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2018-12-26
关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题，包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈，关于包涵体的处理一般包括这么几步：菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化，内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌？ 细胞的破碎方法 1.高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积， 查看更多
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2021-08-28
蛋白质组学和结构基因组学需要这种蛋白质提取方法, 它能够允许同时将几百个蛋白质在不同的载体和宿主的组合上进行筛选 (Stevensetal.，2001)。在这种多因素平行筛选 (multiparallelscreen) 中鉴定出来的能够正确折叠的表达水平高的最佳组合被放大到毫克级规模来生产，以便获得纯品进行功能和结构分析。这种高通量（high-throughout,HT) 的蛋白质表达和纯化策略加速了能够在微量和大量规模上高效裂解细胞和提取蛋白质的试剂及仪器的发展和优化。 查看更多
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2021-08-07
抗体作为生物学上的一个有用工具已经超过一个世纪。 1 9 世 纪 7 0 年 代 ， Emil vonBehring 和 Shibasaburo Kitasato⑴最先阐述了免疫球蛋白，从那时起，抗体在研究和商业应用方面的使用取得了前所未有的进展。抗体最初是作为治疗病毒性疾病的天然抗血清来使用的。现今，高度工程化的治疗性抗体已被用于治疗多种危及生命的疾病。这一章将介绍纯化抗体的几种方法，尤其是单克隆抗体的纯化，纯化后的单克隆抗体具有多种用途。本章还将介绍抗体纯化前后的鉴定学方法。本章中，我们实验室产生的数 查看更多
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2018-12-26
Protein purification; actin Overview ACTINThe most abundant muscle and non-muscle cytoskeletal protein. MW 42 kDa, 374/375 amino acids; various isoforms; s 查看更多
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2018-12-26
大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。（一）水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍 查看更多
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2021-08-04
抗体作为生物学上的一个有用工具已经超过一个世纪。 1 9 世 纪 7 0 年 代 ， Emil vonBehring 和 Shibasaburo Kitasato⑴最先阐述了免疫球蛋白，从那时起，抗体在研究和商业应用方面的使用取得了前所未有的进展。抗体最初是作为治疗病毒性疾病的天然抗血清来使用的。现今，高度工程化的治疗性抗体已被用于治疗多种危及生命的疾病。这一章将介绍纯化抗体的几种方法，尤其是单克隆抗体的纯化，纯化后的单克隆抗体具有多种用途。本章还将介绍抗体纯化前后的鉴定学方法。本章中，我们实验室产生的数 查看更多
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关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题，包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈，关于包涵体的处理一般包括这么几步：菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化，内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌？ 细胞的破碎方法 1.高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积， 查看更多
