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NEB/NEBNext® Multiplex Oligos for Illumina® (96 Index Primers)/E6609S/384 reactions
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NEB/NEBNext® Multiplex Oligos for Illumina® (96 Index Primers)/E6609S/384 reactions
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DesignedforuseinlibraryprepforDNA,ChIPDNAandRNA(butnotSmallRNA),theNEBNextAdaptorsenablehigh-efficiencyadaptorligationandhighlibraryyields,withminimizedadaptor-dimerformation.Incorporatinganovelhairpinloopstructure,theNEBNextAdaptorligateswithincreasedefficiencytoend-repaired,dA-tailedDNA.TheloopcontainsaU,whichisremovedbytreatmentwithUSEREnzyme(acombinationofUDGandEndoVIII),toopenuptheloopandmakeitavailableasasubstrateforPCR.DuringPCR,barcodescanbeincorporatedbyuseoftheNEBNextindexprimers,therebyenablingmultiplexing.The968-baseindexprimersincludedinthiskitarepre-mixedwiththeuniversalprimerandarepackagedinasingle-use96-wellplatewithaPierceablefoilseal.NEBNextOligoscanbeusedwithNEBNextproducts,andwithotherstandardIllumina-compatIBLelibrarypreparationprotocols.


Figure1:
WorkflowdemonstratingtheuseofNEBNextMultiplexOligosforIllumina(96IndexPrimers)



FunctionallyValidated:EachsetofreagentsisfunctionallyvalidatedtogetherthroughconstructionandsequencingofgenomicDNAlibrariesontheIlluminaplatform.

LotControl:ThelotsprovidedintheNEBNextMultiplexOligosforIllumina(96IndexPrimers)aremanagedseparatelyandarequalifiedbyadditionalfunctionalvalidation.Individualreagentsundergostandardenzymeactivityandqualitycontrolassays,andalsomeetstringentcriteriaintheadditionalqualitycontrolslistedoneachindividualcomponentpage.

ReagentsSupplied

Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:

