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Avidity/BIP300 - BIP-300 - positive control plasmid for induction/1/BIP300
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Avidity/BIP300 - BIP-300 - positive control plasmid for induction/1/BIP300
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亲和生物
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BIP300
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The BIP-300 plasmid allows you to compare your pAN or pAC AviTagTM fusion gene"s protein expression against a confirmed AviTagTM fusion product under the same growth and induction conditions. When transformed into the same E. coli host strain as your own pAN or pAC AviTagTM fusion plasmid construct, and induced in parallel, the BIP-300 Positive Control Plasmid will provide a measure by which to compare your transformation efficiency, growth and antibiotic maintenance conditions, and induction of your plasmid"s gene-fusion construct. The BIP-300 construct consists of a modified β-galactosidase gene (8 amino acids were deleted from its N-terminus) cloned into Avidity"s pAN5 AviTagTM fusion vector at the Multiple Cloning Site. The resulting AviTagTM-protein fusion (AviTag-β-gal), as are all the pAN and pAC fusion products, is under the tight control of the Trc promoter system and expressed upon IPTG induction. The plasmid is maintained with ampicillin. An example induction protocol is given under Protocols. This protocol uses the Avidity AVB101 E. coli strain containing the BirA over-expressing pACYC-184 plasmid construct (pBirAcm) as the host strain. It is initially requires chloramphenicol for maintenance in addition to the ampicillin required to maintain the pAN or pAC plasmid construct. If you are using a different host strain please adjust the protocol accordingly.

Supplied as 1 vial of Positive Control Plasmid DNA; 2µg at 1mg/mL in nuclease-free water (2µL). Store at -20°C.

Avidity是一家开创抗体寡核苷酸结合(AOC)的公司。™)AOCs结合了单克隆抗体的组织选择性和基于寡核苷酸的治疗方法的精确性,以克服寡核苷酸传递的障碍和疾病的目标遗传驱动因素。它们的AOC平台,演示了疾病相关RNA在细胞类型和组织中的调节,包括肌肉、心脏、肝脏、肿瘤和免疫细胞。专有的平台技术可以在单一抗体支架上传递多种治疗性寡核苷酸。AOCs具有类似于抗体的药物性质,并允许将寡核苷酸有效载荷传递到其他运载平台所不提供的非肝组织。AOC也有其独特之处,因为可以处理不可药物的目标。 它们正在推进一系列的治疗计划,重点是罕见的肌肉疾病和其他严重疾病。主要项目是开发治疗杜氏肌营养不良和肌营养不良患者的治疗方法。还与制药合作伙伴合作开展项目。并得到了经验丰富的团队和受人尊敬的生命科学投资者的支持。


带有AviTag标签的人类全长ORF克隆已经被构建在多种T7和CMV启动子表达系统,可以立即购买使用。AviTag标签蛋白可以被体内或体外的生物素连接酶生物素化,而且抗生物素蛋白或链霉亲和素可以专一地与生物素结合,正基于这两个反应,AviTag™技术可以应用于蛋白的固定,纯化和显影。虽然Avidity是一个小公司,科学带来的好处及其AviTag已得到认可。目前,AviTag技术已经在22个国家的世界十 大制药公司和研究人员中得到认可。


Avidity带有AviTag标签的人类全长ORF克隆已经被构建在多种T7和CMV启动子表达系统,可以立即购买使用。AviTag标签蛋白可以被体内或体外的生物素连接酶生物素化,而且抗生物素蛋白或链霉亲和素可以专一地与生物素结合,正基于这两个反应,AviTag技术可以应用于蛋白的固定,纯化和显影。  Avitag™技术 亲合力开发和销售用于连接分子的分子亲和力工具。我们的zhuan利AviTag™技术采用来自大肠杆菌的生物素连接酶(BirA),在独特的15氨基酸肽标签上使用单一生物素的高度靶向酶促缀合。AviTag™序列是GLNDIFEAQKIEWHE。以链霉抗生物素蛋白包被的表面为导向,这为分子结合相互作用创造了理想的表现形式。 avidity的AviTag技术的科学优势引起了人们的注意。目前,AviTag技术已被全球十大制药公司中的七家授权,并被22个国家的研究人员使用。 Avidity公司历史 avidity LLC由Millard Cull,Larry Lansing,Ron Gill博士和Mark Seville博士于1996年创立,根据生物素对抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白的非凡亲和力开发肽标签和分子生物学产品。在Affymax担任研究员期间,Millard参与了AviTag技术的发现,发现了其商业潜力,并获得了Affymax的*权利。他创建了avidity作为试剂公司,将AviTag技术的使用权转让给其他公司,并销售与该技术一起使用的产品。 AviTag历史 AviTag是一种获得zhuan利的生物素标记技术,由Affymax博士在Peter Schatz博士的“定向进化”方法中发现,称为“质粒上的肽”。定向进化方法鉴定了许多可被大肠杆菌的BirA酶生物素化的肽序列,这些序列中蕞 好的被称为AviTag。大肠杆菌酶BirA将15个氨基酸的AviTag生物素化为其天然底物生物素羧基载体蛋白(BCCP)的两倍。 使用AviTag技术的蛋白质的酶促生物素化优于蛋白质的化学生物素化,因为BirA酶温和且高度特异性地标记AviTag的赖氨酸残基。在AviTag之前,最小的生物素接受结构域由75个氨基酸组成。

