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MoBiTec/pNZ124 Lactococcus lactis cloning vector/Vector Systems/VS-ELV01100
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| Order #: | VS-ELV01100 |
| Unit Size: | 10 µg |
| Supplier: | MoBiTec GmbH |
| Shipping: | RT |
| Storage: | 4 °C |
| Subcategory: | Lactococcus Expression Systems |
MoBiTecGmbH是一家私人控股公司，由StephanDiekmann教授于1987年创立。与Max-Planck学会的密切关系以及德国领先的研究中心之一哥廷根的所在地促进了与某些研究中心的密切合作。德国最具创造力的科学家。此外，MoBiTec一直与欧洲和北美的科学家广泛合作，包括法国巴斯德研究所和荷兰Vrije大学的科学家。通过将许多研究人员的精彩创意商业化，MoBiTec能够提供一系列独特的高质量产品和简化的协议，使实验室生活更轻松，并为实际研究留出更多时间。MoBiTec的产品包括e。G。用于体内检测蛋白质-蛋白质或DNA-蛋白质相互作用的双杂交系统，用于筛选特定肽配体的噬菌粒展示系统和选择具有特异性结合特性的新蛋白质，方便的LamBDaPS基因组文库用于克隆的多功能DNA载体，表达和分析靶基因，有效表达和纯化重组蛋白的试剂盒，细胞转染试剂和细胞培养工具，固定化和可溶性酶，许多用于基因组学和蛋白质组学研究的产品（例如用于PCR，核酸和蛋白质纯化和分析），众多抗体，细胞因子，生长因子和重组蛋白，优质荧光试剂和试剂盒（如蛋白标记试剂盒，标记抗体，细胞染色试剂，柱和凝胶电泳附件）。与其自有产品线并行，MoBiTec分销德国多家国际公司的产品，包括荧光探针和研究化学品（AnaSpec，TEFLabs），量子点，各种DNA纯化试剂盒和DNA聚合酶（EdgeBio），诊断工具（ZJBioTech）），凝胶电泳配件（Amresco，ClareChemical），糖生物学产品（DextraLaboratories，Sumitomo），细胞转染试剂（Mirus）以及抗体，蛋白质，底物，精细化学品和分子和细胞生物学试剂盒 -特别是病毒学，免疫学，神经生物学，细胞凋亡，信号转导，细胞增殖，细胞毒性和癌症研究（MBLI，AGScientific，Amresco，AdarBiotech，AnaSpec，Echelon）。MoBiTec提供全面的服务，从清晰完整的产品文档开始，为客户提供个性化的建议和技术服务。MoBiTec产品通过MoBiTec的总部在德国分销，在其他国家由分销商分销。此外，MoBiTec不断寻求新产品和可销售的许可技术，因此对科学合作非常感兴趣，以开发创新的产品理念。
MoBiTec拥有来自欧洲和北美的研究人员，包括法国的Pasteur研究中心和荷兰的Vrije大学的科学家。MoBiTec公司能提供独一无二的高质量产品,从而简化实验设计，而留出更多更宝贵的时间用于实际的研究。产品包括：双杂交和单杂交系统——体内蛋白-蛋白和DNA-蛋白关系，噬菌体展示系统——筛选特殊的多肽配体和选择具有特异性结合特性的新的蛋白质，LamdaPS基因文库，用于克隆的多功能DNA载体，靶基因的表达与分析，重组蛋白质高效表达和纯化试剂盒，细胞转染试剂和细胞培养工具，各种固体和溶解状态的酶，基因组学和蛋白组学研究产品（PCR，核酸，蛋白质纯化分析），各种抗体、细胞因子、生长因子、重组蛋白质，高级荧光试剂和试剂盒（蛋白质标记试剂盒，标记抗体，细胞染色试剂，钙指示器），亲和层析仪，凝胶分析工具——凝胶柱和凝胶电泳附件。
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2018-08-07
尽管整合性转化的频率很低，但可以通过与整合位点同源的克隆化基因内的限制性位点将质粒线性化以提高转化效率。得到的整合体含有完整的质粒，两侧为基因的完整拷贝。 查看更多
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2021-09-15
对CGG重复片段的PCR分析要比Southern分析（基本方案2)快，且能够准确确定正常片段（6~45次重复）、中间状态（45~55次重复）及前突变单体情况（55~200 次重复)。PCR同时也能够检测出各世代间重复次数的小的改变。在PCR反应中用7-deaza-2'-dGTP代替dGTP可以完成常规PCR反应无法完成的全突变（>200次重复）的扩增。 查看更多
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2018-11-27