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2018-12-26
研究者们在分离到某一基因后，要对其编码蛋白质进行研究最理所当然的工作就是表达——即：有目的性地合成外源基因产物。在重组DNA技术的发展早期，人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随后，认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多， 查看更多
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膜蛋白在生物进程中具有关键性的作用。它们参与细胞与细胞之间、细胞与细胞基质 之 间 的 相 互 联 系 胞 器 及 细 胞 的 形 成 过 程 ，各种离子、代谢产物和蛋白质的跨质膜运辅 i，R N A 的跨核膜运输等。鉴于膜蛋白在多种细胞功能中的重要性，目前针对各种疾病的药物约有 5 0 % 都以其为靶点。作者： 伯吉斯等,主译：陈薇，本实验来自「蛋白质纯化指南」 查看更多
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2018-12-26
In identifying peptides from proteins with a known sequence, it is often useful to be able to predict how a peptide will migrate during electrophoresis, chroma 查看更多
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2021-07-29
染料配基层析不是真正意义的亲和层析，因为它们并不是与它们结合的蛋白质的天然配基。然而染料柱能很好地结合蛋白质，并能导致满意地纯化蛋白质。事实上，有时这种结合甚至比正常的配基更紧。染料配基柱通常是廉价和稳定的，并且具有较高的蛋白质结合容量。所以染料配基层析能作为蛋白质纯化中有价值的步骤之一。 查看更多
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本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。 查看更多
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(请教)抗体后注有(H+L)有何特殊含义 免疫学讨论版 专业医生...123
jiwiny2021-08-07
如GoatAnti-RabbitIgG(H+L)，H+L是什么意思？
一抗、二抗如何保存 123
vvuehon2021-08-06
工作液根据需要稀释在5%奶粉里，再加入少量叠氮化钠（大约0.01% w/v），4度保存。Alisa_lin(站内联系TA)分装，-20度保存。不要反复冻融，没有用过粉末的二抗，按说明书呗石头2011(站内联系TA)液体的一抗没加甘油的话尽量不要放在负二十，因为用的时候反复冻融不好。粉末状的二抗负二十就行了sayaya(站内联系TA)液体的一抗直接放-80度贮藏，可保存5年以上；
液体的一抗加50%甘油，-20度也不会冻结，可保存3-5年；
经常使用时取出一小份，4度可使用半年之久；
粉末状的二抗直接-20或-80度贮藏就行了。
液体的一抗加50%甘油，-20度也不会冻结，可保存3-5年；
经常使用时取出一小份，4度可使用半年之久；
粉末状的二抗直接-20或-80度贮藏就行了。
【求购】镍柱蛋白纯化试剂盒_问答详情_蛋白纯化试剂盒_蛋白纯化_...123
qinhuan04252021-08-15
ELISA试剂盒的准确度你是怎么判断的?123
ucnwxd2017-10-03
现在皮包公司很多，你没有一定采购经验你是摸不准的，最简单方法就是你多问问身边人，借鉴他人经验
质粒DNA提取和纯化试剂盒/质粒DNA提取和纯化试剂盒/质粒DNA...123
炎汐30082021-08-03
DNA纯化试剂盒与质粒DNA提取试剂盒这2者之间有区别吗？
