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Interleukin-6(IL-6)isamultifunctionalcytokinethatregulatestheimmuneresponse,hematopoiesis,theacutephaseresponse,andinflammation.DeregulationofIL-6productionisimplicatedinthepathologyofseveraldiseaseprocesses.Itslevelsareobservedinseveraldiseases,includingrheumatoidarthritis(RA).IL-6playsrolesinbothapro-inflammatoryandanti-inflammatorycytokine.ItissecretedbyTcellsandmacrophagestostimulateimmuneresponse.Inaddition,likeTNFa,IL-6isanotherADIpocytesecretoryproductthatmaybeinvolvedininsulinresistance.IL-6isacytokinesecretedbymanycells,includingadipocytesandadiposestromalcells.IL-6secretionisincreasedintheadipocytesofobesesubjectsandmaybeimportanteitherasacirculatinghormoneorasalocalregulatorofinsulinaction.IL-6hasbeenimplicatedinthedevelopmentofinsulinresistanceandtype2diabetesinobeseindividuals.LikeTNF,IL-6inhibitstheexpressionofLPL,but,unlikeTNF,IL-6doesnotstimulatelipolysis.Principle:
TheELISAisbasedontheprincipleofasolidphaseenzyme-linkedimmunosorbentassay.Theassayutilizesamouseanti-humancytokineantibodyforimmobilizationonthemicrotiterwellsandgoatanti-humancytokineantibodiesalongwithstreptavidinconjugatedtohorseradishperoxidase(HRP)fordetection.Thetestsampleisallowedtoreactsimultaneouslywiththetwoantibodies,resultinginthemoleculesofthecytokinebeingsandwichedbetweenthesolidphaseandenzyme-linkedantibodies.Afterincubation,thewellsarewashedtoremoveunbound-labeledantibodies.AHRPsubstrate,TMB,isaddedtoresultinthedevelopmentofabluecolor.ThecolordevelopmentisthenstoppedwiththeadditionofStopSolutionchangingthecolortoyellow.Theconcentrationofthecytokineisdirectlyproportionaltothecolorintensityofthetestsample.Absorbanceismeasuredspectrophotometricallyat450nm. |
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人TS单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的TS与单抗结合，加入生物素化的抗人TS，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结 查看更多
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2018-12-26
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人Leptin单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的Leptin与单抗结合，加入生物素化的抗人Leptin，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与 查看更多
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2018-12-26
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗兔MMP-7单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的MMP-7与单抗结合，加入生物素化的抗兔MMP-7，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗兔IL-1b单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的IL-1b与单抗结合，加入生物素化的抗兔IL-1b，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生 查看更多
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2018-12-26
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人NF-kBp65单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的NF-kBp65与单抗结合，加入生物素化的抗人NF-kBp65，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavid 查看更多
