoA乙酰磷酸磷酸转乙酰酶DL-二氢硫辛酰胺HCl羟胺FeCl3试剂 实验步骤 | 实验所需「试剂」具体见「其他」 0.98ml实验混合物
0.02ml酶样品 30℃培养15min，加入0.1ml1mol/LHCl停止，沸水浴5min。而后0.4ml的测定用量溶于0.2ml2mol/L羟胺，并且室温下持续10min后加入0.6mlFeCl3试剂。离心5min后测量546nm吸收值。
注意事项 | 其他 | 试剂： 0.1mol/LTris-HCl，pH7.6 0.01mol/LCoA（游离酸，Mr＝767.5，CoA·Li3，Mr＝785.4；23mg溶于3ml水中） 1mol/L乙酰磷酸（LiK盐，Mr＝184.1；1.84mg溶于10ml水中） 磷酸转乙酰酶（乙酰-CoA：正磷酸转乙酰酶，4000U/ml） 0.2mol/LDL-二氢硫辛酰胺 1mol/LHCl 2mol/L羟胺（等量的4mol/L羟胺，Mr＝69.49和4mol/LKOH，Mr＝56.11混合） FeCl3试剂 100ml5％FeCl3（8.33gFeCl3·6H2O，Mr＝270.3，用0.1mol/LHCl补充至100ml） 100ml12％TCA（三氯乙酸，Mr＝163.4） 100ml3mol/lHCl（1：3的比例混合HCl和H2O） 将三种溶液混合 |
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发布于 ： 2018-08-06
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