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NEB/pMAL™-p5X Vector/N8109S/10 μg
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Description:
ThevectorpMAL-p5Xisdesignedtoproducemaltose-bindingprotein(MBP)fusions,wheretheproteinofinterestcanbecleavedfromMBPwiththespecificproteaseFactorXa(NEB#P8010).MBPfusionsmadewiththisvectorincludeanN-terminalsignalsequence,sothefusionproteinisdirectedtotheperiplasm.TheMBPhasbeenengineeredfortighterbindingtoamyloseresin.
AgeneoropenreADIngframeisinsertedintoarestrictionsiteofthevectorpolylinker,inthesametranslationalreadingframeasthemalEgene(encodingmaltose-bindingprotein).Thefusionproteinthusproducedcanbepurifiedbyamyloseaffinitychromatography.ThesequencecodingforthefouraminoacidsIle-Glu-Gly-ArgispresentjustupstreamoftheXmnIsite.Thisallowstheproteinofinteresttobecleavedfrommaltose-bindingproteinwiththespecificproteaseFactorXa.FragmentsinsertedintheXmnIsite(cleavesGAAGG↓ATTTC)willproduceafusionproteinthat,afterFactorXacleavage,containsnovector-derivedresiduesontheproteinofinterest.
VisitDNASequencesandMapspageformoreinformation.
DNASUandAddgenearecentralrepositoriesforplasmidclonesandcollectionsthatmayalsobehelpful.
Notes:
NEB10-betaE.coli(HighEfficiency)(NEB#C3019)isrecommendedforpropagationandsubcloning.NEBExpressCompetentE.coli(HighEfficiency)(NEB#C2523)isrecommendedforexpressionusingthisvector.ThisvectorconveysampicillinresistanceforpropagationinE.coli.蚂蚁淘电商平台
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
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淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
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上海盖宁生物科技有限公司在发布的pGIPZ empty载体供应信息，浏览与pGIPZ empty载体相关的产品或在搜索更多与pGIPZ empty载体相关的内容。 查看更多
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2018-04-08
北京海创科业生物科技有限责任公司在发布的亚克隆载体构建供应信息，浏览与亚克隆载体构建相关的产品或在搜索更多与亚克隆载体构建相关的内容。 查看更多
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2021-07-24
上海宾智生物科技有限公司在发布的VDC-1040 pmaxCloning™ Cloning Vector pmaxCloning™克隆载体供应信息，浏览与VDC-1040 pmaxCloning™ Cloning Vector pmaxCloning™克隆载体相关的产品或在搜索更多与VDC-1040 pmaxCloning™ Cloning Vector pmaxCloning™克隆载体相关的内容。 查看更多