ImmunoChemistry Technologies公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多
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2021-07-29
聚合酶链式反应-单链构象多态（Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism，PCR-SSCP）技术是在PCR技术基础上发展起来的，它是一种简单、快速、经济的用来显示在PCR反应产物中单碱基突变（点突变）的手段。该方法已被用做癌基因和抑癌基因突变的筛查检测，遗传病的致病基因分析和基因诊断，基因制图等领域。 查看更多
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2021-08-17
对应于 mRNA 的 DNA 序列，可以被回收、克隆、测序，可以用作杂交或筛库的探针。 查看更多
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2021-07-22
PCR扩增产物的克隆可以：（1）获得目的DNA片段；（2）用于原核表达的研究；（3）广泛应用于分子生物学相关研究。 查看更多
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2018-08-06
克隆抗原受体重组出现于大多数淋巴瘤细胞，因此该标记被用于第 1 步淋巴组织活检。易位则用于第 2 步检查，对肿瘤进行分型。对于组织学和其他结果预示有特殊移位存在的情况可以直接检测易位。抗原受体重组不适用于大多数非淋巴细胞白血病，在这些病例中染色体易位是唯一适合的分子标记。 查看更多
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2019-04-16
英国剑桥Horizon Discovery产品介绍|代理商整理 查看更多
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2021-07-30
DNA甲基化是一种表观遗传修饰，它是由DNA甲基转移酶（DNA methyl-transferase, Dnmt）催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体，将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶（mC）的一种反应，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是唯一存在的化学性修饰碱基。 查看更多
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2018-12-26
调节瞬时转染基因的表达l 四环素作为哺乳动物细胞中可诱导基因表达的调控物阶段一：pTet-tTAk稳定转染成纤维细胞培养和转染细胞1. 在DMEM完全培养液中培养贴壁细胞。转染前一天，把细胞换到含有0.5μg/ml四环素-HCl（四环素）的DMEM完全培养液中。每个10 cm培养皿中加入足量细胞，使转染那天，细胞可以 查看更多
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2021-07-20
PCR技术可用于：（1）检验感染性疾病是否处于隐性或亚临床状态；（2）有效检测癌基因的突变，准确检测癌基因的表达量；（3）临床应用于检测地中海贫血的基因突变。 查看更多
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2021-09-09
介绍了一种受磷酸耗调节的能有效介导反转录载体质粒D N A 进入细胞的反转录病毒包装系统的转染方法。介绍了基于P C R 技术检测 B 细胞发育过程中的同型转换。用P C R 检测稀有 m R N A ，分别为 P C R 对 人 或 小 鼠 的 T C R 可变区基因进行定性和定量，通 过 P C R 产物克隆和测序来研究表达基因的连接多样性。提供了 R N A 酶保护实验方案， R N A 酶保护分析是一种敏感和定性的方法 ，检 测 8〜1 2 种基因 的 相 对 转 录 水 平。作者：J.E.科利根 查看更多
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2011年7月03179生物化学(三)自考真题及答案自考生网123
huangrrxx2021-08-20
[题目]JTopoisomeraseI-DNAcomplexescontributetoarsenictrioxide-inducedapoptosis.
[日期]BiolChem.2004Jun3
[作者]SordetO,LiaoZ,LiuH,AntonyS,StevensEV,KohlhagenG,FuH,PommierY.
[单位]NCI,NIH,Bethesda,MD20892.