我的实验是这样的，先纯化质粒，然后做酶切，再纯化DNA。
最后一步其实也可以用切胶回收试剂盒，我怕做不好，所以想选用DNA纯化试剂盒，但不知跟质粒DNA提取试剂盒是否有区别，因为说明书上说可以用Invitrogen的K210001.我搜索看了一席啊，觉得那个是提取质粒的小提啊。所以产生这个疑问，请大侠告知DNA纯化试剂盒与质粒DNA提取试剂盒这两者之间有区别吗？
用哪个公司的DNA纯化试剂盒比较好。谢谢啦！
我的实验是这样的，先纯化质粒，然后做酶切，再纯化DNA。
最后一步其实也可以用切胶回收试剂盒，我怕做不好，所以想选用DNA纯化试剂盒，但不知跟质粒DNA提取试剂盒是否有区别，因为说明书上说可以用Invitrogen的K210001.我搜索看了一席啊，觉得那个是提取质粒的小提啊。所以产生这个疑问，请大侠告知DNA纯化试剂盒与质粒DNA提取试剂盒这两者之间有区别吗？
用哪个公司的DNA纯化试剂盒比较好。谢谢啦！
哪个公司企业的ELISA试剂盒好,性价比高,服务好?如何选择elisa试剂盒...123
2021-07-25
试剂盒的分类组词网123
阿韶flU66E82017-10-03
主要有： 1.磁珠法核酸提取试剂盒
2.磁珠法提取DNA试剂盒
3.DNA提取试剂盒（离心柱法）
4.磁珠法RNA提取试剂盒
5.RNA提取试剂盒（离心柱法）
6.磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒
7.反转录试剂盒
8.胶回收试剂盒
9.PCR纯化试剂盒
10.病毒核酸提取试剂盒（磁珠法）
11.土壤基因组DNA提取试剂盒
12.法医样本DNA提取试剂盒（磁珠法）等 1.elisa
常见elisa试剂盒有：
特种蛋白检测elisa试剂盒
如免疫球蛋白,抗链O-aso,类风湿因子RF,C反应蛋白,微量白蛋白,β-2微球蛋白human,铁蛋白,转铁蛋白transferrin等等
肿瘤标志物检测elisa试剂盒：
如肿瘤标志物，组织多肽抗原，肿瘤相关因子，胰腺癌，直肠癌，细胞角蛋白片段，胃肠癌，铁蛋白，糖链抗原，神经特异性稀醇化酶，上皮膜抗原，乳腺癌，人抗小鼠抗体，前列腺，甲胎蛋白，肝癌，甲基苯丙胺，大肠癌，肺癌，大小便隐血检测，癌胚抗原，β-2微球蛋白等等。
食品安全检验elisa试剂盒：
食品中的激素、药物、霉菌毒素、过敏原残留、转基因产品的检测试剂盒，以及微生物、维生素等的检测产品。
植物病毒、细菌、真菌、植物激素和转基因作物的农业诊断试剂盒
动植物疾病诊断类如猪、牛、羊、马等家畜和禽类以及宠物类检测试剂盒
传染病检测elisa试剂盒
如幽门螺杆菌,乙脑,乙肝,丙肝,丁肝,戊肝,庚肝,衣原体,性病,腺病毒,微小病毒B19,天疱疮,水痘-带状疱疹病毒,生殖支原体,伤寒,沙眼,腮腺炎,人型支原体,麻疹,轮状病毒,流行性出血热,淋球菌,莱姆病,柯萨奇,抗解尿支原体,军团菌,结核,胶原,尖锐湿疣,甲肝,脊髓灰质炎,急性胰腺炎尿胰蛋白酶,霍乱,呼吸道合胞病毒,肝吸虫,副流感,肺炎,带状疱疹,传染性单核细胞增多症,层粘蛋白,布鲁氏杆菌,百日咳,白喉,艾柯病毒,EB病毒,A族链球菌等等。
2.免疫共沉淀试剂盒
3.化学发光试剂盒
4.免疫组化试剂盒
5.放射免疫试剂盒
6.免疫荧光试剂盒 1.细胞凋亡试剂盒
2.葡萄糖检测试剂盒
3.支原体检测试剂盒
四、试剂盒使用示例
试剂盒的产生正是为了使实验人员能够摆脱繁重的试剂配制及优化过程，所以试剂盒中一般配备有相应的使用说明书，用户按照说明书不需或只需少量的优化即可得到满意的结果。
⑴试剂盒使用说明书
说明书一般包括公司标志及名称、试剂盒名称、试剂盒组成、保质期、使用领域、使用方法等项目
说明书格式如右图所示：
①一般在页眉页脚处为公司的名称及标志；
②接下来为试剂盒的名称；
③试剂盒组成中应为试剂盒中的所有内容，为了简洁明了，一般以表格的形式表现；
④操作步骤是试剂盒说明书中最重要的部分，内容应准确、简洁、易懂，不能包含带有歧义的句子，更不能含糊其辞，排版上操作步骤应将复杂的步骤拆解，使人一目了然。可以说操作步骤为试剂盒的灵魂。 试剂盒内容（以离心柱型为例）：
一般包括：裂解液RL
去蛋白液RW1
漂洗液RW
RNase free ddH2O
吸附柱（RNase free）
过滤柱（RNase free）
缓冲液
离心管（RNase free）
收集管（RNase free）
此外，还配有一份试剂盒使用说明书，根据不同的生产商，可能还配有不同的试剂，如：DNA酶、溶菌酶等。
