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NEB/pTXB1 Vector/N6707S/10 μg
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IMPACTCitationspTXB1isanE.coliexpressionvectorintheIMPACT™Kit(NEB#E6901)(1,2).Itisdesignedforthein-frameinsertionofatargetgeneintothepolylinkerupstreamoftheMxeintein/chitinbindingdomain(27kDa)(2,3,4,5).Thefusionproteinisboundtochitinbeadsandthethiol-inducedcleavageactivityoftheinteinreleasesthetargetprotein.pTXBvectorsarerecommendedforuseinintein-mediatedproteinligationandC-terminallabeling(2).Thisdoublestrandedvectoris6,706basepairsinlength.
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2021-07-18
上海酶研生物科技有限公司在发布的载体pCAMBIA1381供应信息，浏览与载体pCAMBIA1381相关的产品或在搜索更多与载体pCAMBIA1381相关的内容。 查看更多
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2021-08-13
基因载体作为基因导入细胞/动物的工具，应用范围几乎涉及所有的生物医药领域。在分离纯化限制性内切酶、合成PCR引物已成产品化的今天，很多实验室仍亲自构建载体，却往往耗费大量的时间、精力与财力。 为了加速推进载体产品化，帮助科研工作者节省时间与精力，赛业生物结合IT与生物信息学的传统强项，于2011年开始筹备载体设计线上化计划，并在2014年成功搭建了第一个互联网+基因载体的智慧生产平台VectorBuilder，把... 查看更多
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2021-09-18
淄博恒环铝业有限公司在发布的氧化铝催化剂载体供应信息，浏览与氧化铝催化剂载体相关的产品或在搜索更多与氧化铝催化剂载体相关的内容。 查看更多
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2017-10-13
上海吉凯基因化学技术有限公司在发布的Easy-shRNA质粒载体产品供应信息，浏览与Easy-shRNA质粒载体产品相关的产品或在搜索更多与Easy-shRNA质粒载体产品相关的内容。 查看更多
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2021-07-16
北京五加和分子医学研究所有限公司在发布的慢病毒载体服务供应信息，浏览与慢病毒载体服务相关的产品或在搜索更多与慢病毒载体服务相关的内容。 查看更多
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2018-07-15
产品名称： 人腺相关病毒载体（AAV）ELISA Kit（elisa试剂盒） 国内优质ELISA厂家 产品简介： 人腺相关病毒载体（AAV）ELISA Kit（elisa试剂盒） 国内优质ELISA厂家 ELISA试剂盒 国产现货 SIXIN生产的优质ELISA试剂盒直供全国。http://www.aatbio.com.cn/elisa/ 人腺相关病毒载体（AAV）ELISA Kit（elisa试剂盒） 国内优质ELISA厂家 进口试剂 查看更多
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2018-07-15
【分子克隆和质粒载体构建服务】生物实验,分子生物学实验技术,BIOLEAF.实验技术服务 tosciencebio@126.com 选实验技术服务，还在上海通善。 您的选择，就是对我们公司的肯定。 相信通善，相信自己，我们有太多优势，让您在众多信息流中独具慧眼的找到我们。【分子克隆和质粒载体构建服务】生物实验,分子生物学实验技术,BIOLEAF.实验技术服务 tosciencebio@126.com 一，通善的服务与态度 公司的宗旨 查看更多
