求助！慢病毒载体转染细胞、筛选验证等问题
2021-08-08
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kangaroo0513
用户
构建载体可以丢给我~~~然后可以通过转染载体或者病毒感染的方式，导入你的sh或者过表达，然后用qPCR以及WB分别验证ran水平的干扰效率及蛋白水平的敲降效率。需要注意的是，RNA下降蛋白不一定100%下降。因为最终功能体是蛋白，因此我建议你做WB。如果后续处理时间较长，或者感染效率较低，建议你挑稳转株。如果后续处理时间很短（几天）并且感染效率很高（>80-90%）那就不需要稳转株，直接用这个细胞池就可以。有神马问题可以站短我qq。
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Fubio-GG
用户展开引用王芳媛1991现要针对细胞中的某种抑制蛋白IF1(基因大概300多bp)构建干扰以及过表达的慢病毒载体，如果找公司构建3个干扰的慢病毒，收到之后需要筛选出干扰效率最高的，请问该如何筛选？如何判断其干扰效率？过表达的又该怎么办？做完转染之后，我需要用TNF-α处理细胞，然后检测细胞的增殖、凋亡以及抑制蛋白IF1的表达情况，这样的话我是不是需要构建稳定株？(新手，且无人指导，所以有很多问题)还望有前辈可以多多指点迷津......收到病毒之后感染细胞，感染3-4天收集细胞，进行QPCR检测，挑选干扰效率最高的那个，一般在（70以上），而后使用这个病毒进行实验，在这个同时可以筛选稳定株。过表达感染细胞之后同样操作，检测可以使用QPCR检测或者标签抗体检测，一般QPCR倍数两倍以上。
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dxy_syhp2r9e
用户分享你一份干货资料：慢病毒生产及使用操作手册
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