使用时一定要根据自己的实验需要购买专用提取试剂盒， 如果不是专用试剂盒，或许能提出RNA，但不能确保其质量以及完整性，会影响RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析、分子克隆等后续实验的结果。
当前提取效果好的是QIANGEN公司生产的RNA提取试剂盒，但其售价较高，单次实验费用花费太大，对精度要求不高的实验没有必要购买，当然还有其它的进口试剂盒，但是均存在价格高、订货周期长的问题（如果碰上国内无货的时候，要从国外发货，会等很长一段时间）。普通的提取实验用国产的试剂盒就足以，价格不高，基本上各地均有现货，如天根（目前国内生产的试剂盒中销售面比较广的一种）等，其价格比进口试剂盒要便宜许多，且效果还不错，性价比还可以。
当然，就RNA的提取而言，不一定试剂盒的提取效果就非常好，其实采用一些经典的RNA提取方法，效果也很不错，如：TRIZOL、EDTA等，只是试剂盒使用方便，经典的方法操作复杂一些。向左转|向右转
2.磁珠法提取DNA试剂盒
3.DNA提取试剂盒（离心柱法）
4.磁珠法RNA提取试剂盒
5.RNA提取试剂盒（离心柱法）
6.磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒
7.反转录试剂盒
8.胶回收试剂盒
9.PCR纯化试剂盒
10.病毒核酸提取试剂盒（磁珠法）
11.土壤基因组DNA提取试剂盒
12.法医样本DNA提取试剂盒（磁珠法）等 1.elisa
常见elisa试剂盒有：
特种蛋白检测elisa试剂盒
如免疫球蛋白,抗链O-aso,类风湿因子RF,C反应蛋白,微量白蛋白,β-2微球蛋白human,铁蛋白,转铁蛋白transferrin等等
肿瘤标志物检测elisa试剂盒：
如肿瘤标志物，组织多肽抗原，肿瘤相关因子，胰腺癌，直肠癌，细胞角蛋白片段，胃肠癌，铁蛋白，糖链抗原，神经特异性稀醇化酶，上皮膜抗原，乳腺癌，人抗小鼠抗体，前列腺，甲胎蛋白，肝癌，甲基苯丙胺，大肠癌，肺癌，大小便隐血检测，癌胚抗原，β-2微球蛋白等等。
食品安全检验elisa试剂盒：
食品中的激素、药物、霉菌毒素、过敏原残留、转基因产品的检测试剂盒，以及微生物、维生素等的检测产品。
植物病毒、细菌、真菌、植物激素和转基因作物的农业诊断试剂盒
动植物疾病诊断类如猪、牛、羊、马等家畜和禽类以及宠物类检测试剂盒
传染病检测elisa试剂盒
如幽门螺杆菌,乙脑,乙肝,丙肝,丁肝,戊肝,庚肝,衣原体,性病,腺病毒,微小病毒B19,天疱疮,水痘-带状疱疹病毒,生殖支原体,伤寒,沙眼,腮腺炎,人型支原体,麻疹,轮状病毒,流行性出血热,淋球菌,莱姆病,柯萨奇,抗解尿支原体,军团菌,结核,胶原,尖锐湿疣,甲肝,脊髓灰质炎,急性胰腺炎尿胰蛋白酶,霍乱,呼吸道合胞病毒,肝吸虫,副流感,肺炎,带状疱疹,传染性单核细胞增多症,层粘蛋白,布鲁氏杆菌,百日咳,白喉,艾柯病毒,EB病毒,A族链球菌等等。
2.免疫共沉淀试剂盒
3.化学发光试剂盒
4.免疫组化试剂盒
5.放射免疫试剂盒
6.免疫荧光试剂盒 1.细胞凋亡试剂盒
2.葡萄糖检测试剂盒
3.支原体检测试剂盒
四、试剂盒使用示例
试剂盒的产生正是为了使实验人员能够摆脱繁重的试剂配制及优化过程，所以试剂盒中一般配备有相应的使用说明书，用户按照说明书不需或只需少量的优化即可得到满意的结果。
⑴试剂盒使用说明书
说明书一般包括公司标志及名称、试剂盒名称、试剂盒组成、保质期、使用领域、使用方法等项目
说明书格式如右图所示：
①一般在页眉页脚处为公司的名称及标志；
②接下来为试剂盒的名称；
③试剂盒组成中应为试剂盒中的所有内容，为了简洁明了，一般以表格的形式表现；
④操作步骤是试剂盒说明书中最重要的部分，内容应准确、简洁、易懂，不能包含带有歧义的句子，更不能含糊其辞，排版上操作步骤应将复杂的步骤拆解，使人一目了然。可以说操作步骤为试剂盒的灵魂。 试剂盒内容（以离心柱型为例）：
一般包括：裂解液RL
去蛋白液RW1
漂洗液RW
RNase free ddH2O
吸附柱（RNase free）
过滤柱（RNase free）
缓冲液
离心管（RNase free）
收集管（RNase free）
此外，还配有一份试剂盒使用说明书，根据不同的生产商，可能还配有不同的试剂，如：DNA酶、溶菌酶等。
使用时一定要根据自己的实验需要购买专用提取试剂盒， 如果不是专用试剂盒，或许能提出RNA，但不能确保其质量以及完整性，会影响RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析、分子克隆等后续实验的结果。