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2018-08-10
通过位点特异的D N A 重组改变完整细胞和有机体的基因组已经成为一种重要的基因转移方法。基因转移和同源重组引起的D N A 修饰一旦整合进目的基因组就不会再移动。与之相反，转移的D N A 片段如果包含外源重组酶目的序列，则可以进一步修饰之前发生变化的基因组结构，从而提高了基因转移的实用性，加强了实验的设计。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」 查看更多
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2018-08-08
本章将会讨论昆虫来源的杆状病毒展示载体的设计及其潜在的用途。建立展示库的一般步骤和这些基因递送载体的特性也将会在本章中进行阐述。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」 查看更多
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2021-09-03
大家是否在实验中经常遇到载体构建的各种问题，浪费大量的时间和精力，各种各样的问题让人头疼，小编作为科研老司机特意为各位科研君整理了载体构建实验常见问题及解决方法，希望能够帮助到大家。1. PCR载体构建大部分时候都要通过PCR的方法获取目的片段，扩增PCR的时候大家尽量选用高保真的PCR酶来进行扩增，扩增之前我们首先要了解目的基因序列信息。其次高质量的模板对PCR成功与否也很重要，以质粒作为模板的PCR相对来说最好扩增，基因组DN... 查看更多
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2018-03-08
成都溶海生物技术有限公司在发布的pGEM®-T Easy Vector System I经典T载体供应信息，浏览与pGEM®-T Easy Vector System I经典T载体相关的产品或在搜索更多与pGEM®-T Easy Vector System I经典T载体相关的内容。 查看更多
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2018-08-08
本章将会讨论昆虫来源的杆状病毒展示载体的设计及其潜在的用途。建立展示库的一般步骤和这些基因递送载体的特性也将会在本章中进行阐述。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」 查看更多
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【求助】关于3'UTR区序列扩增的问题——急！急！急！ 核酸基因...123
热血永狂03512021-07-28
目的针对促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver-1,PRL-1)3’端非翻译区(3-untranslatedregion,3’UTR)构建PRL-1荧光素酶报告基因载体及突变体,为研究miR-339-5p在结肠癌中调控其靶基因PRL-1提供有效的工具。方法 PCR扩增包含PRL-1的3’UTR的DNA片段,克隆至荧光素酶载体psiCHECK-2,构建psiCHECK-2/PRL-13’UTR载体;经双酶切及测序鉴定后,对psiCHECK-2/PRL-1 3’UTR重组质粒"种子区"的7个碱基进行定点突变,构建psiCHECK-2/PRL-1 3’UTR突变载体。结果克隆获得的psiCHECK-2/PRL-1 3’UTR载体中DNA片段大小及序列与GenBank报道的一致,且插入方向正确。"种子区"的7个碱基定点突变成功。结论成功构建了含PRL-1基因3’UTR区的荧光素酶报告基因载体及突变体,可用于后续功能研究。
RNA干扰的详细实验步骤_实验方法_123
小森尔2017-11-07
siRNA表达载体构建好后，即可进行RNA干扰主体实验。RNA干扰主体实验的重点在于： 按照nature的标准，一个严格的RNAi介导knockdown实验要有6个对照：⒈转染试剂对照（监控转染及培养条件对结果的影响）
【求助】pEGFPN1载体的问题 急啊123
贫乳圆香☆1032017-11-10
与以往常用的报告基因相比，GFP具有以下优点：
①在荧光显微镜下，用波长约490 nm的紫外线激发后，即可观察到绿色荧光，直接、简捷、便于检测；
②无需任何的作用底物或共作用物,检测的灵敏度不受反应效率的影响，保证了极高的检出率；
③蛋白本身性质稳定；
