Features:
-Excellentgenedeliveryefficiencyinmostcelltypesincludingdividingandnon-dividingorprimarycells.
-MultipleSEROtypes(AAV-1,AAV-2,AAV-3,AAV-4,AAV-5,AAV-6,AAV-8,AAV-9,AAV-DJ/8andAAV-DJ).
-Persistenttransgeneexpression.
-Induceefficientgenesilencing.
LargeshRNA/miRNA/gRNAAAVcisvectorinventoryforconstructingAAVcisplasmidwithaspecificpromoterandreporter:
| ForConventionalshRNA/miRNA/TuDrAAVProduction | |||||
Single-promotershRNA/miRNAAAVcisvector | Dual-promotershRNA/miRNArAAVcisvector | ||||
Promoterless |
| Promoterless | CMV | eGFP | |
| ForCRISPR/Cas9rAAVProduction | |||||
Single-promoterCRISPR/Cas9AAVcisvector | Dual-promoterCRISPR/Cas9AAVcisvector | ||||
Promoterless | Empty | Cas9 hCas9 SpCas9 hSpCas9 SaCas9 AsCpf1 hAsCpf1 ftCas9 st1Cas9 cjCas9 cdCas9 ciCas9 ncCas9 st3Cas9 nmCas9 mgCas9 nsCas9 | Promoterless | CMV | Cas9 |
ServiceDescription:
1.SynthesizeandcloneshRNAintoAAVcisvectors.
2.MediumscaletransfectionofAAV·HT™293cellinto1xcellstack.
3.HarvestrAAVparticlefollowedbypurificationviaadvanced2xCsClultra-centrifugationtoobtainclinicaltrialgradeofrAAVvector.
4.rAAVtitrationviaqPCR.
rAAVSerotypesWeOffer:
AAV-1,AAV-2,AAV-3,AAV-4,AAV-5,AAV-6,AAV-7,AAV-8,AAV-9,AAV-PHP.B,AAV-DJ/8andAAV-DJ.
RequiredMaterials:NCBIaccession#,targetsequence,validatedsiRNAorvalidatedshRNAsequence;miRNAaccession#,pre-miRNA,maturemiRNAorTuD(toughdecoy)miRNA.
TurnaroundTime:3~4weeks.
Deliverables:>0.2mLsuperpurifiedinvivogradeofrAAVvectorat>1E+13VG/mL*.
Weofferdiscountfornewcustomer,pleaserequestaquotewithustoday.
WealsooffertruncatedcustomshRNA/miRNAAAVservice,pleaserequestaquotewithustoday.
Figure1.AcomparisonofpurityandinfectivityofrAAVvectorsfromdifferentsourcesshowingsuperpurifiedandsuperinfectious(closetoclinicaltrialgrade)rAAVvectorpreparedviaouradvanceddoubleCsClultra-centrifugationapproach.
A.rAAVvectors(total1E+9VGperlane) fromdifferentsourceswereresolvedonSDS-PAGEfollowedbysilverstaining. Lane1:GMPmanufacturedrAAVvectorfromCHOP;Lane2:rAAVpreparedviaouradvanced2xCsClultra-centrifugationapproach;Lane3:rAAVfromVectorCoreofBCM;Lane4:rAAVfromourcompetitor"V";Lane5:rAAVfromourcompetitor"C";Lane6:ProteinMarker.
B.SuperinfectiousrAAVvectorpreparedviaadvanceddoubleCsClultra-centrifugation. Leftpanel:rAAV9-GFP(total5E+9VG)fromourcompetitor"V"injectedtomouseeye;Rightpanel:rAAV-9-GFP(total5E+9VG)purifiedviaadvanced2xCsClultra-centrifugationinjectedtomouseeye. 
Figure2.AcomparisonofinfectivityofrAAVvectorsfromdifferentsourcesshowingsuperpurifiedrAAVpreparedviaadvanceddoubleCsClultra-centrifugationapproachissuperinfectious.
rAAV1-GFP(total2E+9VG)fromdifferentsourceswereinjectedtomousemuscletissue. TheGFPfluorescencewasvisualized3weekspostinjection. A.rAAV1-GFPfromourcompetitor"V";B.rAAV1-GFPfromourpre-maderAAVsstockpurifiedviaadvanceddoubleCsClultra-centrifugation. C.QuantificationdatashowedthatoursuperpurifiedrAAV(bar2)is~9timesmoreinfectiousthanthat(bar1)preparedviaconventionalCsClultra-centrifugation.
*Finalviralyieldmaydependonthenatureoftransgene.
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但是有在转染前，将细胞进行重新传代的情况，这样做的目的在于保持细胞的活性状态。
“转染前将细胞以1.5-4.5X104 cells/well 的量(具体接细胞数请参考表1）接种在孔板中，于37℃， 5%CO2 的条件下进行培养，18-24小时（ sf9细胞为3-4小时）后转染。”
其次要看下你选择单位的规模如何，上海这边的，你可以看下基尔顿生物，原代细胞培养，动物造模，整体课题外包。
我刚开始做转染，悬浮细胞，分别做过表达和敲减，看了很多文献，大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr，wb，cck8，凋亡，细胞周期；还是说这次转染只做pcr或wb，再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前，转染一次做一次？我养的是悬浮细胞，转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗？跪谢解答！
目标蛋白对细胞有毒性，导致细胞死亡；
转染试剂以及DNA用量信息需要优化，否则对细胞具有伤害；
细胞贴壁转染之后没有正常换液。
建议：考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统；摸索转染试剂以及DNA用量信息，如果转染试剂毒性太大，可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection；对转染后的细胞进行换液处理，如果细胞状态感觉不够理想，可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。
以上所有分析、建议的前提是，细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利，加油~
转染分2种，一种是瞬时转染，即转染后让细胞表达目的蛋白后即提取蛋白，提一次蛋白，转染一次，这种方式一般不传代；
另一种转染为稳定转染，转染后加入一定选择压力进行筛选，没有转染的细胞不能存活，只留下转染的细胞，这种情况下可以筛选单个转染细胞，构建稳定表达某一特定蛋白或基因的细胞系。
各位版友求助，
我使用Hek293构建转染模型，瞬转5质粒，用lipo2000做转染体系。
转染48h，发现荧光较强的细胞都在爬片的边缘，比例十分少。是因为我添加试剂的手法不对吗。
同时也发现加入转染体系后细胞状态特别差。想问一下用lipo2000时可以用无双抗的10%FBSDMEM吗。我转染前6h现在用的是纯DMEM，不含FBS。
请各位大神帮忙
不建议你用MDCK细胞，非常难转染。
做的比较好的，一般都是上海地区的，你可以看下基尔顿生物。