Storeat(°C)Concentration
NEBNext®AdaptorforIllumina®-20
USER®Enzyme-20
NEBNext®Index/UniversalPrimerMix(1-96)-20
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蚂蚁淘(www.ebiomall.cn)是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台, 该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁 淘搜索全球供应信息,找到合适的产品后在蚂蚁淘下单,然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、 运输到中国口岸,最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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中图法分类号与中图分类法查询生物科学属于Q类,医学类属于R类,可以直接转至Q或R类查询A 马克思主义、列宁主义、毛泽东思想A1 马 查看更多>
Saghai-Maroof MA, Soliman KM, Jorgensen RA, & Allard RW (1984) PNAS 81:8014-8018DNA successfully isolated from fungal species of Cochliobolus, Aternaria, a 查看更多>
Paragon Genomics公司介绍产品列表|代理商整理 查看更多>
I. Safety Procedures A. ChemicalsA number of chemicals used in this laboratory are hazardous. All manufacturers of hazardous materials are required by law to s 查看更多>
Materials 0.1M NaHC03 pH9 DMSO NHS-Biotin (N-Hydroxysuccinimidobiotin, Sigma #H-1759) PBS Procedure Dialyze the sample against carbonate buffer. After dialysis 查看更多>
Microtubule Spindowns for Visual Analysis Microtubule spindowns for visual analysis can be performed on single microtubules or microtubules nucleated from axon 查看更多>
2018-12-26
When we first started using X. tropicalis, in vitro fertilization had an extremely poor efficiency. However, with the careful selection of a mature male and th 查看更多>
1。细菌保存于穿刺培养物中:一般细菌保存于穿刺培养物可以维持两年。具体方法如下:用灭菌接种针挑取分散良好的单菌落,针缓慢穿过琼脂到达瓶底,连续几次,盖上瓶盖拧紧,做好标记 查看更多>
差减cDNA文库法[第一条链cDNA合成]1.合成第一条cDNA链时,所有试剂应按下列顺序依次加入:10×第一条链合成缓冲液 5.0μl10mM dNTP Mix(1.4μg/μl) 2.5μl(终浓度1.25mM)Linker primer(1.4μl,终浓度100μg/μl)DEPc H2ORNase block 查看更多>
Preparation of Fluorescent DNA Probe from mRNA: YeastLast updated: 3/29/99 Materials for 2 reactions (Cy3 & Cy5) Qty Order info Heat blocks, 42C & 70C 查看更多>
The scanning translation initiation model suggests that 40S ribosomal subunit preloaded with factors bind to the 5’ end of the mRNA near the cap. The 48S subu 查看更多>
2018-12-26
The tubby gene product is expressed in the brain and has been implicated by mouse genetics in obesity and other disorders such as blindness. Structural analys 查看更多>
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要工作了,接着一个老师用smart方法构建的CDNA文库做,单位的要求是一年之内发一篇SCI,不知cDNA文库都可以继续哪些工作,有哪些应用?
我大概了解的一下,cDNA文库可以用来做酵母双杂交,也可以做基因功能研究,有没有具体的课件或者文章可以了解呢?
网站在线客服软件回头客CRM有这些特点。
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网站在线客服是网络营销的基础,企业上网首先要做的就是网络营销,然后通过在线客服来实现上网的最终目的。网络营销手段层出不穷的今天,如何实实在在的留住网站访问者才是根本所在,发掘潜在用户、维护现有客户,才能实现网络营销的最终目的。在线客服系统的建设,应引起广大企业的关注。基于这种思路,我们的企业才能有付出必有回报。 目前,做得最好的网站在线客服系统是乐盈通客服系统。
我正在用clontech公司的SMART技术构建CDNA文库,我RNA提取用的TRIZOL,取的癌组织,标本离体后放冰盒,一小时后按比例加TRIZOL用剪刀剪碎,放-20过夜,其他步骤完全按说明进行.提的RNA跑胶还可以,ss-cDNA也还可以,可LD-PCR时就出不来.想请高手帮帮小弟.现附上电泳图.
附件里是我反转录的CDNA片段,过柱后,基本上去除了500bp以下的小片段。我用的是BDclontechCo的libraryconstructKit,我不是很清楚该选择哪几个管子的cDNA去装载体比较好?
DNAmark是TakaraCo的DL2000(2000,1000,750,500,200,100)。
谢谢各位用过此kit的战友指点!
基因组文库的类型有()_123
风生Ohg32起2017-12-07
cDNA文库
以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组。DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA

基因组文库
用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。
将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段,并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合,即基因组文库,它包含了该生物的所有基因。展开
目的基因来自真核生物,受体细胞为原核细胞,需要用CDNA文库。

基因组文库是一个比较笼统的概念。这个文库可以指某种真核生物的基因组,也可以指某种原核生物的基因组。实质是将某种生物的全部遗传信息贮存在一个受体菌群体中,做为目的基因的来源。
RNA干扰抗乙肝病毒123
quiller2021-08-05
原本不打算贴出这个贴子,主要是因为这方面还不太成熟。不知道有没有人了解更多一些,只想做个引子!

RNA干扰(RNAi)与乙肝.txt(10.4k)
如题!新开设SSH/全长CDNA文库子版。
凡有关抑制性差减杂交和全长cDNA文库构建的贴子,请发此子版!!