当前提取效果好的是QIANGEN公司生产的RNA提取试剂盒，但其售价较高，单次实验费用花费太大，对精度要求不高的实验没有必要购买，当然还有其它的进口试剂盒，但是均存在价格高、订货周期长的问题（如果碰上国内无货的时候，要从国外发货，会等很长一段时间）。普通的提取实验用国产的试剂盒就足以，价格不高，基本上各地均有现货，如天根（目前国内生产的试剂盒中销售面比较广的一种）等，其价格比进口试剂盒要便宜许多，且效果还不错，性价比还可以。
当然，就RNA的提取而言，不一定试剂盒的提取效果就非常好，其实采用一些经典的RNA提取方法，效果也很不错，如：TRIZOL、EDTA等，只是试剂盒使用方便，经典的方法操作复杂一些。向左转|向右转
如何选择二抗? 生物科学 抗体/Elisa 论坛学术科研互动平台123
Gloriachan2016-11-28
【求助】求:DNA甲基化修饰和纯化一步法的试剂盒急!!! PCR技术...123
sunyunyun2021-08-13
师哥师姐们好,请问有谁用过chemicon公司的CpGenomemodificationkit试剂盒的货号(S7820),这个试剂盒是甲基化和纯化一步完成的吗?我现在实验需要用到DNA甲基化试剂盒,但是我现在不知道它的的具体用法,知道的师哥师姐们可以给我说一下的它的用法吗?谢谢!
抗体纯化 | 抗体纯化试剂盒及方法 | 赛默飞世尔官网 | Thermo...123
magicblue2021-07-23
如何选择合适的流式抗体? 123
鬼鬼上尊丶庺樨2021-08-10
举例一：BD流式仪器FACSCalibur试剂选择及常见问题解答一、如何搭配流式抗体荧光标记流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的：流式细胞仪能检测多少个通道、需要同时检测检测多少个指标、厂家的抗体有多少种荧光标记。如果流式细胞仪的通道越多，那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多A、如何根据流式细胞仪搭配流式抗体1）BD流式细胞仪（06版目录第614页）流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的功能决定的，所以首先需要注意两点：流式细胞仪有哪些激光。比如标配的FACSCalibur只有一根488nm的激光，能做FL1、FL2、FL3三个荧光通道/三个颜色，而选配的Calibur(FACSCalibur的简称)配有488nm和635nm两根激光，可以检测FL1-FL4四个通道/4个颜色。不同型号的流式细胞仪的同样的一个通道检测荧光素的能力是不一样的，比如Calibur的FL3（第3通道）能检测PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCPCy5.5,PE-Cy7,而Aria的第3通道只能检测PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP。Calibur第3通道能检测的PerCP-Cy5.5在FACSAria上是第4通道检测。Calibur和LSR都能检测4个颜色，但是第4个通道检测荧光素是不一样的搭配荧光素原则搭配流式荧光素有2个原则：每个通道只能选择1种荧光素；各个通道之间的荧光素可以随意搭配，但需注意1、每个通道只能选择1种荧光素。以Calibur为例说明，Calibur的FL1通道选择了FITC就不能选择AlexaFluro488，或者选择了AlexaFluro488就不能选FITCCalibur的FL3通道尽管能检测PE-TexasRed,PE-Cy5,PerCP,PerCP-Cy5.5,PE-Cy7五个荧光素，但是我们我们搭配的时候只能选择其中1个。2、各个通道之间的荧光素可以随意搭配：如果客户的流式细胞仪能做4个通道，在第1个原则之下，那么每个通道随便选出1个荧光素就可以组合成4个颜色。以2跟激光的Calibur为例，Calibur各个荧光素之间可以搭配出16种组合。比如常用的搭配是FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4),这个搭配组合可以更改成AlexFluro(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC(FL4),或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+AlexFluro(FL4)，或者FITC(FL1)＋PE（FL2）＋PE-Cy5（FL3）+APC(FL4)等等。