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CCK8细胞增殖和毒性检测常见问题解答2
2017-04-25
问题描述:

1,CCK-8能否对活细胞进行染色?

不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐(WST-8),并通过电子载体PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST8上。由于生成的甲臜也是高度水溶性的,因此CCK-8不能对细胞进行染色。

2,CCK-8检测溶液对细胞是否有毒?

CCK-8溶液自身因为高浓度的PMS的存在而具有一点毒性。但是,加到培养基中的CCK-8是没有毒性的,因为被稀释了10倍。因此,长时间的培养,如过夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK-8检测后还可以用于其他细胞增殖检测,如结晶紫检测,中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK-8的耐受力都不同,因此在需要进行长时间培养时,先检测一下细胞在加入CCK-8培养后的活力。

3,在做加药实验时,药物对测定是否有影响?如何解决?

有时会有影响。如果药物具有还原性,会和CCK8发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK-8,测定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基(加CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK-8之前更换培养基,去掉药物的影响。

4,每次测定的数值不一样,是什么原因?如何解决?

可能会有以下几个原因:1.当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。2.有可能会因为CCK-8沾在壁上而产生误差,建议在加入CCK-8后,轻轻敲击培养板以帮助混匀。3.每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000-100,000个/孔范围内摸索条件。

5,如何设定空白对照?

在不含细胞的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收,可在不含细胞,加入药物的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450nm的吸光度作为空白对照。

6,哪些物质会影响CCK8的测定?

当有还原性物质存在时会影响CCK-8的测定,例如含有维生素C的Glucose等(一般培养基中的量不多,酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下,会增加空白吸收,但不影响测定,扣除空白吸收即可。

7,在实验中吸光度值太高,如果不能减少细胞数量,如何解决?

可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如:可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。

8,设定参比波长的目的是什么?必须设定吗?

不一定要设定。CCK-8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。

9,说明书上仅写了96孔板的测定方法,如果使用24孔板或12孔板,应该加多少量CCK-8试剂?

一般情况下建议加入CCK-8试剂的量是培养基体积的1/10。

10,在CCK-8显色过程中,如何终止反应?

有一下几种方法(96孔板):①在显色反应后,将培养板放置4℃冰箱内。②每孔加10μl0.1MHCL溶液。③每孔加10μl的1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸钠)溶液。注意:反应停止后,应在24小时之内测定。

11,必须预培养细胞吗?

不一定。如果要向保持细胞的最好状态,建议预培养细胞。如果不做细胞预培养,细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养,但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。

以上内容来自英格恩生物CCK8试剂盒

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丁香花-月季园
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makr
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小珊瑚_1986
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细胞增殖活性检测一般都是用MTT和CCK8。炎熙生物的相关试剂盒都很不错,步骤简单,经济实惠。http://www.biothrive.cn/
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Nrl的飞天
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现在国产的试剂盒只来那个还是不错的,炎熙的CCK8用过的
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