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谁在做这个实验:方案24.2 冻存活检组织实验实验方法

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实验方法原理	切取肿瘤，将肿瘤块浸于DMSO，然后分量冻存于液氮中。
实验材料	活检标本
试剂、试剂盒	DBBS收集液二甲基亚砜
仪器、耗材	塑料冻存管解剖刀解剖镊培养皿
实验步骤	一、材料无菌 1.活检标本 2.1.2ml塑料冻存管（NagleNunc） 3.DBBS 4. 收集液 5. 二甲基亚砜（如果放在一个无菌容器中，为半灭菌的） 6. 器皿（解剖刀、解剖镊、培养皿等，同为原代培养）二、操作步骤 1. 除去坏死组织、脂肪和纤维组织后，将肿瘤切成约1~2mm的小块。同原代培养，将肿瘤块放入DBBS中浸洗。 2. 在每个冻存管中放入4或5个肿瘤块。 3. 将1ml含有10%DMSO的生长培养液加入到放有肿瘤块的冻存管中，在室温下放置30min。 4. 将冻存管按1°C/min冷冻（见方案20.1），然后将冻存管移入液氮罐。为了避免爆炸危险，不要将冻存管浸入液氮。 5. 将冻存管放在37°C温水中，使其融化（要有适当的预防措施，见方案20.2）。 6. 用乙醇将冻存管彻底擦拭后打开，使肿瘤块沉淀后，吸出一半培养液。 7. 缓慢补充不含DMSO的新鲜培养液，轻轻摇动混合后，放置5min。 8. 用不含DMSO的培养液逐渐置换全部的培养液，然后将肿瘤块移入Petri培养皿，按常规原代培养方法进行操作，但每培养瓶中放入两倍多细胞。