总之，在第1原则之下，我们可以随意搭配和组合各个荧光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用的话，上流式以后，容易导致补偿过度B、BD公司抗体有多少种荧光素1）供应商能提供的每种抗体的荧光素是不一样的我们需要根据同时结合供应商能提供的每种抗体的荧光素进行搭配。原则上同一个标志的不同的克隆号带同1个荧光素在应用上没有区别的，但是有些不同克隆号的抗体之间可能会有一些稍微的差异，需要仔细看说明书。我们可以尽量选择在说明书上有流式图形的抗体，或者选择荧光素种类最多的克隆号的抗体2）荧光素可以登陆www.bdbiosciences.com/spetra，输入荧光素和检测的BD流式细胞仪机型及激发光，就可以查到相应的波长。为什么要推荐使用AlexFluro488和AlexFluro647呢？因为这些荧光非常明亮，对激光非常稳定，适合流式细胞仪的光谱性质，对PH值不敏感，具有水溶性。此外，他们联合使用时发射光谱存在巨大差异，无需补偿。
C、如果检测的指标数目超过了流式细胞仪的通道，怎么办？如果需要做5个指标，而流式细胞仪只能做4个通道，首先将指标归成2类，再将样本分成2份，分别检测。比如需要同时检测CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma，那么将样本分成两份，第1份加CD3、CD4、CD8和IL-4，而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。
二、同型对照（IsotypyControl）1、为什么要用同型对照？同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型对照是真正意思上的阴性对照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。在流式细胞仪上样前，染色方式如下：样本管：一抗＋样本同型对照管：同型对照＋样本
2、如何选择同型对照？一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体，比如抗人的CD56APC标记的抗体，货号是555518,成份是MouseIgG1,κ。那么它的同型对照应该是APC标记的MouseIgG1,κ，货号是555751。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的.如果是抗体的组合形式是纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应该选择一抗的同型对照。比如CDw125的纯化抗体，货号是555901，成分是MouseIgG1,κ。它的同型对照是纯化的MouseIgG1,κ，货号是555746。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1,货号是550083。那么染色方式如下：样本管：纯化的CDw25＋PE标记的抗MouseIgG1＋样本同型对照管：纯化的同型对照＋PE标记的抗MouseIgG1＋样本
如果没有找到适合的同型对照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，那么优先选择的顺序应该是亚链不同－－亚型不同－－相同类别。比如，某种的抗体的来源是MouseIgG2а,κ。如果在同型对照表里面找到不到完全相同的同型对照，那么优先选择相同荧光标记的MouseIgG2а为同型对照。如果也没有找到MouseIgG2а，那么优先选择相同荧光标记的MouseIgG2b作为同型对照。如果最后还是没有找到MouseIgG2b，那么选者相同荧光标记的MouseIgG2作为同型对照。
3、如何查找同型对照？同型对照在BD英文目录中或者BD网站上跟它对照的抗体的位置是一致的。BD目录中，抗人的抗体的同型对照都在HUMAN章节后面。抗小鼠的抗体的同型对照在MOUSE章节后面，非人类灵长类的抗体同型对照在NONHUMANPRIMATE章节后面。由于抗大鼠的抗体非常少，大部分抗体都是小鼠来源的，所以它的同型对照跟小鼠的一样，放在MOUSE章节后面。胞内细胞因子、趋化因子、补体、炎症介质及其受体的同型对照放在其章节的后面（注意：人的胞内细胞因子的同型对照跟人的表面标志的同型对照是不在一起的）。Phosflow的同型对照在Phosflow的介绍后面。比如，比如抗人的CD56APC标记的抗体，货号是555518，在06版BD目录的169页，成份是MouseIgG1,κ。那么它的同型对照应该是在HUMAN章节中MouseImmunoglobulinIsotype表格中，第191页，APC标记的MouseIgG1,κ，货号是555751。
