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Excellgen/Taq DNA Polymerase/EG-1030/10,000 Units
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Excellgen/Taq DNA Polymerase/EG-1030/10,000 Units
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TaqDNAPolymeraseispurifiedfromE.colicellswithaclonedpolgenefromThermusaquaticusYT1.Thepurifiedenzymeisamonomericproteinwithmolecularweightof94kDa.Theenzymecatalyzes5'->3'synthesisofDNA,hasnodetectable3'->5'exonuclease(proofreADIng)activityandpossesseslow5'->3'exonucleaseactivity.Inaddition,TaqDNAPolymeraseexhibitsdeoxynucleotidyltransferaseactivity,whichfrequentlyresultsintheadditionofextraadeninesatthe3'-endofPCRproducts.

Features
  • Thermostable–halflifeismorethan40minat95°C.
  • GeneratesPCRproductswith3’-dAoverhangs.
  • Purity(SDS-PAGE):>99%
  • Contaminants:E.coli16SrDNAisbelowdetectionlimitbyRT-PCR
ApplicationsRoutinePCRamplificationofupto5kbDNAfragment.
SourceAnE.colistrainthatcarriestheTaqDNAPolymerasegenefromThermusaquaticusYT-1
UnitDefinitionOneunitisdefinedastheamountofenzymethatwillincorporate15nmolofdNTPintoacid-insolublematerialin30minutesat75°C.
Components
  • RecombinantTaqDNApolymerase:5units/µLin20mMTris-HCl(pH7.5),1mMDTT,0.1mMEDTA,100mMKCl,0.5%(v/v)NonidetP40,0.5%(v/v)Tween20,StABIlizerand50%(v/v)glycerol.
  • 10XStandardTaqBuffer:100mMTris-HCl,500mMKCl,15mMMgCl2,pH8.3@25°C
StorageCondition

-20°C.

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端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构,端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列,这一序列在生物进化中有高度的保守性(人重复序列为TTAGGG)。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合(如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失)中起重要作用。 查看更多>
单精子分型指的是分析个体雄配子的 DNA 序列。它可以检测单个个体的重组以及其他遗传现象。精子分型的一个优点体现在需要大样本量的遗传研究中,如一份精液样本中的精子数目对于任何研究目的来说都是取之不尽的。 查看更多>
解放军总医院呼吸科(100853) 佘丹阳 刘又宁 克隆一株临床分离的多药耐药阴沟肠杆菌的ampC 基因,并研究其编码的AmpCβ-内酰胺酶的特性。聚合酶链反应(PCR)扩增阴沟肠杆菌ECLC074 的ampC 基因,将扩增的目标片段连接入pMD18-T进行双链测序后,进一步克隆入pACYC184 质粒,用获得的pACYC184/ampC 重组质粒转化大肠杆菌MC4100。采用琼脂稀释法测定阴沟肠杆菌ECLC074,大肠杆菌 MC4100 及大 查看更多>
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)是一种体外核酸扩增系统,是分子克隆技术中的常用技术之一。PCR具有反应快速、灵敏、操作简便等优点,已广泛应用于分子生物学的各个领域。实验目的是掌握PCR原理,学习PCR操作过程 查看更多>
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这一章介绍通过使用2A 多肽连接的多顺反子载体从单一可读框来表达多重蛋白质的方法。当这些小的序列被克隆到基因间区时,它们允许通过在2A 多肽序列中的一个新颖的切割方式从单一的载体上高效地产丰不相连的蛋白质产物。作者:T.弗里德曼等,译者:殷勤伟等,本实验来自「基因转移」 查看更多>
尽管整合性转化的频率很低,但可以通过与整合位点同源的克隆化基因内的限制性位点将质粒线性化以提高转化效率。得到的整合体含有完整的质粒,两侧为基因的完整拷贝。 查看更多>
用 PCR 分析酵母菌落时,无需纯化 DNA。本方案以单个酵母菌落的粗裂解液作为 PCR 扩增的模板,来确定 YAC 中是否携带目的 DNA 序列。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。 查看更多>
使用合成的寡核苷酸构建文库时,PCR 有两个重要的作用。第一,用与特定侧翼序列退火的引物来扩增文库,仅用少量的不同模板,就可以得到大量的 PCR 产物。第二,若要产生文库 DNA 的复杂互补链,PCR 合成法是有效的方法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。 查看更多>
Lucigen Corporation公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多>
PCR是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法。其特异性是由两个人工合成的引物序列决定的。所谓引物就是与待扩增DNA片段两翼互补的寡聚核苷酸,其本质是ssDNA片段。待扩增DNA模版加热变性后,两引物分别与两条DNA的两翼序列特异复性。此时,两引物的3'端相对,5'向背。在合适的条件下,由Taq DNA聚合酶催化引物引导的DNA合成,既引物的延伸。上述过程是由温度控制。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环。PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。理论上扩增产物量成指数上升,既n个循环后, 查看更多>
当有大量的样本,多个微卫星标记需要分型时,需要本单元描述的分型方法。例如,用全基因缉的方法做一个疾病的连锁分析研究,需要在 500 个个体里检测 300 个标记,这样就要 150000 次基因分型。本单元描述的技术是用 Perkin-Elmer 的自动 DAN 测序系统,但也可以修改用于其他的自动荧光测序系统。 查看更多>
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打算克隆某个基因的启动子,基因5‘端上游基因组序列,在pubmed里能查到。