各位大侠帮帮忙
指点一些关于全长CDNA文库构建的知识

看了一些论文和文章还是挺迷惑的,希望有人指点一下各个步骤有什么要注意的,难点是什么

cDNA文库构建过程中,由总RNA反转录得cDNA和走mRNA路线得cDNA有什么影响吗?
哪个公司的试剂盒比较好?
(我做的是苔藓植物)
cDNA文库是通过RNA反转录得来的,真核生物含有内含子(即转录为RNA后会被剪掉不表达的部分),而原核生物不含内含子,所以cDNA文库适用于真核生物,基因组文库适用于原核生物

来源:生物谷2016-02-2610:26

2016年2月26日讯/生物谷BIOON/--药物的发现是一项非常艰巨的工作,其需要化学家们从数百万种化合物中筛选最终寻找最适合的那一个,而DNA技术或许就可以明显加速药物的发现之旅。

在麻省沃尔瑟姆市一个普通混凝土楼房二楼的实验室冰箱中保存着一个具有明确标识的检测管,该管中含有天文学数字尺度那么多的混合物,而这些众多的化合物属于制药公司葛兰素史克(GSK)所有,其中包含有1万亿个特殊的DNA标记的分子,其数量是银河系中行星数量的10倍。

这些文库可以帮助制药公司和生物技术公司快速鉴别出可以和疾病蛋白配对的候选药物,尤其是那些很难靶向作用的参与疾病的特殊蛋白质;药物的发现通常都从科学家们开始组装大量的化合物文库开始,随后研究者就会检测这些化合物靶向作用蛋白的效力,这些化合物通常会被加入到每一个包含靶点的孔中来观察是否化合物是否会影响这些靶点的活力,这种方法称之为高通量筛选(high-throughputscreening,HTS),其通常是利用机器人设备自动化地对数百万种化合物进行检测,但目前这种技术的花费非常昂贵,而且有时候并不总是会成功。

过去一些年里,药物化学家已经通过利用条形码样的DNA来对化合物进行标记从而帮助发现更加有用且有效的化合物,这些DNA编码的文库通常会提供多种药物寻找的优势;这样一来研究者们就会将所有DNA标记的分子置于单一的混合制剂中,随后引入靶向蛋白,这样一来结合靶向蛋白的任何一种化合物就会被轻松鉴别出来,而这都得感谢DNA条码的帮助。1992年科学家们首先提出DNA编码文库,DNA编码文库并不会取代高通量筛查技术,很多制药公司目前已经重金投资到了HTS中,而且利用DNA编码技术有时候并不能合成一些化合物,但相比较而言DNA编码技术却会为科学家们提供一种快速、高效且廉价地寻找结合靶点的化合物的技术,比如泛蛋白连接酶,其会对蛋白进行标记并进行处理,同样也可以在癌症疗法中被靶向标记。

大即是美(Bigisbeautiful)

当前GSK公司拥有世界上最大的DNA编码文库(DNA-encodedlibrary),该文库是一般公司200万化合物高通量筛查文库的50万倍。构建DNA编码文库有很多种方法,最大的一种,就像GSK公司的,其是通过利用DNA记录的方法来进行的。化学结构单元,比如氨基酸、胺类和羧酸类,其都可以被合成同时通过化学反应被标记以“DNA条形码”,第二种结构元件就会加入到反应混合物中从而制造一种新分子,同时DNA条形码就会被加长;通过加入四种元件,化学家们就可以开发出药物样的分子,由于存在数千种的结构元件,因此潜在的组合将会是非常巨大的。

相比常规的HTS文库而言,DNA编码文库非常容易维护且使用,一种DNA编码文库可以被储存于单一的检测管中,而HTS文库则需要机器人设施,而相应的设施需要足够大才可以储存每一种化合物。

未来DNA编码文库不仅将会更大更加广泛,而且还会提供很多机会帮助快速应用于临床中去,随着常规筛查的进行,药物化学家们有时候不得不花费数年时间来调节化合物使其变得特殊且安全地用于临床中。相比之下,大尺寸的DNA编码文库意味着科学家们可以寻找到更加适合临床使用的化合物,尽管有些化合物仍然需要优化,但至少科学家们距离成功已经很近了。

