
Description | TaqDNAPolymeraseispurifiedfromE.colicellswithaclonedpolgenefromThermusaquaticusYT1.Thepurifiedenzymeisamonomericproteinwithmolecularweightof94kDa.Theenzymecatalyzes5'->3'synthesisofDNA,hasnodetectable3'->5'exonuclease(proofreADIng)activityandpossesseslow5'->3'exonucleaseactivity.Inaddition,TaqDNAPolymeraseexhibitsdeoxynucleotidyltransferaseactivity,whichfrequentlyresultsintheadditionofextraadeninesatthe3'-endofPCRproducts. |
Features |
|
Applications | RoutinePCRamplificationofupto5kbDNAfragment. |
Source | AnE.colistrainthatcarriestheTaqDNAPolymerasegenefromThermusaquaticusYT-1 |
UnitDefinition | Oneunitisdefinedastheamountofenzymethatwillincorporate15nmolofdNTPintoacid-insolublematerialin30minutesat75°C. |
Components |
|
StorageCondition | -20°C. |
ebiomall.com






>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
是不是只要从细胞里面提取基因组DNA,然后按照pubmed上的5端上游序列做一个PCR就可以了?
举例言目前家药典条宿主DNA残留检测
很多,其反应本质是先切断DNA的磷酸二脂键,改变DNA的链环数之后再连接之,兼具DNA内切酶和DNA连接酶的功能.然而它们并不能连接事先已经存在的断裂DNA,也就是说,其断裂反应与连接反应是相互耦联的。拓扑异构酶(包括Ⅰ型和II型)都可以用符号转化模型进行解释(下图左中)
除了DNA拓扑异构酶可以产生异构变化以外,很多能够嵌入相邻碱基之间影响碱基堆集作用的试剂,特别是片状的染料分子.也能改变DNA的拓扑状态,最明显的例子就是溴化乙锭(ethidium bromide)。例如以SV40的CCC分子与溴化乙锭的结合试验为例,当没有染料时,此DNA为负超螺旋,具有较高的沉降常数(21S);当加入染料分子与核苷酸之比为0.05时,沉降数降至l6S,此时DNA为没有超螺旋的松弛形式;当染料分子和核苷酸的比值增加到0.09时,沉降常数又上升到大约21S,此时DNA分子为正超螺旋。这种关系如上图右所示,不过要注意的是,溴化乙锭并没有改变Lk值,只不过是由溴化乙锭分子的嵌入,增加了局部DNA二级结构的紧缠状态。因而,随着嵌入染料分子数的增多,起初表现为负超螺旋的减少与消失,随后便是正超螺旋的增加。这与单链DNA结合蛋白促进负超螺旋转变为泡状结构的情况是类似的。
拓扑异构酶(topoisomerase):通过切断DNA的一条或两条链中的磷酸二酯键,然后重新缠绕和封口来改变DNA连环数的酶。DNA促旋酶。
DNA拓扑异构酶 DNA topoisomerase
为催化DNA拓扑学异构体相互转变的酶之总称。催化DNA链断开和结合的偶联反应,为了分析体外反应机制,用环状DNA为底物。在闭环状双链DNA的拓扑学转变中,要暂时的将DNA的一个链或两个链切断,根据异构体化的方式而分为二个型。切断一个链而改变拓扑结构的称为Ⅰ型拓扑异构酶(top- oisomeraseⅠ),通过切断二个链来进行的称为Ⅱ型拓扑异构酶(topoisomeraseⅡ)。属于Ⅰ型的拓扑异构酶,有大肠杆菌的ω蛋白(ω-protein,由分子量11万的单个多肽链所成)及各种真核细胞中存在的切断-结合酶(nicking-closing enzyme,分子量约6万5千—7万的及分子量约10万的)。Ⅱ型拓扑异构酶,有存在于细菌中的DNA促旋酶、噬菌体T4的拓扑异构酶Ⅱ以及真核细胞中依赖ATP的拓扑异构酶Ⅱ等。另外,噬菌体λ的irt基因产物和噬菌体φX174的基因A的产物等也具有切断—结合酶的活性,可认为是拓扑异构酶之一种。Ⅰ型拓扑异构酶不需要ATP的能量而催化异构体化,作为反应的中间产物,在原核生物来说是游离型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端与酶形成共价键,而真核生物是3′-OH末端5′-磷酸末端与酶形成共价键。此酯键中所贮存的能量,可能在切断端的再结合上起着作用。Ⅰ型拓扑异构化酶催化的反应有下列各种:使超螺旋DNA在每一切断—结合反应中,使L数(参见DNA拓扑学异构体)发生一种变化,即松弛(relaxation)(图1)。将互补的单链环状DNA转变成具有螺旋结构的双链环状DNA(图 2),使单链DNA打结(topological knot)或解结(图3)。另外在二个环状双链DNA一个分子的一个链切断时,形成链环状二聚体的分子(ca-tenane)。在Ⅱ型拓扑异构酶中,DNA促旋酶可单独催化闭环状DNA产生超螺旋,这是独特的。其它二个型的酶,除可使超螺旋松弛也需要ATP的能量外,还可催化促旋酶的催化反应。真核细胞的拓扑异构酶Ⅰ,参与核小体的形成,细菌的ω蛋白参与转录和某种转位子的插入。促旋酶和T4拓扑异构酶Ⅱ参与DNA的复制和转录过程。 DNA 拓扑异构酶 I (DNA Topoisomerase I)催化4种反应:①超螺旋的松弛;②绳结(knot)的形成;③环状双链分子的形成;④环状双链分子的连接。本酶由于来源于小牛胸腺,与来源于原核生物的酶性质不同,即使在Mg2+不存在的条件下也显示活性。而且,原核生物由来的DNA Topoisomerase I 只作用负链的超螺旋分子,而本酶则能使正负两方的超螺旋分子均形成松散型。向左转|向右转
我现在做的课题研究的是肾脏肿瘤。其中有实验涉及到FISH。咨询和查阅过相关文献和公司,一个染色体荧光探针的价格贵的惊人(动不动近万),做过这方面实验的老师,情况是这样的吗?