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗兔cTnI单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的cTnI与单抗结合，加入生物素化的抗兔cTnI，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物 查看更多
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2018-12-26
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2018-12-26
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2018-12-26
采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗兔sICAM-1单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的sICAM-1与单抗结合，加入生物素化的抗兔sICAM-1，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 查看更多
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Elisa方法中的竞争法与夹心法的区别上海沪震实业有限公司公司动态123
2200212018-03-18
竞争法一般用于检测无法同时与两种抗体结合的小分子抗原，其原理为：将针对小分子抗原的抗体包被在酶标板上，检测时加入待测样本，使样本中的待测抗原与酶标板上的抗体结合。然后加入HRP酶标记的抗原，此抗原也可与酶标板上的抗体结合，由于酶标板上固著的抗体数量有限，因此当样本中抗原的量越多，则HRP酶标记抗原可结合的包被抗体就越少，两种抗原竞争结合包被抗体，所以称为竞争法。接着加入HRP酶的底物TMB，TMB被酶催化发生颜色反应，当样本中抗原量越多，代表酶标板孔内留下的HRP标记抗原越少，显色也就越浅。百特纯大分子Meretciel的测激素的ELISA试剂盒有些就是竞争法的。夹心法又叫双抗夹心法，用于检测较大分子的抗原或抗体，又分为：双抗体夹心法，用于检抗原；和双抗原夹心法用于检抗体。以双抗体夹心法为主，下面以双抗体夹心法为例讲解原理（双抗原夹心法类似）：首先将具有专一性之抗体包被（coating）于酶标板上，检测时加入待测样本，样本中若含有待测抗原，则会与酶标板上包被的抗体专一性结合，然后加入另一种针对待检抗原的抗体，通常称为检测抗体，包被抗体和检测抗体将抗原夹在中间所以叫双抗夹心。检测抗体通常带有HRP酶标记，接着加入HRP酶的底物TMB，TMB被酶催化发生颜色反应，样本中抗原量越多则显色越深。现在很多ELISA试剂盒生产厂家比如：优尔生和百特纯大分子Meretciel将生物素-亲和素放大系统引入双抗夹心法，也就是在检测抗体上标记生物素，然后加入HRP酶标记的亲和素（或链亲和素），利用亲和素可以和生物素分子紧密结合的特性，将HRP酶连接到检抗上，接着加入底物显色。也有引入二抗的，如下图，检测抗体不标记，再加入HRP标记的二抗与检测抗体结合
下图为ELISA原理图，夹心法即Sandwich ELISA，竞争法就是Competitive ELISA
向左转|向右转
下图为ELISA原理图，夹心法即Sandwich ELISA，竞争法就是Competitive ELISA
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竞争法ELISA操作步骤 自主发布 123
2018-01-17
（1）包被：用包被液将包被抗原稀释到合适浓度，每孔100 μL加入板孔中，包被过夜。
（2）封闭：将已包被的板用洗涤液洗涤2次，每孔加入120 μL封闭液，封闭一段时间，取出，甩干备用。
（3）竞争反应：在制备好的板中每孔加入50 μL系列浓度的标准品溶液和50 μL稀释好的酶标抗体溶液，孵育一段时间。
（4）洗板：用洗涤液洗涤5次。
（5）显色反应：每孔加入显色溶液100 μL，孵育一段时间。
（6）终止：每孔各加入终止液，在酶标仪上测定各孔的吸光值。
（2）封闭：将已包被的板用洗涤液洗涤2次，每孔加入120 μL封闭液，封闭一段时间，取出，甩干备用。
（3）竞争反应：在制备好的板中每孔加入50 μL系列浓度的标准品溶液和50 μL稀释好的酶标抗体溶液，孵育一段时间。
（4）洗板：用洗涤液洗涤5次。
（5）显色反应：每孔加入显色溶液100 μL，孵育一段时间。
（6）终止：每孔各加入终止液，在酶标仪上测定各孔的吸光值。
ELISA检测方法包括123
2021-08-22
双抗体夹心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；
2.次日洗涤3次；
3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；
4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；
6.’最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；
2.次日洗涤3次；
3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；
4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；
6.’最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
【讨论】在ELISA试剂盒方面有多年经验,欢迎大家共同讨论在ELISA...123
missoulmate2021-08-10
最近在用夹心法测目的抗体的含量，有很多不解的地方，望各位解答了。
1.标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释，为什么？我试过非梯度稀释的，也可以达到线性R2=0.99.