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各种细菌具有各自独特的酶系统,因而对底物的分解能力不同,其代谢产物也不同。用生物化学方法测定这些代谢产物,可用来区别和鉴定细菌的种类。利用生物化学方法来鉴别不同细菌,称 查看更多>
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缩小细胞培养体积试验证明,MSCs最好培养于直径15cm的Nunclon或Corning板中,面积在140cm2和150cm2之间。细胞产率取决于培养皿的数量,一般使用此方法传代,每个培养皿中可收获5X105个细胞。来源:《人干细胞培养》 查看更多>
1.何时须更换培养基?视细胞生长密度而定,或遵照细胞株基本资料上之更换时间,按时更换培养基即可。2.如何选用特殊细胞系培养基?培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,首选MEM做粘附细胞培养、 RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。3.可否使用与原先培养条件不同之培养基?不能。每一细胞株均有其 查看更多>
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您是否也经常有这些困扰?每次冻存细胞都需要现配冻存液,太麻烦程序降温(4℃~-20℃~-80℃~液氮),太繁琐太耗时90%血清+10%DMSO冻存,成本太高细胞比较娇贵,细胞冻存后复苏率太低日本A/B品牌无血清冻存液好用,价格太高…………那是时候换一款无需程序降温的细胞冻存液了~~特别配方有效提高细胞冻存活率和复苏活力不含血清,不含动物来源性蛋白能减少各类病毒、霉菌和支原体等的污染... 查看更多>
我们实验室一直用一种特简单但非常安全的细胞冻存方法,与大家共享:冻存液:一般用10%DMSO(推荐用sigema原装的,质量好不用预消毒)+10%血清的完全培养基,如果细胞珍贵的话最好用10%DMSO+90%全血清降温方法:用最少两厘米厚的医用棉纱将冻存管紧紧包裹,扎紧,直接放入-70度冰箱,隔夜取出冻存 查看更多>
一、iPSC建系服务Q&A Q:为什么选择Cellapy公司的iPSC建系服务? A:Cellapy公司提供的iPSC建系服务,采用最标准化的流程、以最快的速度、用非病毒的方法建立无外源基因整合的iPS细胞系。Cellapy公司保证所提供的细胞系能够稳定传代扩增,并为细胞系提供多能性标志物的免疫荧光染色、畸胎瘤三胚层HE染色、以及G显带核型分析数据。 Cellapy公司诱导人iPSC,采用临床级别的诱导方 查看更多>
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不同的菌表现情况不同,做过的大肠杆菌基因工程菌一般不需要平板活化可以直接摇瓶培养,每次的生长情况比较稳定,这样可以简化操作步骤、节省时间和减少染菌几率,是可以尝试的;而有的菌则必须经过平板活化后再摇瓶培养,否则摇瓶培养会出现生长速度会很慢、生长很不稳定等不良状况
本人目前培养293T细胞中,两组细胞采用不同的抑制因子干预后共培养,然后取上清检测细胞因子的浓度,但是试剂盒尚未到达,由于是新手,用的6cm培养皿,一组两个皿练手,细胞长太快,我就经常把细胞消化后加培养基吹匀然后打掉一半,这样细胞就没那么快了,目前担心细胞老是传代是否会影响检测结果?另外该贴壁细胞上清液是要转板到培养板后直接收取吧,那么种板的细胞数是有没有特别要求?选择1-3x10^5/ml是否可以?ELISA搜集上清的量怎么把握?
感谢感谢,快过年了,没时间做实验了啊,试剂都还没到,希望能毕业。。。
这个问题由武汉新启迪生物来为您解答。
做ELISA实验,在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。
【标本收集注意事项】
1.收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血,高血脂标本。
3.标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测,需按一次使用量分装,冻存于-20℃,-80℃电冰箱内,避免反复冻融。
5.可根据标本的实际情况,做适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数) 。
6.收集标本,尽量做到双份的用量,避免一次实验失败,重复实验时标本缺失,从而耽误实验进程。
7.收集标本时,应该做好防护措施(比如戴手套,口罩,护目镜等),认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面,并且正确使用生物安全柜。