④可在多种异源生物中表达且无细胞毒性；
⑤其基因片段长度较小(约717 bp)，易于构建融合蛋白，且融合蛋白仍能保持荧光激发活性，为研究其他基因表达产物的分布提供了方便。
pEGFP是一种优化的突变型GFP，使其产生的荧光较普通GFP强35倍，大大增强了其报告基因的敏感度。pEGFP与其他蛋白的融合表达已有很多成功的例子，而且其N及C端均可融合，并不影响其发光。
pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因，如上图质粒图谱所示。
pEGFP-N1载体具有以下几方面特点：
①从结构上看，该质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是保证目的基因稳定表达的因素之一；
②含有高效的功能强大的启动子SV40和PCMV，可以使目的基因在增殖的细胞中稳定表达；
③具有多克隆位点，便于目的基因的插入；
④该载体具有neo基因，可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。
这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。向左转|向右转
①在荧光显微镜下，用波长约490 nm的紫外线激发后，即可观察到绿色荧光，直接、简捷、便于检测；
②无需任何的作用底物或共作用物,检测的灵敏度不受反应效率的影响，保证了极高的检出率；
③蛋白本身性质稳定；
④可在多种异源生物中表达且无细胞毒性；
⑤其基因片段长度较小(约717 bp)，易于构建融合蛋白，且融合蛋白仍能保持荧光激发活性，为研究其他基因表达产物的分布提供了方便。
pEGFP是一种优化的突变型GFP，使其产生的荧光较普通GFP强35倍，大大增强了其报告基因的敏感度。pEGFP与其他蛋白的融合表达已有很多成功的例子，而且其N及C端均可融合，并不影响其发光。
pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因，如上图质粒图谱所示。
pEGFP-N1载体具有以下几方面特点：
①从结构上看，该质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是保证目的基因稳定表达的因素之一；
②含有高效的功能强大的启动子SV40和PCMV，可以使目的基因在增殖的细胞中稳定表达；
③具有多克隆位点，便于目的基因的插入；
④该载体具有neo基因，可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。
这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。向左转|向右转
腺病毒过表达体系_腺病毒过表达体系【价格,厂家,图片,批发,采购】123
lcy20152021-08-03
如题，各位朋友，想问一下现在找公司做腺病毒载体，过表达，沉默各一个大概多少钱？之前问了几个公司，都要2万多，感觉是不是太贵了，并且还有一点不懂的是病毒的量10的9次方，大多数是毒株？为什么？并且病毒的含量怎么测呢，因为是新手，问题可能很幼稚
构建基因表达载体的四个基本组件是( )A.复制原点.抗生素基因.内含...123
纞丄微笑2021-09-15
基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，而基因表达载体的本质是DNA，组成元素有碳氢氧氮磷，其中氮在含氮碱基中，磷在磷酸基团中
完整的表达载体必须包括：
1、复制子,在细菌中扩增时所必须.
2、启动子,目的基因在细菌或细胞中转录所必须,转录了才能翻译,是谓“表达”.
3、原核筛选标记,细菌增菌所必须.
4、真核筛选标记,如果是真核表达,就是必须的.
5、多克隆位点,即酶切位点,插入目的片段的区域.
6、其他所需构件,可视实验设计情况而选用现成载体或在载体上自行添加.
另：表达的起始和终止,在目的基因上附带起始密码子和终止密码子.
完整的表达载体必须包括：
1、复制子,在细菌中扩增时所必须.
2、启动子,目的基因在细菌或细胞中转录所必须,转录了才能翻译,是谓“表达”.
3、原核筛选标记,细菌增菌所必须.
4、真核筛选标记,如果是真核表达,就是必须的.
5、多克隆位点,即酶切位点,插入目的片段的区域.
6、其他所需构件,可视实验设计情况而选用现成载体或在载体上自行添加.
另：表达的起始和终止,在目的基因上附带起始密码子和终止密码子.
【求助】表达载体为什么要构建正义和反义? 形态学与生理生化...123
▇爱新觉罗▇厐2017-11-07
表达载体构建正义和反义,一般用于基因功能的研究,正义为强势表达