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苏州泓迅生物科技股份有限公司在发布的泓迅亚克隆/转载体供应信息，浏览与泓迅亚克隆/转载体相关的产品或在搜索更多与泓迅亚克隆/转载体相关的内容。 查看更多
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2018-04-10
经过我们和元上海专业团队呕心沥血的努力，终于研发出了一种简单有效感染胰腺的新血型病毒载体——AAV-PAN 胰腺是机体重要的内外分泌的功能器官，参与机体消化，血糖代谢，脂质代谢等。当其发生病变会导致糖尿病、胰腺癌的发生，因此在代谢和肿瘤研究中找到靶向胰腺的病毒载体非常重要。 过去，为了感染胰腺，我们常用AAV8病毒载体，但是其感染过程非常复杂，需要用微夹钳夹住胆胰管的近肝端和近十二指肠端，然后用泵将病毒注入胆管感染胰腺。 胰腺病毒载体... 查看更多
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2018-08-08
本章将会讨论昆虫来源的杆状病毒展示载体的设计及其潜在的用途。建立展示库的一般步骤和这些基因递送载体的特性也将会在本章中进行阐述。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」 查看更多
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2018-12-26
SSR银染方法(轻轻震荡)1、固定10%乙醇+0.5%冰乙酸 6min×2次2、染色0.2% AgNO3 12min3、漂洗（1）蒸馏水 1-2min（2）0.002% Na2S2O3 1-2min（3）显色1.5%NaOH + 0.4%甲醛（4）保存0.75%Na2CO3 查看更多
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2018-07-15
【载体构建】生物实验,分子生物学实验技术,BIOLEAF.实验技术服务 tosciencebio@126.com 选实验技术服务，还在上海通善。 您的选择，就是对我们公司的肯定。 相信通善，相信自己，我们有太多优势，让您在众多信息流中独具慧眼的找到我们。【载体构建】生物实验,分子生物学实验技术,BIOLEAF.实验技术服务 tosciencebio@126.com 一，通善的服务与态度 公司的宗旨是以更高的品质、更低的价格、更快的供 查看更多
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2018-03-20
上海信裕生物科技有限公司在发布的pX601载体供应信息，浏览与pX601载体相关的产品或在搜索更多与pX601载体相关的内容。 查看更多
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2021-07-16
北京五加和分子医学研究所有限公司在发布的慢病毒载体服务供应信息，浏览与慢病毒载体服务相关的产品或在搜索更多与慢病毒载体服务相关的内容。 查看更多
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2021-07-26
基因表达慢病毒载体由慢病毒基因组序列和细菌质粒序列构成。细菌质粒序列含有一个Ampicillin抗性基因和一个高拷贝复制子pUCori。慢病毒基因组序列是从元件5LTR开始，到元件3LTR结束。慢病毒基因组序列可容纳两个外源基因表达盒子：一个是目的基因表达盒子，另外一个是marker基因表达盒子。Marker基因表达盒子已经克隆在载体上，无需重新构建。我们提供了荧光marker、抗药性marker或者荧光... 查看更多
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2018-12-26
Universal primers for gene knock-out using dominant drug markers: Kan, Clonat, and Hygromisin-B. Forward primer: 5’ TCAGGGGCATGATGTGACT 3’Reverse primer: 5’ AG 查看更多
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几种表达载体123
Doctor-pxz2021-09-08
各位大神，我现在用PET28α作为表达载体，在连接的时候是不是载体要进行双酶切、胶回收?我双酶切的目的片段和PET28α连接后，导入感受态中没有成功，不知道怎么回事，请教各位。
病毒诱导基因沉默123
2021-07-25