[摘要]TopoisomeraseIisanessentialenzymethatrelaxesDNAsupercoilingbyformingcovalentDNAcleavagecomplexes,whicharenormallytransient.TopoisomeraseI-DNAcomplexescanbetrappedbyanticancerdrugs(camptothecins),aswellasbyendogenousandexogenousDNAlesions.Weshowherethatarsenictrioxide(apotentinducerofapoptosisthatinducestheintracellularaccumulationofreactiveoxygenspeciesandtargetsmitochondria)inducescellulartopoisomeraseIcleavagecomplexes.Bcl-2overexpressionandquenchingofreactiveoxygenspecies,whichpreventarsenictrioxide-inducedapoptosis,alsopreventtheformationoftopoisomeraseI-DNAcomplexes,whereasenhancementofreactiveoxygenspeciesaccumulationpromotesthesecomplexes.Thecaspaseinhibitor,z-VADpartiallypreventsarsenictrioxide-inducedtopoisomeraseI-DNAcomplexesandapoptosis,suggestingthatactivatedcaspasesfurthermaintainintracellularlevelsofreactiveoxygenspeciesthatinducetheformationoftopoisomeraseI-DNAcomplexes.DownregulationoftopoisomeraseIexpressiondecreasesarsenictrioxide-inducedapoptoticDNAfragmentation.Thus,weproposethatarsenictrioxideinducestopoisomeraseI-DNAcomplexesthatparticipateinchromatinfragmentationandprogrammedcelldeathduringapoptosis.
[翻译]拓扑异构酶I是一种很重要的酶，可以作用于DNA,与之形成短暂的DNA共价物，使DNA超螺旋结构解开。抗癌药物如喜树碱，以及内源性和外源性的DNA损伤剂可诱导拓扑异构酶I–DNA复合物形成。我们研究发现三氧化二砷（细胞凋亡诱导剂，能诱导细胞内活性氧和线粒体增多）可诱导拓扑异构酶I–DNA复合物的形成Bcl-2表达增加和活性氧的消失提示Bcl-2可以预防三氧化二砷引起的细胞凋亡以及防止拓扑异构酶I–DNA复合物形成，z-VAD不仅是caspases的抑制剂，也可以防止拓扑异构酶I–DNA复合物的形成，他的作用说明拓扑异构酶I–DNA复合物的形成很有可能是通过激活caspases导致细胞内活性氧的含量进一步升高。拓扑异构酶I表达下调会降低三氧化二砷诱导的细胞小体的生成，因此，我们推测三氧化二砷诱导的拓扑异构酶I–DNA复合物的形成很可能导致染色体的断裂和程序化细胞死亡。
[点评]一直以来，我们发现三氧化二砷可以用来治疗白血病，但对于它为什么能用来治疗白血病我们一直不太清楚它的机制，对于三氧化二砷的毒理研究目前是热点。希望通过本摘要的翻译，引起大家对毒物的机制研究的兴趣。
[日期]BiolChem.2004Jun3
[作者]SordetO,LiaoZ,LiuH,AntonyS,StevensEV,KohlhagenG,FuH,PommierY.
[单位]NCI,NIH,Bethesda,MD20892.
[摘要]TopoisomeraseIisanessentialenzymethatrelaxesDNAsupercoilingbyformingcovalentDNAcleavagecomplexes,whicharenormallytransient.TopoisomeraseI-DNAcomplexescanbetrappedbyanticancerdrugs(camptothecins),aswellasbyendogenousandexogenousDNAlesions.Weshowherethatarsenictrioxide(apotentinducerofapoptosisthatinducestheintracellularaccumulationofreactiveoxygenspeciesandtargetsmitochondria)inducescellulartopoisomeraseIcleavagecomplexes.Bcl-2overexpressionandquenchingofreactiveoxygenspecies,whichpreventarsenictrioxide-inducedapoptosis,alsopreventtheformationoftopoisomeraseI-DNAcomplexes,whereasenhancementofreactiveoxygenspeciesaccumulationpromotesthesecomplexes.Thecaspaseinhibitor,z-VADpartiallypreventsarsenictrioxide-inducedtopoisomeraseI-DNAcomplexesandapoptosis,suggestingthatactivatedcaspasesfurthermaintainintracellularlevelsofreactiveoxygenspeciesthatinducetheformationoftopoisomeraseI-DNAcomplexes.DownregulationoftopoisomeraseIexpressiondecreasesarsenictrioxide-inducedapoptoticDNAfragmentation.Thus,weproposethatarsenictrioxideinducestopoisomeraseI-DNAcomplexesthatparticipateinchromatinfragmentationandprogrammedcelldeathduringapoptosis.