(forced expression)或过表达(overexpression),以观察基因表型,反义则是用来抑制基因表达,以观察在目的基因的表达受到抑制的情况下表型的变化
(forced expression)或过表达(overexpression),以观察基因表型,反义则是用来抑制基因表达,以观察在目的基因的表达受到抑制的情况下表型的变化
病毒怎么研发的（世界第一支病毒载体的基因治疗抗肿瘤药物是由哪个...123
2017-11-06
世界上第一支病毒载体的基因治疗抗肿瘤药物是由哪个公司研发生产的
慢病毒载体的启动子报告基因 核酸基因技术讨论版论坛123
feifei832021-08-24
请教一下，一般做启动子报告基因检测，载体用pGL3,pGL4双荧光报告基因质粒，但pGL3,pGL4都只能做瞬时转染，我的细胞（不想用293做实验）质粒转染后都会死很多，还要加上一些处理因素（比如药物，饥饿等），细胞状态更不好了。所以想找一个慢病毒骨架的报告基因质粒。
上网查了下，SBI的pGreenFire1和Genecopia的Gluc-ON是慢病毒质粒。
1.pGreenFire1可以检测Luc和GFP，但用什么做内参呢？查了下文章，有的文章检测Luc的时候同时检测一个MTS读数做内参；另外有一篇文章用qPCR的方法检测了GFP和GAPDH，用GAPDH做内参。不确定这样是不是正确呢？
2.Gluc-ON检测的是分泌型的Gluc，载体上还有分泌型的碱性磷酸酶做内参。
不知有没有哪位以前用过这两个质粒的？文章用这两个质粒的都不多，不知投稿的时候会不会被质疑？
RNA干扰载体的构建的实验流程123
血刺SC3422017-11-06
在RNA干扰实验中
首先需要构建dsRNA表达载体
将这种载体导入受体细胞中后
表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA
引起具有相同序列的mRNA发生讲解
导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质
所以个体会表现出功能缺失表型
构建表达载体通常选用dsRNA
需要注意的一些方面是
dsRNA序列中GC的含量要小于50%
高GC含量会降低RNAi的效果
选定的dsRNA序列应通过搜索数据库确保与其他基因无同源性
以避免对其他同源性基因表达的抑制
不同区域的dsRNA具有不同的基因沉默效果
可同时构建两个以上针对同一基因不同靶区域的dsRNA表达载体
还要充分考虑siRNA的结构特征
siRNA与mRNA的同源程度对RNAi有明显影响
启动子区或者编码区与siRNA同源的基因受siRNA抑制
但siRNA在动物细胞中对mRNA的前体没有影响
所以含非编码区序列的dsRNA不会引起RNAi
而且在构建表达载体时
经常使用U6启动子等RNA聚合酶Ⅲ能够识别的启动子序列
最后将其转入到质粒中
这里说的只是一个简单的过程
总的来说构建表达载体是个比较复杂的过程
如果要知道详细的技术
建议还是去看书吧
这里是说不清的
首先需要构建dsRNA表达载体
将这种载体导入受体细胞中后
表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA
引起具有相同序列的mRNA发生讲解
导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质
所以个体会表现出功能缺失表型
构建表达载体通常选用dsRNA
需要注意的一些方面是
dsRNA序列中GC的含量要小于50%
高GC含量会降低RNAi的效果
选定的dsRNA序列应通过搜索数据库确保与其他基因无同源性
以避免对其他同源性基因表达的抑制
不同区域的dsRNA具有不同的基因沉默效果
可同时构建两个以上针对同一基因不同靶区域的dsRNA表达载体
还要充分考虑siRNA的结构特征
siRNA与mRNA的同源程度对RNAi有明显影响
启动子区或者编码区与siRNA同源的基因受siRNA抑制
但siRNA在动物细胞中对mRNA的前体没有影响
所以含非编码区序列的dsRNA不会引起RNAi
而且在构建表达载体时
经常使用U6启动子等RNA聚合酶Ⅲ能够识别的启动子序列
最后将其转入到质粒中
这里说的只是一个简单的过程
总的来说构建表达载体是个比较复杂的过程
如果要知道详细的技术
建议还是去看书吧
这里是说不清的
RNA干扰的RNA干扰主体实验是怎样的呢? – 手机爱问123
猥琐哥5Px2017-11-25
siRNA表达载体构建好后，即可进行RNA干扰主体实验。
RNA干扰主体实验的重点在于： 按照nature的标准，一个严格的RNAi介导knockdown实验要有6个对照：
⒈转染试剂对照（监控转染及培养条件对结果的影响）；
⒉nonsense siRNA对照（监控外源核酸本身对结果的影响）；