VIGS病毒诱导的基因沉默。原理都是一样的，只不过是利用病毒诱导的RNA干扰。病毒做为载体（插入你靶基因的片段）去侵染寄主，引起靶基因沉默。
Git 使用教程——关联VS Code_伊人如梦_vscode ...123
小男人沼L652021-08-16
因为目的基因要靠运载体进入受体细胞，然后目的基因才能在受体细胞中表达。所以基因表达载体的构建是基因工程的核心
【求助】请问有没有带荧光的RNA干扰载体？_问答详情_载体_其他分...123
wlnju2021-07-22
想做稳定克隆用，有没有这样的载体啊？
基因捕获技术的现状及应用123
落帅2102017-11-06
基因捕获载体在基因组中也有“hot”和“cold”插入位点。但是计算机模拟显示,按照单个克隆被捕获的百分比,如果以多种类型的载体进行足够多次的突变实验所获得的突变克隆就可以覆盖整个ES细胞基因组中全部基因位点 。因此,新型捕获策略和载体不断被设计应用。
早期基因捕获载体的特点是当报告基因与内源基因的读码框一致时,产生由内源蛋白的N 末端与报告基因蛋白融合的活性蛋白质 。近来对这一类载体所做的改进是在报告基因与SA 序列间插入一来源于脑、心肌炎病毒的IRES ,这样即使报告基因与捕获基因不发生融合也可产生报告基因翻译产物。尽管ES 细胞中大量基因具转录活性,为了获得全基因组突变克隆必须使用不依赖于捕获基因表达的筛选策略。因此,在第一、二代基因捕获载体中应用报告基因和含自身启动子( PGK) 的筛选标记基因neo ,抗药性的产生不需要捕获基因的表达。不同的是,第二代基因捕获载体中筛选标记基因3′末端没有polyA 加尾信号而含有一剪接供体序列 ,必须由内源基因提供polyA 加尾信号以产生稳定的筛选标记基因mRNA 而获得筛选克隆,因此与第一代载体相比,降低了基因间插入的背景。polyA 捕获载体还解决了第一代基因捕获载体突变基因信息鉴定的难题。3′- RACE 可用以鉴定polyA 捕获基因3′端编码序列或3′非翻译区(UTRs) 序列信息,对于基因鉴定比5′- UTRs 序列有用得多。用以克隆捕获特异类型蛋白编码基因的多种新型载体也已问世,如Skarnes 等利用分泌蛋白的原理及β-gal 活性在内质网被灭活的特点设计了一种载体专门用以捕获在ES 细胞中表达的编码穿膜分泌蛋白的基因 。一些研究小组还在载体中引入了重组位点,以实现由重组酶介导的捕获位点插入后修饰 。这种“敲进 ”的策略允许对捕获位点作进一步修饰,如“指派”捕获基因的启动子成分驱动敲入的转基因表达来进行“回复突变( rescue) ”或细胞标记实验;通过敲入含不同突变的捕获基因cDNA 还可产生等位基因系列;含lox 位点的载体还可实现在捕获基因组条件性取代载体产生更精细的突变,包括点突变和/ 或选择性表型标记,可以更好地控制突变的性质。向左转|向右转
早期基因捕获载体的特点是当报告基因与内源基因的读码框一致时,产生由内源蛋白的N 末端与报告基因蛋白融合的活性蛋白质 。近来对这一类载体所做的改进是在报告基因与SA 序列间插入一来源于脑、心肌炎病毒的IRES ,这样即使报告基因与捕获基因不发生融合也可产生报告基因翻译产物。尽管ES 细胞中大量基因具转录活性,为了获得全基因组突变克隆必须使用不依赖于捕获基因表达的筛选策略。因此,在第一、二代基因捕获载体中应用报告基因和含自身启动子( PGK) 的筛选标记基因neo ,抗药性的产生不需要捕获基因的表达。不同的是,第二代基因捕获载体中筛选标记基因3′末端没有polyA 加尾信号而含有一剪接供体序列 ,必须由内源基因提供polyA 加尾信号以产生稳定的筛选标记基因mRNA 而获得筛选克隆,因此与第一代载体相比,降低了基因间插入的背景。polyA 捕获载体还解决了第一代基因捕获载体突变基因信息鉴定的难题。3′- RACE 可用以鉴定polyA 捕获基因3′端编码序列或3′非翻译区(UTRs) 序列信息,对于基因鉴定比5′- UTRs 序列有用得多。用以克隆捕获特异类型蛋白编码基因的多种新型载体也已问世,如Skarnes 等利用分泌蛋白的原理及β-gal 活性在内质网被灭活的特点设计了一种载体专门用以捕获在ES 细胞中表达的编码穿膜分泌蛋白的基因 。一些研究小组还在载体中引入了重组位点,以实现由重组酶介导的捕获位点插入后修饰 。这种“敲进 ”的策略允许对捕获位点作进一步修饰,如“指派”捕获基因的启动子成分驱动敲入的转基因表达来进行“回复突变( rescue) ”或细胞标记实验;通过敲入含不同突变的捕获基因cDNA 还可产生等位基因系列;含lox 位点的载体还可实现在捕获基因组条件性取代载体产生更精细的突变,包括点突变和/ 或选择性表型标记,可以更好地控制突变的性质。向左转|向右转
【求助/交流】什么是组成型表达载体 分子生物 综合其他...123
强少29752021-08-05
表达载体四部分:目的基因、启动子、终止子、标记基因