是不是只要从细胞里面提取基因组DNA,然后按照pubmed上的5端上游序列做一个PCR就可以了?
难需要看蛋白纯化工艺DNA处理
举例言目前家药典条宿主DNA残留检测
拓朴异构酶123
蓝羽443512017-11-07
DNA拓扑异构酶催化反应
很多,其反应本质是先切断DNA的磷酸二脂键,改变DNA的链环数之后再连接之,兼具DNA内切酶和DNA连接酶的功能.然而它们并不能连接事先已经存在的断裂DNA,也就是说,其断裂反应与连接反应是相互耦联的。拓扑异构酶(包括Ⅰ型和II型)都可以用符号转化模型进行解释(下图左中)
除了DNA拓扑异构酶可以产生异构变化以外,很多能够嵌入相邻碱基之间影响碱基堆集作用的试剂,特别是片状的染料分子.也能改变DNA的拓扑状态,最明显的例子就是溴化乙锭(ethidium bromide)。例如以SV40的CCC分子与溴化乙锭的结合试验为例,当没有染料时,此DNA为负超螺旋,具有较高的沉降常数(21S);当加入染料分子与核苷酸之比为0.05时,沉降数降至l6S,此时DNA为没有超螺旋的松弛形式;当染料分子和核苷酸的比值增加到0.09时,沉降常数又上升到大约21S,此时DNA分子为正超螺旋。这种关系如上图右所示,不过要注意的是,溴化乙锭并没有改变Lk值,只不过是由溴化乙锭分子的嵌入,增加了局部DNA二级结构的紧缠状态。因而,随着嵌入染料分子数的增多,起初表现为负超螺旋的减少与消失,随后便是正超螺旋的增加。这与单链DNA结合蛋白促进负超螺旋转变为泡状结构的情况是类似的。
拓扑异构酶(topoisomerase):通过切断DNA的一条或两条链中的磷酸二酯键,然后重新缠绕和封口来改变DNA连环数的酶。DNA促旋酶。
DNA拓扑异构酶 DNA topoisomerase
为催化DNA拓扑学异构体相互转变的酶之总称。催化DNA链断开和结合的偶联反应,为了分析体外反应机制,用环状DNA为底物。在闭环状双链DNA的拓扑学转变中,要暂时的将DNA的一个链或两个链切断,根据异构体化的方式而分为二个型。切断一个链而改变拓扑结构的称为Ⅰ型拓扑异构酶(top- oisomeraseⅠ),通过切断二个链来进行的称为Ⅱ型拓扑异构酶(topoisomeraseⅡ)。属于Ⅰ型的拓扑异构酶,有大肠杆菌的ω蛋白(ω-protein,由分子量11万的单个多肽链所成)及各种真核细胞中存在的切断-结合酶(nicking-closing enzyme,分子量约6万5千—7万的及分子量约10万的)。Ⅱ型拓扑异构酶,有存在于细菌中的DNA促旋酶、噬菌体T4的拓扑异构酶Ⅱ以及真核细胞中依赖ATP的拓扑异构酶Ⅱ等。另外,噬菌体λ的irt基因产物和噬菌体φX174的基因A的产物等也具有切断—结合酶的活性,可认为是拓扑异构酶之一种。Ⅰ型拓扑异构酶不需要ATP的能量而催化异构体化,作为反应的中间产物,在原核生物来说是游离型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端与酶形成共价键,而真核生物是3′-OH末端5′-磷酸末端与酶形成共价键。此酯键中所贮存的能量,可能在切断端的再结合上起着作用。Ⅰ型拓扑异构化酶催化的反应有下列各种:使超螺旋DNA在每一切断—结合反应中,使L数(参见DNA拓扑学异构体)发生一种变化,即松弛(relaxation)(图1)。将互补的单链环状DNA转变成具有螺旋结构的双链环状DNA(图 2),使单链DNA打结(topological knot)或解结(图3)。另外在二个环状双链DNA一个分子的一个链切断时,形成链环状二聚体的分子(ca-tenane)。在Ⅱ型拓扑异构酶中,DNA促旋酶可单独催化闭环状DNA产生超螺旋,这是独特的。其它二个型的酶,除可使超螺旋松弛也需要ATP的能量外,还可催化促旋酶的催化反应。真核细胞的拓扑异构酶Ⅰ,参与核小体的形成,细菌的ω蛋白参与转录和某种转位子的插入。促旋酶和T4拓扑异构酶Ⅱ参与DNA的复制和转录过程。 DNA 拓扑异构酶 I (DNA Topoisomerase I)催化4种反应:①超螺旋的松弛;②绳结(knot)的形成;③环状双链分子的形成;④环状双链分子的连接。本酶由于来源于小牛胸腺,与来源于原核生物的酶性质不同,即使在Mg2+不存在的条件下也显示活性。而且,原核生物由来的DNA Topoisomerase I 只作用负链的超螺旋分子,而本酶则能使正负两方的超螺旋分子均形成松散型。向左转|向右转
各位老师好!!
我现在做的课题研究的是肾脏肿瘤。其中有实验涉及到FISH。咨询和查阅过相关文献和公司,一个染色体荧光探针的价格贵的惊人(动不动近万),做过这方面实验的老师,情况是这样的吗?
我要做的是在石蜡切片上进行FISH实验,操作难度是不是很大?有没有公司可以帮助完成此类实验呢?
请知道的老师给我帮助,谢谢!!
选择目基,并设计相应引物;
  用引物PCR扩增目基片段;
  选择合适(抗性标记、酶切位点等)克隆载体(保真扩增),并PCR片段连接入克隆载体;(般用Taq酶PCR产物末尾自带A,Solution 1作用与两端各带T线性T载体直接相连)
  连接产物转化入受态肠杆菌,使含抗素培养基扩增;
  肠杆菌提取质粒(即前面连接产物),酶切鉴定测序鉴定均误目基片段切并与新表达载体连接,再转化入肠杆菌扩增,再提质粒,即想要目基片段克隆.
DNA拓扑异构酶概述123
0864181662017-11-07
依托泊苷,抑制有丝分裂,属于细胞周期特异性药物,使细胞分裂停止于S期或G2期,此方案应先用VP-16,后顺铂:VP-16的作用靶点是DNA拓扑异构酶Ⅱ。顺铂属于细胞周期非特异性药物
大家好,小人是一只小小菜鸟,做实验遇到了很大的问题,希望大家伸出友爱之手,帮帮痛苦中的我