样本正确的处理方法应该是这样的:
【标本处理办法】
1.血清:将采集的全血静置冰箱4℃过夜,然后1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
2.血浆:用EDTA,枸橼酸钠,肝素等作为抗凝剂,加入血液混匀后,1000-3000rpm离
心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)
保存。
3.组织匀浆:切取组织块,0.01MPBS中过洗一次;按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例,在冰水中匀浆。匀浆完成后,5000-10000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
4.细胞培养上清:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。
5.尿液,腹水,脑脊液等:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃3-6个月)保存。

注:样品稀释的一般原则
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。

希望可以给您提供帮助,祝您科研顺利!
冻存管存好 这样子便于试剂在合理的条件下储存 以后还能继续使用哈

各位大神们,我的课题实验需要提取临床患者抗凝外周血的血浆进行冻存和后续研究,由于血样珍贵,老板让我把离心提取血浆之后所剩的沉淀也加以利用,从剩下的沉淀(血细胞)当中提取出白细胞并冻存,用于之后做western。我用自己的外周血标本试做了一下,5mlEDTA抗凝外周血,3000rpm4℃离心10min后,取上层血浆分装-80冻存用于相关ELAISA实验,然后在下层沉淀(血细胞)中加入3倍体积的溶血剂,静置10min使红细胞裂解之后离心,结果并没有明显的分层,我重复了加溶血剂裂解红细胞并离心的步骤,到最后的结果还是只能达到如图所示。可以看到一层灰白色物质,但无法完全分离提取白细胞,所以想请教各位大神:①我的操作中有哪些错误烦请大家指出;②我用的溶血剂是OptilyseC的溶血剂,是否是试剂的问题?是否需要购买专门的红细胞裂解液,或者自行配制?③为什么裂解红细胞之后分层并不明显,多次离心之后还是分不清楚?④如果可以提取出白细胞,是否可以直接加入冻存液将白细胞-80℃冻存用于之后的研究(主要是Western,不影响细胞内蛋白即可)?因为是第一次做实验,血样珍贵,这种处理方法做过的人也很少,烦请有经验的各位批评指正,向大家虚心请教学习,不胜感激!


师姐用的晶安生物2ml的,性价比较高,希望可以帮到您。
RAW264.7细胞为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
培养基:1640+10%FBS
消化条件: 预冷PBS浸泡5-10Min
细胞正常形态为圆形,贴壁生长,生长速度较快,细胞难消化,消化时用预冷的PBS淋洗,然后浸泡5min,让后用枪轻轻吹起吹散收集离心,这个过程很关键,如果没有消化到位就吹打或消化过久,细胞次日贴壁就会分化,分化之后的形态是细胞两端长出尖尖的触角,细胞不再圆形贴壁,而是平铺向四周扩散生长。
所以你换培养基试试看,我养的挺好的!
冻存血清与培养时的血清最好一致,保持整个体系的稳定性与持续性,
吹打最好还是用弯头的,用起来更为方便

阳离子脂质体转染试剂,保存温度2-8℃,如果放-20℃冻存后还能用吗?对转染效率影响究竟多大。。。

1、注意不要放在冷凝器出风口地方,以免阻碍散热。其它地方没什么风险。2、建议实验室低温冰箱一般是用于冻存一些样品,建议周围少放杂物,以免在取样品时,杂物掉落,对实验样品造成影响。

最近打算做PDX,成瘤后想冻一些组织,求推荐试剂盒,最好能说下价格?还有就是必须要在液氮中吗,-80行不行?

ELISA实验中血清的采集、处理和保存; 1、 真空采血针采集2ml新鲜血液,加入无菌试管中; 2、 采血后室温静置1小时; 3、 将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀ELISA实验中血浆的采集、处理和保存; 1、 真空采血针采集2ml新鲜血液,加入无菌试管中; 2、 按1:9加入抗凝剂(EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠),30分钟内于冰上分离血浆以 减少血小板的污染;(也可以直接用抗凝管采集); 3、 将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心5min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。 4、 取上清。 分装冻存备用,