常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端(多为黏性末端，也有平末端)，采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。
表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。其基本骨架为来自pBR322和pUC的质粒复制起点和氨苄青霉素抗性基因。在表达元件中，有一个杂合tac强启动子和终止子，在启动子下游有RBS位点(如果利用这个位点，要求与ATG之间间隔5-13bp)，其后的多克隆位点可装载要表达的目标基因。
常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端(多为黏性末端，也有平末端)，采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。
表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。其基本骨架为来自pBR322和pUC的质粒复制起点和氨苄青霉素抗性基因。在表达元件中，有一个杂合tac强启动子和终止子，在启动子下游有RBS位点(如果利用这个位点，要求与ATG之间间隔5-13bp)，其后的多克隆位点可装载要表达的目标基因。
人pparγ慢病毒过表达载体构建123
安好3202016-04-12
我现在手上有PMD2.G与PSPAX2两个载体，求推荐与其配套的慢病毒过表达载体，谢谢。
RNA干扰载体的构建的实验流程123
血刺SC3422017-11-06
在RNA干扰实验中
首先需要构建dsRNA表达载体
将这种载体导入受体细胞中后
表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA
引起具有相同序列的mRNA发生讲解
导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质
所以个体会表现出功能缺失表型
构建表达载体通常选用dsRNA
需要注意的一些方面是
dsRNA序列中GC的含量要小于50%
高GC含量会降低RNAi的效果
选定的dsRNA序列应通过搜索数据库确保与其他基因无同源性
以避免对其他同源性基因表达的抑制
不同区域的dsRNA具有不同的基因沉默效果
可同时构建两个以上针对同一基因不同靶区域的dsRNA表达载体
还要充分考虑siRNA的结构特征
siRNA与mRNA的同源程度对RNAi有明显影响
启动子区或者编码区与siRNA同源的基因受siRNA抑制
但siRNA在动物细胞中对mRNA的前体没有影响
所以含非编码区序列的dsRNA不会引起RNAi
而且在构建表达载体时
经常使用U6启动子等RNA聚合酶Ⅲ能够识别的启动子序列
最后将其转入到质粒中
这里说的只是一个简单的过程
总的来说构建表达载体是个比较复杂的过程
如果要知道详细的技术
建议还是去看书吧
这里是说不清的
首先需要构建dsRNA表达载体
将这种载体导入受体细胞中后
表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA
引起具有相同序列的mRNA发生讲解
导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质
所以个体会表现出功能缺失表型
构建表达载体通常选用dsRNA
需要注意的一些方面是
dsRNA序列中GC的含量要小于50%
高GC含量会降低RNAi的效果
选定的dsRNA序列应通过搜索数据库确保与其他基因无同源性
以避免对其他同源性基因表达的抑制
不同区域的dsRNA具有不同的基因沉默效果
可同时构建两个以上针对同一基因不同靶区域的dsRNA表达载体
还要充分考虑siRNA的结构特征
siRNA与mRNA的同源程度对RNAi有明显影响
启动子区或者编码区与siRNA同源的基因受siRNA抑制
但siRNA在动物细胞中对mRNA的前体没有影响
所以含非编码区序列的dsRNA不会引起RNAi
而且在构建表达载体时
经常使用U6启动子等RNA聚合酶Ⅲ能够识别的启动子序列
最后将其转入到质粒中
这里说的只是一个简单的过程
总的来说构建表达载体是个比较复杂的过程
如果要知道详细的技术
建议还是去看书吧
这里是说不清的
【求助】想做基因敲入,可是怎样选择合适的插入位点? 生物科学...123
小傲es湂2021-08-06
基因捕获载体在基因组中也有“hot”和“cold”插入位点。但是计算机模拟显示,按照单个克隆被捕获的百分比,如果以多种类型的载体进行足够多次的突变实验所获得的突变克隆就可以覆盖整个ES细胞基因组中全部基因位点 。因此,新型捕获策略和载体不断被设计应用。