⒊positive siRNA对照（监控假阴性）；
⒋技术重复对照（也叫off-target 对照，也就是利用至少2个靶点的siRNA同时实验，2个siRNA互为off-target control，当两者的表型相同时，才有可能是特异性的knockdown效应）；
⒌rescue 对照（knockdown之后做超表达，看是否有性状的逆转，这也是为了说明knockdown的特异性）；6.全表达组扫描对照（就是转录/表达芯片扫描，以最终确定表型不是由于off-target造成）。
实际实验中，全表达组扫描对照很少有文献涉及。其它几个对照中，1,2两种对照即所谓的空白细胞对照、NC对照，基本是所有杂志都要求具备的。4,5两种对照，主要是为了解决off-target效应，选做一种即可，一般建议选5，涉及的实验即所谓的“RNA干扰回复实验”， 一般应该从mRNA水平、蛋白质水平、细胞表型水平三个层次来检测干扰效率。
mRNA水平：RT-PCR、Real-time PCR；蛋白质水平：Western-blot、ELISA、免疫组化；细胞表型水平：MTT、克隆形成实验、流式细胞检测、细胞小室实验等。RNA干扰效率在动物模型上的进一步验证（体内） 动物模型实验可以采取“体内法”和“体外法”。
体内法，即先做裸鼠成瘤模型，再将质粒或病毒导入裸鼠，检测RNA干扰效果。此法操作复杂，对质粒和病毒产品的质和量要求都较高，但是比较贴近实际，说服力较显著。体外法，即先将质粒或病毒导入肿瘤细胞，再将肿瘤细胞导入动物体内，然后检测RNA干扰效果。此法操作较简单，对质粒和病毒产品的质量要求较低，所以为大多数文献所采用。建议采用此方法来进行动物模型水平的实验。向左转|向右转
RNA干扰主体实验的重点在于： 按照nature的标准，一个严格的RNAi介导knockdown实验要有6个对照：
⒈转染试剂对照（监控转染及培养条件对结果的影响）；
⒉nonsense siRNA对照（监控外源核酸本身对结果的影响）；
⒊positive siRNA对照（监控假阴性）；
⒋技术重复对照（也叫off-target 对照，也就是利用至少2个靶点的siRNA同时实验，2个siRNA互为off-target control，当两者的表型相同时，才有可能是特异性的knockdown效应）；
⒌rescue 对照（knockdown之后做超表达，看是否有性状的逆转，这也是为了说明knockdown的特异性）；6.全表达组扫描对照（就是转录/表达芯片扫描，以最终确定表型不是由于off-target造成）。
实际实验中，全表达组扫描对照很少有文献涉及。其它几个对照中，1,2两种对照即所谓的空白细胞对照、NC对照，基本是所有杂志都要求具备的。4,5两种对照，主要是为了解决off-target效应，选做一种即可，一般建议选5，涉及的实验即所谓的“RNA干扰回复实验”， 一般应该从mRNA水平、蛋白质水平、细胞表型水平三个层次来检测干扰效率。
mRNA水平：RT-PCR、Real-time PCR；蛋白质水平：Western-blot、ELISA、免疫组化；细胞表型水平：MTT、克隆形成实验、流式细胞检测、细胞小室实验等。RNA干扰效率在动物模型上的进一步验证（体内） 动物模型实验可以采取“体内法”和“体外法”。
体内法，即先做裸鼠成瘤模型，再将质粒或病毒导入裸鼠，检测RNA干扰效果。此法操作复杂，对质粒和病毒产品的质和量要求都较高，但是比较贴近实际，说服力较显著。体外法，即先将质粒或病毒导入肿瘤细胞，再将肿瘤细胞导入动物体内，然后检测RNA干扰效果。此法操作较简单，对质粒和病毒产品的质量要求较低，所以为大多数文献所采用。建议采用此方法来进行动物模型水平的实验。向左转|向右转
克隆载体与表达载体 123
浔子诜评842017-11-05
表达载体是在克隆载体的基础上增加了表达元件，如启动子，终止子等
【交流】请教一个有关报告基因的启动子载体构建问题!_问答详情_...123
不言佳士2021-09-19
各位战友，请教一下问题，就是大家在构建报告基因的启动子区时，是如何选定启动子区的长度呢？
第二个问题是不是构建的启动子区均要有一个TATA盒的结构在里面，不然构建的启动子如何就能驱动LUC的表达呢？
第三个问题是，如果我们在构建时长度延至ATG之后100－200BP的启动子是否会影响LUC的表达呢？
谢谢！
第二个问题是不是构建的启动子区均要有一个TATA盒的结构在里面，不然构建的启动子如何就能驱动LUC的表达呢？
第三个问题是，如果我们在构建时长度延至ATG之后100－200BP的启动子是否会影响LUC的表达呢？
谢谢！
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