HSPC/CHOL/mPEG2000-DSPE (56.2:38.5:5.3) Liposomes with Ammonium Sulfate Gradient (100nm)
HSPC/CHOL/mPEG2000-DSPE (56.2/38.5/5.3 mol/mol) liposomes with ammonium gradient is the original lipid copmposition used for the commercial product Doxil(R) (STEALTH liposomal doxorubicin HCl). This lipid composition is a formulator"s choice in pharmaceutical/biotech industry for both formulation feasibility studies and liposomal product development.HSPC is essentially equivalent to DSPC (HSPC containsabout 85 % DSPCand 15% DPPC). The main advantages for using HSPC are its lower cost and availability of GMP quality raw materials. HSPC material used at FormuMax is from one of the world’s premier lipid suppliers.
This liposomes has the same lipid composition as used in the commercial STEALTH liposomes, DOXIL® (doxorubicin HCl liposome injection). Note the larger liposome particle size of 100nm compared to 85nm for Doxil®. If you want an ammomium liposmes more comparable to Doxil®, please seeF20204AS.
Specifications
Product code: F20204AB
Lipid composition: HSPC/CHOL/mPEG2000-DSPE (56.2:38.5:5.3 mol/mol)
Mean particle size: 100 nm (95 - 120 nm)
Lipid concentration: 60(60 -70mM)
Hydration buffer (loading battery):250 mM ammonium sulfate
External solution:10% sucrose, 20mM sodium PO4, pH 6.5 ± 0.2
Shelf-life:6 months
Storage:2-8°C, do not freeze
HSPC: hydrogenated phosphatidylcholine (Soy)
CHOL: cholesterol
mPEG2000-DSPE: 18:0 PEG2000 PE:1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000] (ammonium salt)
FormuMax科学公司位于加利福尼亚州北部硅谷的中心地带，是一家专业的药品配送公司，致力于满足医药/生物技术、化妆品和保健工业的配方开发外包的日益增长的需求。经营理念是成为**的伙伴，作为药物交付的***，特别是在制定具有挑战性的化合物脂质体和其他新的纳米技术。FormuMax拥有一支技术团队，在药物递送领域拥有***的专业知识，特别关注脂质体和其他基于脂质的技术。它们目前提供基础研究，配方可行性，定制配方准备，配方表征和分析科学的合同服务。FormuMax是**家提供大量预成型脂质体试剂的在线商店。已经成功地为来自世界各地的大学实验室、研究中心和各种行业的客户提供了服务和/或产品。
FormuMax供应主要产品：
Clophosome-氯膦酸盐脂质体
FormuMax提供两种预埋有氯磷酸盐分子的中性脂质体产品，该产品单次静脉或腹腔注射后可在脾脏经巨噬细胞清除率可达80-90%，并具有高度活性、稳定的理化性质（长期冰箱存放后仍保持均一性及悬浮特性），粘滞度低使用简便，适用于静脉、腹腔、皮下、鼻腔、气管等多种方式给药。
Doxoves-盐酸多柔比星脂质体
FormuMax可提供脂质定制的盐酸多柔比星脂质体（定制内容为脂质成分及脂质体大小）。FormuMax提供的产品为Doxoves，具有高度的产品稳定性和一致性,紧密的粒径分布和高效的药物包埋效率（高达4.0mg/mL(40mMlipid)的包埋药物浓度）。Doxoves系列产品在产品特性、稳定性及药代动力学特性上可媲美商业产品Doxil。
DrugLoadedliposomes
FormuMax提供多款包埋活性药物的脂质体产品，包括DoxorubicinHCl（含2.0mg/mL及4.0mg/mL两种浓度），IrinotecanHCl(2.0mg/mL)，TopotecanHCl(2.0mg/mL)，产品线仍在持续更新中。
预制脂质体
FormuMax供应的预制脂质体产品囊括多种通用的脂质体类型，使用世界*的优质脂类原料。该系列产品易于使用，稳定性、可靠性及可重复性高，节省时间和成本，并可为研究人员提供定制脂质体服务。目前FormuMax提供聚乙二醇化/非聚乙二醇化的常用脂质体，以及含浓度梯度Ammonium的脂质体
阳离子脂质体
FormuMax供应一系列的阳离子脂质体，用于需带正电荷的脂质体或细胞转染质粒DNA、反义/干扰RNA等。
荧光脂质体
FormuMax供应预制荧光标记的脂质体，包括常规荧光脂质体、生物素化的荧光脂质体以及Avdinized化的荧光脂质体，另外还提供客户定制的荧光脂质体（脂类及染料可选）。
脂质体制备薄膜
FormuMax供应一系列不同规格的聚碳酸酯薄膜，用于脂质体挤出制备。
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级，因此只要这个结构仍然保持着，就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定，一些版本的GFP蛋白（如EGFP）甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性，因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的，一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构，即便细胞被固定了，仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。
脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层，又称为人工生物膜。
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹入内，形成DNA一脂复合体，也能被表面带负电荷的细胞膜吸附，再通过膜的融合或细胞的内吞作用，偶尔也通过直接渗透作用，DNA传递进入细胞，形成包涵体或进入溶酶体 其中一小部分DNA能从包涵体内释放，并进入细胞质中，再进一步进入核内转录、表达。
其次要看下你选择单位的规模如何，上海这边的，你可以看下基尔顿生物，原代细胞培养，动物造模，整体课题外包。
但是有在转染前，将细胞进行重新传代的情况，这样做的目的在于保持细胞的活性状态。
“转染前将细胞以1.5-4.5X104 cells/well 的量(具体接细胞数请参考表1）接种在孔板中，于37℃， 5%CO2 的条件下进行培养，18-24小时（ sf9细胞为3-4小时）后转染。”
脂质体介导法
实验原理
上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。
外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞；病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大；病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响；所以现在对于很多普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。
利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性，因此脂质体与质粒的比例，细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题，通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。
上图是本次实验采用的脂质体中阳离子组分的结构的示意图。
本次实验采用的脂质体是promega公司的TransFast脂质体试剂，它是一种阳离子脂质体和中性脂质体的混合物，是对于本次实验中采用的293T细胞优化的转染试剂。