2.我用了CurveExpert做标曲，自动搜索后发现有10种提供的方程，各种形式的，其中一个十分适合我的实验结果（LogisticModel），而其他的感觉又不适合，因为结果常常为负值。这又是为啥捏？
3.实验的酶标仪最大OD值可以测到4，如果我的测量结果在1.3，是否像其他人所说的＞1了就不准确了。
4.利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程？
不好意思啊，一下问了这么多问题，最近做了一个月的ELISA，完全摸不清头脑啊。谢谢各位了
1.标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释，为什么？我试过非梯度稀释的，也可以达到线性R2=0.99.
2.我用了CurveExpert做标曲，自动搜索后发现有10种提供的方程，各种形式的，其中一个十分适合我的实验结果（LogisticModel），而其他的感觉又不适合，因为结果常常为负值。这又是为啥捏？
3.实验的酶标仪最大OD值可以测到4，如果我的测量结果在1.3，是否像其他人所说的＞1了就不准确了。
4.利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程？
不好意思啊，一下问了这么多问题，最近做了一个月的ELISA，完全摸不清头脑啊。谢谢各位了
【求助】双抗体夹心法Elisa的棋盘滴定结果,到底哪个浓度是最合适...123
35126452021-08-14
买的夹心法ELISA试剂盒，样品处理参照国外文献报道，豆类匀浆过夜浸提9000转离心取上清，按照试剂盒操作方式，结果发现10的5、6、7、8次方稀释度所测OD值结果基本一致，都在0.2-0.3之间，样品之间变化不大，如果按照文献理论报道含量应该是7次方的时候在检测限范围内，但7次方各个样品的OD值差异不显著，标曲相关性在0.99以上，OD值范围在0.07到0.85之间；
后采用豆粉浸提12000g离心取上清的方式，发现10的5、6、7、8次方稀释度所测OD值随着稀释度的升高而增大，比如一个样品的OD值5次方为0.2558次方为0.349；
刚接触相关知识，试验任务较重，心中疑问较大，恳请各位高手及时指正，诚谢！
后采用豆粉浸提12000g离心取上清的方式，发现10的5、6、7、8次方稀释度所测OD值随着稀释度的升高而增大，比如一个样品的OD值5次方为0.2558次方为0.349；
刚接触相关知识，试验任务较重，心中疑问较大，恳请各位高手及时指正，诚谢！
【求助】双抗夹心ELISA法 免疫学讨论版123
chenmaner75742021-08-24
简述分别用ELISA的哪种方法检测乙肝两对半? 123
Liusomebody_2021-08-07
表面抗原和E抗原采用的是双抗体夹心法，
表面抗体是双抗原夹心法
E抗体和核心抗体是竞争抑制法或间接法
表面抗体是双抗原夹心法
E抗体和核心抗体是竞争抑制法或间接法
请问采用ELISA 双抗体夹心法测乙肝表面抗原为什么要多次洗涤? ...123
猩捓2021-08-13
冲洗不净，残留的酶结合物会分解底物显色，引起本底太高而出现错误
elisa双抗夹心法加入终止液为什么变色123
天2982018-03-14
终止液是2mol/L的H2SO4，将酶破坏，蛋白变性，从而改变颜色：由蓝变黄。
如何选择ELISA试剂？123
希尔德丶2302018-01-17
我觉的也可以用间接法；
如果用双抗体夹心法，第二个抗体可以用多抗，这样保证你的抗原会被结合，多抗可以直接带HRP标记或者可以用HRP标记二抗去和多抗结合。
如果用双抗体夹心法，第二个抗体可以用多抗，这样保证你的抗原会被结合，多抗可以直接带HRP标记或者可以用HRP标记二抗去和多抗结合。
大多数人都不知道的酶标法_夹心法ELISA_ELISA试剂盒_试剂盒_蚂...123
liyouqiang6662021-08-11
本人用一重组蛋白（该蛋白存在于人体的血清中）制备了该蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体，并且单多克隆抗体都用竞争法证实了可以识别血清中该蛋白的天然形式。
目前，我用该蛋白的鼠源性单抗来包被ELISA板子，5%BSA37度封闭二小时后，洗涤四次后将板子分三个组加入抗原：其中一个组中加入的是我重组的蛋白，另一个组为用其它方法证实含该蛋白的人体内血清，最后一个组加入PBS。37度一小时后洗涤四次后每孔加入我制备的兔源性多抗。37度一小时洗涤六次后我再加入酶标记的抗兔的抗体37度40分钟后洗涤六次后TMB显色。
问题就在我显色后所有的孔都是阳性，其中以抗原为我的重组蛋白组与PBS组OD值最高，两组都可以达到1.8以上，而加入的抗原为人体血清组低，为0.6-1.0不等。
后面我优化条件，封闭液用过5%的脱脂奶粉，2%的BSA，包被的单抗浓度摸了梯度，加入的多抗也摸了梯度，酶标的抗体也摸了梯度。结果都没有改变，连趋势每次都是一样以重组蛋白组与PBS组OD最高。
今天我还试着把抗原换成其它蛋白也做出了强阳性？
请教各位高手，我的ELISA该如何往下面做了啊，是不是我的抗体本身有问题呢？
对了，我包被用的单抗是用GE公司的预装柱纯化的，很纯，在考染中是看不到一条杂带的。
目前，我用该蛋白的鼠源性单抗来包被ELISA板子，5%BSA37度封闭二小时后，洗涤四次后将板子分三个组加入抗原：其中一个组中加入的是我重组的蛋白，另一个组为用其它方法证实含该蛋白的人体内血清，最后一个组加入PBS。37度一小时后洗涤四次后每孔加入我制备的兔源性多抗。37度一小时洗涤六次后我再加入酶标记的抗兔的抗体37度40分钟后洗涤六次后TMB显色。
问题就在我显色后所有的孔都是阳性，其中以抗原为我的重组蛋白组与PBS组OD值最高，两组都可以达到1.8以上，而加入的抗原为人体血清组低，为0.6-1.0不等。
后面我优化条件，封闭液用过5%的脱脂奶粉，2%的BSA，包被的单抗浓度摸了梯度，加入的多抗也摸了梯度，酶标的抗体也摸了梯度。结果都没有改变，连趋势每次都是一样以重组蛋白组与PBS组OD最高。
今天我还试着把抗原换成其它蛋白也做出了强阳性？
请教各位高手，我的ELISA该如何往下面做了啊，是不是我的抗体本身有问题呢？
对了，我包被用的单抗是用GE公司的预装柱纯化的，很纯，在考染中是看不到一条杂带的。
elisa双抗体夹心法测afp的目的和原理? 123
2021-08-17
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