
Description:


The NEBNext® ChIP-Seq Library Prep Master Mix Set for Illumina® contains enzymes and buffers in convenient master mix formulations that are ideally suited for sample preparation for next-generation sequencing. Each of these components must pass rigorous quality control standards and are lot controlled, both individually and as a set of reagents.

Functional Validation
Each set of reagents is functionally validated together through construction and sequencing of a DNA library on the Illumina sequencing platform.
Lot Control
The lots provided are managed separately and qualified by additional functional validation. Individual reagents undergo standard enzyme activity and quality control assays, and also meet stringent criteria in the additional quality controls listed on each individual component page
Reagents Supplied
The following reagents are supplied with this product:
Store at (°C) | Concentration | |
NEBNext End Repair Reaction Buffer | 10X | |
Klenow Fragment (3´→5´ exo-) | ||
NEBNext dA- Tailing Reaction Buffer | 10X | |
Quick T4 DNA Ligase | -20 | |
NEBNext Quick Ligation Reaction Buffer | -20 | 5X |
NEBNext End Repair Enzyme Mix | ||
NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR Master Mix | -20 | |
NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix (SAMPLE) | 2X |
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以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组。DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA
基因组文库
用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。
将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段,并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合,即基因组文库,它包含了该生物的所有基因。展开
已经在mirbase数据库下载水稻的所有miRNA序列,可以比对某种昆虫的转录组文库寻找靶基因吗?
可以用targetscan或者miRwalk网站吗?有什么方法吗?
多谢了!
文库数据可以用excel表格打开,具体格式如下:
>zsbca0_007230.z1.scf
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
>zsbca0_001638.z1.scf
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
>zsbca0_010217.z1.scf
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
………………
酵母单杂交技术最早是1993年由Li等从酵母双杂交技术发展而来,通过对报告基因的表型检测,分析DNA与蛋白之间的相互作用,以研究真核细胞内的基因表达调控。由于酵母单杂交方法检测特定转录因子与顺式作用元件专一性相互作用的敏感性和可靠性,现已被广泛用于克隆细胞中含量微弱的、用生化手段难以纯化的特定转录因子。
酵母单杂交(Yeast one-hybrid)是根据DNA结合蛋白(即转录因子)与DNA顺式作用元件结合调控报道基因表达的原理,克隆与靶元件特异结合的转录因子基因(cDNA)的有效方法。其理论基础是:许多真核生物的转录激活子由物理和功能上独立的DNA结合区(DNA-binding domain BD)和转录激活区(Activation domain AD)组成,因此可构建各种基因与AD的融合表达载体,在酵母中表达为融合蛋白时,根据报道基因的表达情况,便能筛选出与靶元件有特异结合区域的蛋白。理论上,在单杂交检测中,任何靶元件都可被用于筛选一种与之有特异结合区域的蛋白。
cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA。
真核生物基因组DNA十分庞大,其复杂程度是蛋白质和mRNA的100倍左右,而且含有大量的重复序列. 采用电泳分离和杂交的方法,都难以直接分离到目的基因.这是从染色体DNA为出发材料直接克隆目的基因的一个主要困难。
高等生物一般具有10^5种左右不同的基因,但在一定时间阶段的单个细胞或个体中,都仅有15%左右的基因得以表达,产生约15000种不同的mRNA分子.可见,由mRNA出发的cDNA克隆,其复杂程度要比直接从基因组克隆简单得多。
cDNA文库在研究具体某类特定细胞中基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方便具有特殊的优势,从而使它在个体发育、细胞分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究中具有更为广泛的应用价值,是研究工作中最常使用到的基因文库。
1、属性自定义
作为筛选的内容,完全自定义的属性,满足您快速查询的特殊要求,新建栏目、新增分类,通过设置属性的使用状况和显示顺序,编辑符合您企业需求的最佳属性配置。
2、多标签自定义
在进行客户分类管理时,可添加多个自定义标签,分门别类后根据客户重要性选择标签颜色。方便您的产品经理进行一对一需求分析和功能规划,针对不同类型客户进行差异化服务。
3、庞大的数据分析
回头客提供销售统计、订单统计、产品统计和员工绩效统计的四大图表,分别从销售全局、客户消费情况、产品销售情况、员工绩效四大维度全方位展示销售深度数据。
4、详细的联系记录
详细记录每一次与客户的互动,并可自行制定联系计划,查询时可按下一次计划联系时间或最近一次联系时间自选排序,保证与客户保持周期性的联系。
5、岗位层级显示
默认通过岗位层级展示相应数据,如部门主管可查看部门全部联系记录、组长可查看小组全部联系记录,层级管理,简单便捷。
网站在线客服是网络营销的基础,企业上网首先要做的就是网络营销,然后通过在线客服来实现上网的最终目的。网络营销手段层出不穷的今天,如何实实在在的留住网站访问者才是根本所在,发掘潜在用户、维护现有客户,才能实现网络营销的最终目的。在线客服系统的建设,应引起广大企业的关注。基于这种思路,我们的企业才能有付出必有回报。 目前,做得最好的网站在线客服系统是乐盈通客服系统。
cDNA是DNA转录成RNA再逆转录获得的,而在转录时,原DNA上的内含子和非编码区都会被加工切掉,只剩下原DNA编码区上的外显子对应的RNA片段,再逆转录的话,得到的cDNA就跟原DNA不同了。
所以要基因组测序,提供cDNA文库是不够的
用,靠.规模析文库克隆.
1)同源探针:至少含所需cDNA克隆部确切序列.用于部克隆离cDNA文库全克隆.
2)部同源探针:探针序列与所要筛选cDNA克隆序列相关相同.用于克隆家族基.
3)总cDNA探针:
通反转录酶均匀掺入放射性核苷酸或通总或级离poly(A)+mRNA进行末端标记获cDNA探针.
cDNA扣除探针:
第种mRNA制备cDNA探 针, 连续与20倍量第二种mRNA杂交;
收未杂交cDNA探针, 再与100倍量第种mRNA杂交, 使原mRNA些特异序列高度富集.
* 主要用于探测cDNA文库与调节水平所差别mRNA克隆.
5)合寡核苷酸探针
2 特异性免疫检测
cDNA表达文库,目基表达产 物能与特异性抗体发免疫反应,通酶加检测
3 cDNA克隆同胞检测
cDNA文库若干组含10-100克隆易于处理亚cDNA文库,每组亚cDNA文库进行检测,鉴定阳性库再断其更细库进行检测,直获阳性单克隆.
4 cDNA克隆确证
cDNA克隆含编码某特定蛋白质完整氨基酸序列放读框.
第四节 目基离
外源基:
插入载体内特定片段基.
目基:
些已或者准备要离,改造,扩增或表达特定基或DNA片段.图" class="ikqb_img_alink">