早期基因捕获载体的特点是当报告基因与内源基因的读码框一致时,产生由内源蛋白的N 末端与报告基因蛋白融合的活性蛋白质 。近来对这一类载体所做的改进是在报告基因与SA 序列间插入一来源于脑、心肌炎病毒的IRES ,这样即使报告基因与捕获基因不发生融合也可产生报告基因翻译产物。尽管ES 细胞中大量基因具转录活性,为了获得全基因组突变克隆必须使用不依赖于捕获基因表达的筛选策略。
早期基因捕获载体的特点是当报告基因与内源基因的读码框一致时,产生由内源蛋白的N 末端与报告基因蛋白融合的活性蛋白质 。近来对这一类载体所做的改进是在报告基因与SA 序列间插入一来源于脑、心肌炎病毒的IRES ,这样即使报告基因与捕获基因不发生融合也可产生报告基因翻译产物。尽管ES 细胞中大量基因具转录活性,为了获得全基因组突变克隆必须使用不依赖于捕获基因表达的筛选策略。
【求助】pEGFPN1载体的问题 急啊123
贫乳圆香☆1032017-11-10
与以往常用的报告基因相比，GFP具有以下优点：
①在荧光显微镜下，用波长约490 nm的紫外线激发后，即可观察到绿色荧光，直接、简捷、便于检测；
②无需任何的作用底物或共作用物,检测的灵敏度不受反应效率的影响，保证了极高的检出率；
③蛋白本身性质稳定；
④可在多种异源生物中表达且无细胞毒性；
⑤其基因片段长度较小(约717 bp)，易于构建融合蛋白，且融合蛋白仍能保持荧光激发活性，为研究其他基因表达产物的分布提供了方便。
pEGFP是一种优化的突变型GFP，使其产生的荧光较普通GFP强35倍，大大增强了其报告基因的敏感度。pEGFP与其他蛋白的融合表达已有很多成功的例子，而且其N及C端均可融合，并不影响其发光。
pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因，如上图质粒图谱所示。
pEGFP-N1载体具有以下几方面特点：
①从结构上看，该质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是保证目的基因稳定表达的因素之一；
②含有高效的功能强大的启动子SV40和PCMV，可以使目的基因在增殖的细胞中稳定表达；
③具有多克隆位点，便于目的基因的插入；
④该载体具有neo基因，可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。
这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。向左转|向右转
①在荧光显微镜下，用波长约490 nm的紫外线激发后，即可观察到绿色荧光，直接、简捷、便于检测；
②无需任何的作用底物或共作用物,检测的灵敏度不受反应效率的影响，保证了极高的检出率；
③蛋白本身性质稳定；
④可在多种异源生物中表达且无细胞毒性；
⑤其基因片段长度较小(约717 bp)，易于构建融合蛋白，且融合蛋白仍能保持荧光激发活性，为研究其他基因表达产物的分布提供了方便。
pEGFP是一种优化的突变型GFP，使其产生的荧光较普通GFP强35倍，大大增强了其报告基因的敏感度。pEGFP与其他蛋白的融合表达已有很多成功的例子，而且其N及C端均可融合，并不影响其发光。
pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因，如上图质粒图谱所示。
pEGFP-N1载体具有以下几方面特点：
①从结构上看，该质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是保证目的基因稳定表达的因素之一；
②含有高效的功能强大的启动子SV40和PCMV，可以使目的基因在增殖的细胞中稳定表达；
③具有多克隆位点，便于目的基因的插入；
④该载体具有neo基因，可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。
这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。向左转|向右转
miRNA过表达载体构建的序列 小恒学术问答123
天然7p2021-08-07
使用计算机预测植物miRNA靶基因比较简单，因为在植物中miRNA与靶基因几乎还是以完全互补配对的方式结合，预测不需要复杂的算法。而预测动物miRNA靶基因则存在一定的困难，主要是目前已知的miRNA靶基因及其确切靶点不多，在算法编写时没有足够的已知样本可供参考。但是，miRNA与靶基因间的相互作用仍然具有一定的规律性。目前常规的算法主要遵循以下几个常用原则：（a）miRNA与靶基因的互补性；（b）miRNA靶位点在不同物种之间的保守性；（c）miRNA-mRNA双链之间的热稳定性；（d）miRNA靶位点不会有复杂的二级结构；（e）miRNA 5’端于靶基因的结合能力强于3’端。除了这些基本原则以外，不同的预测方法还会根据各自总结的规律对算法进行限制和优化。
【求助】有关慢病毒的几个问题123
WFy19912021-08-08
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