我要做的是在石蜡切片上进行FISH实验,操作难度是不是很大?有没有公司可以帮助完成此类实验呢?
请知道的老师给我帮助,谢谢!!
用引物PCR扩增目基片段;
选择合适(抗性标记、酶切位点等)克隆载体(保真扩增),并PCR片段连接入克隆载体;(般用Taq酶PCR产物末尾自带A,Solution 1作用与两端各带T线性T载体直接相连)
连接产物转化入受态肠杆菌,使含抗素培养基扩增;
肠杆菌提取质粒(即前面连接产物),酶切鉴定测序鉴定均误目基片段切并与新表达载体连接,再转化入肠杆菌扩增,再提质粒,即想要目基片段克隆.
我要克隆一个基因,这个基因有3个外显子,然后和质粒相连,重组载体,转到真核细胞中做表达,我用基因组DNA做模板,请问这么做可以吗,有人做过类似的实验吗?
请大家帮帮忙,本人毕业在即,谢谢大家
设计引物候引物度设置25-27左右
1)克隆技术减轻些能母亲性痛苦
2)克隆实验实施推遗传发展制造物器官移植辟前景
3)克隆技术用于治疗神经系统损伤神经组织再干细胞修复神经损伤
克隆许缺点避免: 1)克隆技术干扰自演化程
2)克隆技术种昂贵技术需要量资金物专业参与失败率高
3)克隆技术应用于体导致代遗传性状工控制4)克隆技术用于创建超或强壮体魄智力迟钝外克隆技术效使用类遗传男性失意义
所说科技双刃剑优点缺点并没标准答案看着使用
机构:
负责人:
研究方向:如血液病,生育遗传咨询等
成绩:
非常感谢!
我用简并引物从鸡cDNA中扩增出一个片段,约250bp,测序后拿来BLAST时却发现,与之同源性最高的并不是其它的Mx基因,而是人的某一个基因,比对的结果中与该序列同源性较高的有人及鼠Mx基因,但是同源性并不是很高。该基因在同一种生物的不同品种中具有多态性,已经有其它的鸡的Mx基因被克隆,按道理如果该片段是Mx基因的一部分它应该与其它的鸡的Mx基因有很高的同源性才对呀,所以,我怀疑简并引物PCR扩增出来的该片段不是Mx基因,因为RACE试剂盒很贵,现在也不敢继续作下去,怕作下去得不到什么结果。现在贴上我BLAST结果中score排在最前面的部分,还请有经验的兄弟帮我分析分析。我不胜感激。
Sequencesproducingsignificantalignments:(bits)Value
gi|19807872|gb|AC087694.3|Homosapienschromosome8,clone...460.033
gi|19073805|gb|AC090733.7|Homosapienschromosome8,clone...460.033
gi|38081550|ref|XM_358891.1|MusmusculussimilartoMyxovi...440.13
gi|47026513|gb|AC024957.9|Musmusculuschromosome16,clon...440.13
gi|13435314|gb|AC090999.1|CaenorhaBDitiseleganscosmidY8...440.13
gi|21955645|emb|AL732599.5|MouseDNAsequencefromcloneR...440.13
gi|199921|gb|J03368.1|MUSMX2Mouseinterferon-inducedMx2m...440.13
gi|31442540|gb|AC138314.4|MusmusculusBACcloneRP23-218B...420.52
gi|21591808|gb|AC092491.6|Homosapiens12BACRP11-125G9(...420.52
gi|40949625|gb|AC127597.5|MusmusculusBACcloneRP23-71A1...420.52
gi|6996929|ref|NM_010846.1|Musmusculusmyxovirus(influen...402.1
gi|15029783|gb|BC011113.1|Musmusculusmyxovirus(influenz...402.1
gi|13938021|gb|BC007127.1|Musmusculusmyxovirus(influenz...402.1
gi|19705454|ref|NM_134350.1|Rattusnorvegicusmyxovirus(i...402.1
gi|16041423|gb|AC091589.8|Homosapienschromosome18,clon...402.1
gi|47104230|gb|BT012815.1|Lycopersiconesculentumclone11...402.1
gi|20270172|gb|AC114485.2|Homosapienschromosome1clone...402.1
gi|28372591|gb|AC008939.8|Homosapienschromosome5clone...402.1
gi|19310326|gb|AC105250.3|HomosapiensBACcloneRP11-39C1...402.1
gi|37537322|dbj|BS000055.1|Pantroglodyteschromosome22c...402.1
gi|37537321|dbj|BS000054.1|Pantroglodyteschromosome22c...402.1
gi|18464281|gb|AC104690.2|HomosapiensBACcloneRP11-183P...402.1
gi|15321560|gb|AC079232.7|HomosapiensBACcloneRP11-360H...402.1
gi|56724|emb|X52713.1|RNMX3RatmRNAforMx3protein402.1
gi|56722|emb|X52712.1|RNMX2RatmRNAforMx2protein402.1
gi|56720|emb|X52711.1|RNMX1RatmRNAforMx1protein402.1


暂无品牌分类