4、哪些客户需要使用同型对照？A对流式不是非常熟悉的客户。B做胞内流式客户，比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。C使用不常见的标志或者特异性不高的标志的客户，因为客户不熟悉不常见标志的表达情况，根据同型对照可以判断阳性细胞的位置。一些特异性不高的抗体，如多抗，非特异性结合非常多，使用同型对照可排除假阳性。D对流式非常熟悉又使用常用的表面标志的客户一般可以不使用同型对照。
5、为什么有时候同型对照的表达会比抗体的表达高？首先需要检查同型对照的抗体是否加错类型、剂量等。其次，因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高，而跟其类似的抗原非常多，那么加入同型对照时，同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性，所以会造成这种现象，在细胞表面时如图所示。这个时候推荐使用其他阴性对照，如空白对照等。
三、补偿微球流式细胞仪的荧光补偿隔一段时间之后需要调整到适合的位置。如果荧光补偿没有调节好，会导致细胞分群不明显或者流式检测得到的结果图非常不漂亮，而且会影响到检测结果的不真实。荧光补偿的调节对初学者来说非常不容易掌握，同时，补偿调节是流式细胞术中比较难掌握的操作。尤其是一些不常见的标志检测时，需要经验非常丰富的流式操作者根据多年的经验判断调节补偿，才可以得到比较好的数据和图片。那么，现在不需要这么麻烦。因为补偿微球让一切变得更简单。BDCompBeads是专用于流式细胞仪多色分析的荧光补偿调整微球。它的实用性是在于克服了以往普通的做三色以上的流式分析时补偿难调、耗费样本（往往用待测样本单标来进行补偿调节）的缺点。它本身不携带任何荧光，借助于与客户自己的特异性荧光抗体孵育结合来调节补偿。它不但能象待测的样本细胞一样在同样的实验条件下固定、破膜等，操作起来很简单，灵敏度高，一致性好，使补偿更轻松更准确，而且最难得的是它最适合于多色分析（如五色、六色、七色等）和复合荧光素（如PE-Cy7、APC-Cy7等），因为这时的补偿往往难度较大。各型号的流式仪器均能使用。Compbeads使用后可以将流式的条件保存，方便下次做同样的荧光染色搭配时参考用。
C、如果检测的指标数目超过了流式细胞仪的通道，怎么办？如果需要做5个指标，而流式细胞仪只能做4个通道，首先将指标归成2类，再将样本分成2份，分别检测。比如需要同时检测CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma，那么将样本分成两份，第1份加CD3、CD4、CD8和IL-4，而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。
二、同型对照（IsotypyControl）1、为什么要用同型对照？同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型对照是真正意思上的阴性对照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。在流式细胞仪上样前，染色方式如下：样本管：一抗＋样本同型对照管：同型对照＋样本
2、如何选择同型对照？一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体，比如抗人的CD56APC标记的抗体，货号是555518,成份是MouseIgG1,κ。那么它的同型对照应该是APC标记的MouseIgG1,κ，货号是555751。注意同型对照的成份跟它的名称是相同的.如果是抗体的组合形式是纯化的一抗＋荧光标记的二抗，那么应该选择一抗的同型对照。比如CDw125的纯化抗体，货号是555901，成分是MouseIgG1,κ。它的同型对照是纯化的MouseIgG1,κ，货号是555746。它的二抗PE标记的抗小鼠IgG1,货号是550083。那么染色方式如下：样本管：纯化的CDw25＋PE标记的抗MouseIgG1＋样本同型对照管：纯化的同型对照＋PE标记的抗MouseIgG1＋样本
