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求助大神:有人提过柔嫩**尔球虫的DNA吗?要求是能构建出
文库的,一般文献记载的都是跑PCR就可以了,质量不够。我需要能构建文库的。
不要RNA,不要
CDNA文库,就要DNA文库!
好人一生平安,大神帮帮忙!
装试剂的盒子按方法可以分为普通PCR试剂盒(定性),荧光定量PCR试剂盒(定量).荧光定量PCR试剂盒根据染料又分为SYBEGREEN法,探针法,等.
根据模板的类型分为DNA类PCR试剂盒和RNA类PCR试剂盒
PCR mix厂家:普洛麦格公司,QIAGEN公司,罗氏公司,TAKARA公司.
成品PCR试剂盒厂家:深圳匹基,上海之江,中山达安,上海科华,上海复星.
是单链cDNA,想合成双链cDNA需要另外操作:一、cDNA第二链的合成:1. 第一链反应完成后,取2ul一链产物-20℃冰箱中保存,待电泳检测。其余的产物合并,混匀,然后顺序加入下列试剂(promega):20ul 10×DNA Polymerase I buffer6ul10mM dNTP(自己配制)xuldd H2O1ulRNase H(2U/ul)10ul DNA Polymerase I(10U/ul)总体系为200ul;2. 混匀后,16℃反应2.5小时;3. 70℃灭活10分钟;4. 反应完成后,得到200ul cDNA第二链反应体系,将此体系置于冰上;5.取2ul二链产物,同保存的一链产物一起电泳鉴定。同时上1kb ladder,确定双链的大小范围。注:一链,二链的电泳图是smear,且二链稍比一链大一些。二、双链cDNA末端补平:1. 在第二链反应体系中,顺序加入下列试剂(promega):6ul 10mM dNTP2ul T4 DNA Polymerase(8.7U/ul) 2ul BSA(10mg/ml)2. 稍微离心混匀反应物, 37℃反应至少30分钟,然后75℃灭活10分钟;3. 加入等体积酚/氯仿/异戊醇,剧烈振荡后,常温下13000g离心5分钟;4. 离心后,吸取上清于另一1.5ml eppendof管中,加入等体积氯仿,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟;5. 吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3M NaAc(PH5.2)和2.5V预冷的无水乙醇,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA;6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟;8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味.注:第3,第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。PCR纯化试剂盒操作流程:1.溶液PE使用前应加入适量体积95%-100%的乙醇,混匀。2.向200ul二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB,混匀。3.加入spin column中,13000rpm离心1min。4.加入0.75ml buffer PE,13000rpm离心1min。5.13000rpm,再离心1min。6.将spin column放入一新的离心管中,加入50ul buffer EB,静置10min。7.13000rpm离心2min。8.加入30ul buffer EB,静置10min。9.13000rpm离心2min。10.加入1/10体积3M的NaAc,2.5倍体积无水乙醇,混匀,-20℃沉淀过夜。
请教DOP-PCR和ALU-PCR在扩增BAC/PACDNA制备探针
文库时的优劣,或者说都可以。
你说的是哪款试剂盒呢?根据样本不同,可以选择不同的试剂盒的。比如抽血液样本的QIAamp DNA Blood Mini Kit 50次目录价为1630元。如果要购买应该会给折扣。
axygen dna提取试剂盒有证书的,一般代理商都有证书,
这个是用于代理授权的,这个可以说是唯一辨别产品真伪的方法,
有证书的企业,销售的产品可信度比较高。
产品介绍:
普通的手提或者试剂盒提取的土壤基因组DNA由于常常残留有PCR的强烈抑制物如腐殖酸、棕黄酸等杂质造成实验失败,此外,由于采用了剧烈的玻璃珠击打来破裂菌体,常常造成DNA剪切和降解。本公司经过长期研发开发出了具有自主知识产权的土壤基因组DNA,通过专利配方的腐殖酸和棕黄酸去除试剂配合特殊处理的纯化柱,可以最大程度的去除这些杂质,同时加上多次柱漂洗,确保得到的DNA具有极高纯度,此外独特的抽提和裂解体系可以迅速裂解细胞(壁)和灭活细胞内核酸酶,不需要借助玻璃珠破壁,有效保证了基因组DNA的完整性。
产品特点:
1.本公司独有的专利配方和纯化柱能有效去除腐殖酸等杂质。
2.不需要借助玻璃珠破壁,有效保证了基因组DNA的完整性,长度可达30kb -50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
3.兼容性强,适用于各种不同的土壤包括淤泥等提取困难的土壤。
4.多步骤去除各种杂质和抑制物,保证了极高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9。
5.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
6.快速,简捷,单个样品操作一般可在60分钟内完成。
你找下,杭州昊鑫生物
效果好的话当然是promega或者omega的,不过会贵很多 都是美国佬的东西
便宜点的就是国产的tiangen,效果会差一点点 如果是大样本的全血 用这个也凑合
请教DOP-PCR和ALU-PCR在扩增BAC/PACDNA制备探针
文库时的优劣,或者说都可以。
各位战友好,因实验要求需要提取人的唾液DNA,但因标本需要在临床采集,无法做到当天就提取DNA,因此天根等漱口水提DNA的试剂盒都不满足实验需求。
之前一直在用艾德莱的唾液DNA保存运输提取试剂盒,但是这段时间下来感觉提取效率太低,而且特别不稳定,经常50%以上的标本都提不出来DNA,或者浓度特别低,完全崩溃的感觉!所以想更换试剂盒或者直接提供唾液DNA的保存液。另国外的这种试剂盒太贵了,因经费问题无法承受,所以希望战友们能够推荐一家效率高些的试剂盒,小女子不胜感激!!
上海博谷生物-elisa试剂盒-elisa试剂盒厂家-elisa试剂盒品牌
全血基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)作用原来具体是这样的:独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱. 试剂盒特点: 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤. 快速,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成. 多次柱漂洗确保高纯度,典型的产量200μl全血可提取出3-6μg,纯度达1.1.9,长度可达30Kb-50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应. 从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全,客户可根据需要选择购买. 说明书中针对实验过程出现的疑难做出了详细的解答,帮助你解决实验过程中遇到的问题(如标本中含有血凝块、红细胞裂解不完全、DNA产量低、DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全、DNA长度小于15kb、A260吸光值异常偏高、洗脱下来的DNA溶液还带有轻微的颜色等).