其它生物技术公司也相继表示对DNA编码文库非常感兴趣,这些公司不仅利用DNA标签来鉴别特殊化合物,而且以其作为模板来制造新的DNA标签,DavidLiu是来自哈佛大学的一位化学家,他的学生开发出了一种“DNA-模板”方法,同时利用该方法构建了特殊环状分子的文库(macrocycle,包含15个原子以上的大环),这些大型稳定的环状分子可以在多个位点同靶点相互作用,从而增强结合反应的特异性。(GSK和X-Chem公司的DNA编码文库中拥有大量的macrocycle分子)。

首先Liu开发了一种单链DNA模板作为向导,随后将DNA标记的结构元件加入到反应器中,依赖于DNA碱基配对,在物理性上将标记的结构元件从一个结合到另一个,最终的反应就会将线性的结构元件转化成为环状的macrocycle分子,而每一个该分子都会被限制成为特殊的DNA条形码。目前Liu的团队构建的包含14000个大分子的文库已经带来了部分成功,2014年,他们就报道发现了一种特殊稳定的小分子可以有效阻断胰岛素降解酶类(IDE),该酶和2型糖尿病直接相关,为此研究者们还准备研究IDF在健康和疾病中所扮演的角色。

甜蜜的筛选(SweetScreens)

一旦文库建成,下面的乐趣就是鉴别可以吸附靶点的分子了;很多研究依赖于“亲和筛选”来寻找目的化合物,正因为如此他们工程化操作蛋白质使其靶向作用一系列纯化的标签,随后利用纯化标签离开结合对,并且通过包含文库的混合体,最后一步就是利用DNA测序仪来阅读和小分子相关的DNA标识符,这种方法最终就会产生大量的靶向蛋白。但基于亲和的方法往往尤其不足之处,“笨拙”的DNA标记有时候反而会阻碍其同靶点的反应,同时就会使得很多潜在的候选化合物流失,但因为DNA编码文库非常巨大,因此这些损失通常情况下可以被忽略不计;然而有问题的是小分子和其标签通常会结合到纯化柱上,这样就会产生假阳性的结果,纯化的标签也会被靶向蛋白的结构所干扰,从而引入不可靠的数据。

当然很多公司都相继解决了上述问题,Vipergen公司就是其中一个,该公司拥有5000万个分子的DNA模板文库,它们也希望开展这项浓缩的策略;公司的行政总裁NilsHansen表示,试想一下,我们可以冻结蛋白混合物文库并且将其切割成为非常小的小方冰块,如果这些冰块足够小,每一个都包含有单一的靶向蛋白,那么在这个尺寸下进行靶点结合的小分子就会在包含靶点的小方冰块中进行持续过度反应。

当前利用游离漂浮的可溶性蛋白进行DNA编码文库的筛选非常好,但很多潜在的药物靶点都嵌合到了细胞表面,这就使得利用传统的亲和筛查技术变得不太可能,比如大约有40%的被批准的药物都可以靶向作用膜结合的G蛋白偶联受体,因为这些受体分子通常在细胞外部感知分子的存在,为此筛选膜结合蛋白的技术就必须更新换代。其中一种方法就是将DNA编码的文库同完整的可以过度表达膜结合靶点的细胞混合,随后小型分子就会在细胞表面同靶点进行结合;当研究者冲洗掉未结合的文库后,他们就可以通过加热细胞并且阅读被洗脱的DNA标签来鉴别出结合小型分子;在这一方面GSK公司已经利用该方法鉴别出了一系列潜在的受体抑制剂,这些受体参与到了精神分裂症及中枢神经系统障碍的发病中。

当然X-Chem公司也开始看到了进行膜结合蛋白筛查的商机,Wagner表示,从历史观点上来讲,我们的程序主要还是利用可溶性的蛋白,但考虑到最近数据的转变我们已经开发出了相对困难的膜结合蛋白。

未来DNA编码文库的规模还会扩大,而且新型的筛选方法也会打开未知的生物空间,DNA编码文库也将会成为帮助制药公司探索发现新药的支柱之一。(生物谷Bioon.com)

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