如果没有找到适合的同型对照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，那么优先选择的顺序应该是亚链不同－－亚型不同－－相同类别。比如，某种的抗体的来源是MouseIgG2а,κ。如果在同型对照表里面找到不到完全相同的同型对照，那么优先选择相同荧光标记的MouseIgG2а为同型对照。如果也没有找到MouseIgG2а，那么优先选择相同荧光标记的MouseIgG2b作为同型对照。如果最后还是没有找到MouseIgG2b，那么选者相同荧光标记的MouseIgG2作为同型对照。
3、如何查找同型对照？同型对照在BD英文目录中或者BD网站上跟它对照的抗体的位置是一致的。BD目录中，抗人的抗体的同型对照都在HUMAN章节后面。抗小鼠的抗体的同型对照在MOUSE章节后面，非人类灵长类的抗体同型对照在NONHUMANPRIMATE章节后面。由于抗大鼠的抗体非常少，大部分抗体都是小鼠来源的，所以它的同型对照跟小鼠的一样，放在MOUSE章节后面。胞内细胞因子、趋化因子、补体、炎症介质及其受体的同型对照放在其章节的后面（注意：人的胞内细胞因子的同型对照跟人的表面标志的同型对照是不在一起的）。Phosflow的同型对照在Phosflow的介绍后面。比如，比如抗人的CD56APC标记的抗体，货号是555518，在06版BD目录的169页，成份是MouseIgG1,κ。那么它的同型对照应该是在HUMAN章节中MouseImmunoglobulinIsotype表格中，第191页，APC标记的MouseIgG1,κ，货号是555751。
4、哪些客户需要使用同型对照？A对流式不是非常熟悉的客户。B做胞内流式客户，比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。C使用不常见的标志或者特异性不高的标志的客户，因为客户不熟悉不常见标志的表达情况，根据同型对照可以判断阳性细胞的位置。一些特异性不高的抗体，如多抗，非特异性结合非常多，使用同型对照可排除假阳性。D对流式非常熟悉又使用常用的表面标志的客户一般可以不使用同型对照。
5、为什么有时候同型对照的表达会比抗体的表达高？首先需要检查同型对照的抗体是否加错类型、剂量等。其次，因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高，而跟其类似的抗原非常多，那么加入同型对照时，同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性，所以会造成这种现象，在细胞表面时如图所示。这个时候推荐使用其他阴性对照，如空白对照等。
三、补偿微球流式细胞仪的荧光补偿隔一段时间之后需要调整到适合的位置。如果荧光补偿没有调节好，会导致细胞分群不明显或者流式检测得到的结果图非常不漂亮，而且会影响到检测结果的不真实。荧光补偿的调节对初学者来说非常不容易掌握，同时，补偿调节是流式细胞术中比较难掌握的操作。尤其是一些不常见的标志检测时，需要经验非常丰富的流式操作者根据多年的经验判断调节补偿，才可以得到比较好的数据和图片。那么，现在不需要这么麻烦。因为补偿微球让一切变得更简单。BDCompBeads是专用于流式细胞仪多色分析的荧光补偿调整微球。它的实用性是在于克服了以往普通的做三色以上的流式分析时补偿难调、耗费样本（往往用待测样本单标来进行补偿调节）的缺点。它本身不携带任何荧光，借助于与客户自己的特异性荧光抗体孵育结合来调节补偿。它不但能象待测的样本细胞一样在同样的实验条件下固定、破膜等，操作起来很简单，灵敏度高，一致性好，使补偿更轻松更准确，而且最难得的是它最适合于多色分析（如五色、六色、七色等）和复合荧光素（如PE-Cy7、APC-Cy7等），因为这时的补偿往往难度较大。各型号的流式仪器均能使用。Compbeads使用后可以将流式的条件保存，方便下次做同样的荧光染色搭配时参考用。
...双抗体夹心法的一抗和二抗可以来源于同一种属么? 免疫学讨论版...123
2017-10-03
不是。二抗是指抗一抗的抗体，也就是抗体的抗体，一般因放大信号和特异性范围大易获得和制备应用广泛。
双抗无论是在免疫学还是细胞操作，细胞培养中都不与二抗等同。双抗可以是抗一种抗原的两个抗体，去双抗夹心法。也可以是抗不同类型反应的作用物，如抗凝剂素。一般指两种抗生素。
双抗无论是在免疫学还是细胞操作，细胞培养中都不与二抗等同。双抗可以是抗一种抗原的两个抗体，去双抗夹心法。也可以是抗不同类型反应的作用物，如抗凝剂素。一般指两种抗生素。
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