我要克隆一个基因,这个基因有3个外显子,然后和质粒相连,重组载体,转到真核细胞中做表达,我用基因组DNA做模板,请问这么做可以吗,有人做过类似的实验吗?

请大家帮帮忙,本人毕业在即,谢谢大家
我克隆了一个菊花中的NCED基因,与ABA合成有关,但是我是根据日本一篇的文章中已克隆出的此基因(也是在菊花中)设计的引物,最终二者比对,还是有区别的,请问我是否可以写进文章中,没有通过5-RACE和3-RACE克隆,如果可以写,应该怎么写呢,请指教下。
序列前保留200bp
设计引物候引物度设置25-27左右
辩论稿:克隆的好处与坏处123
梅桂华丽2021-09-01
克隆许优点:
1)克隆技术减轻些能母亲性痛苦
2)克隆实验实施推遗传发展制造物器官移植辟前景
3)克隆技术用于治疗神经系统损伤神经组织再干细胞修复神经损伤
克隆许缺点避免: 1)克隆技术干扰自演化程
2)克隆技术种昂贵技术需要量资金物专业参与失败率高
3)克隆技术应用于体导致代遗传性状工控制4)克隆技术用于创建超或强壮体魄智力迟钝外克隆技术效使用类遗传男性失意义
所说科技双刃剑优点缺点并没标准答案看着使用
请以下列格式列出
机构:
负责人:
研究方向:如血液病,生育遗传咨询等
成绩:

非常感谢!
我的题目是鸡Mx基因的克隆,我的策略是先根据该基因家族(dynaminfamily)的氨基酸保守区设计简并引物克隆出该基因CDNA的部分片段,然后根据该片段序列设计基因特异性引物,利用RACE技术得到cDNA的3‘和5’末端,然后根据末端序列设计引物扩增出该基因全长cDNA.

我用简并引物从鸡cDNA中扩增出一个片段,约250bp,测序后拿来BLAST时却发现,与之同源性最高的并不是其它的Mx基因,而是人的某一个基因,比对的结果中与该序列同源性较高的有人及鼠Mx基因,但是同源性并不是很高。该基因在同一种生物的不同品种中具有多态性,已经有其它的鸡的Mx基因被克隆,按道理如果该片段是Mx基因的一部分它应该与其它的鸡的Mx基因有很高的同源性才对呀,所以,我怀疑简并引物PCR扩增出来的该片段不是Mx基因,因为RACE试剂盒很贵,现在也不敢继续作下去,怕作下去得不到什么结果。现在贴上我BLAST结果中score排在最前面的部分,还请有经验的兄弟帮我分析分析。我不胜感激。

Sequencesproducingsignificantalignments:(bits)Value

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