[翻译]拓扑异构酶I是一种很重要的酶，可以作用于DNA,与之形成短暂的DNA共价物，使DNA超螺旋结构解开。抗癌药物如喜树碱，以及内源性和外源性的DNA损伤剂可诱导拓扑异构酶I–DNA复合物形成。我们研究发现三氧化二砷（细胞凋亡诱导剂，能诱导细胞内活性氧和线粒体增多）可诱导拓扑异构酶I–DNA复合物的形成Bcl-2表达增加和活性氧的消失提示Bcl-2可以预防三氧化二砷引起的细胞凋亡以及防止拓扑异构酶I–DNA复合物形成，z-VAD不仅是caspases的抑制剂，也可以防止拓扑异构酶I–DNA复合物的形成，他的作用说明拓扑异构酶I–DNA复合物的形成很有可能是通过激活caspases导致细胞内活性氧的含量进一步升高。拓扑异构酶I表达下调会降低三氧化二砷诱导的细胞小体的生成，因此，我们推测三氧化二砷诱导的拓扑异构酶I–DNA复合物的形成很可能导致染色体的断裂和程序化细胞死亡。
[点评]一直以来，我们发现三氧化二砷可以用来治疗白血病，但对于它为什么能用来治疗白血病我们一直不太清楚它的机制，对于三氧化二砷的毒理研究目前是热点。希望通过本摘要的翻译，引起大家对毒物的机制研究的兴趣。
第6章目的基因的分离克隆(植物基因工程)123
风音28082021-08-17
离目基
物芯片高密度固定固相支持介质物信息微列阵列阵每序列及位置都已知并按预先设定顺序点阵基芯片物芯片种其固定核算类物质主要用于DNA、RNA析DNA芯片微点阵两种
离目基指基组发现或找某目（标）基目前通①比较同物种间或同物种同体间；或同体同发育期或同环境条件基差异表达（基表达平行析）实现采用基芯片技术进行基差异表达研究通杂交直接检测细胞mRNA种类及丰度与传统差异显示相比具品用量自化程度高检测目标DNA密度及并行种类等优点②利用同源探针cDNA或EST微列阵筛选离目基目前DNA 芯片、cDNA芯片两种其基本步骤包括：基芯片制备、靶品制备、杂交与检测、目基离并获全
2 基文库技术离目基
基文库指某物类型全部基集合种集合重组体形式现某物DNA片段群体与载体重组重组转化宿主细胞转化细胞选择培养基单菌落（或噬菌斑或细胞）即DNA片段克隆全部DNA片段克隆集合体即该物基文库其类型基组文库与cDNA文库、克隆文库与表达文库按载体智力文库、噬菌体文库、黏粒载体文库、工染色体文库等基文库构建文库筛选基主要几种：核算杂交、免疫检测、DNA同胞选择、PCR筛选等基文库构建目前基工程核工作离目进用
3 功能蛋白组离目基
蛋白组指细胞内全部蛋白存及式即基组表达产总蛋白质统称功能蛋白质组指些能涉及特定功能机理蛋白质群体主要研究蛋白质双向电泳通高效液相色谱、质普蛋白质序列进行析借用物手段则进行目基离：应用PCR进行离目基：通蛋白质序列析通密码简并性设计简并引物利用RT-PCR 目基全；应用核算杂交筛选离目基：即利用简并寡核苷酸探针筛选cDNA或基组文库；免疫雪筛选离目基：通蛋白特异抗体与目蛋白专结合表达文库离目基蛋白基
4 PCR技术基克隆应用
PCR技术已经渗透物各领域克隆获cDNA全面起着重要作用利用 PCR技术特定条件基表达进行检测即通mRNA差别显示（DDRT-PCR）鉴定离所需目基；通RT-PCR克隆目基 cDNA区域进行cDNA文库构建通锚定PCR或反向PCR快速克隆cDNA末端未知序列、功能基调控区等现用于基离克隆 PCR主要：RT-PCRDDRT-PCR用于cDNA末端快速克隆RACE（第3节）用于DNA序列克隆Panhankle- PCR、Cassette-PCR及减cDNA文库PCR构建等Panhankle-PCR、Cassette-PCR基组已知DNA相临未知序列克隆奠定良基础
5 mRNA差别显示技术离差别表达基
mRNA差异显示技术组织特异性表达基进行离种快速行效mRNA反转录与PCR技术结合发展起种RNA指纹图谱技术利用5’锚定引物oligo（dT）12MN3’端随机引物总mRNA进行PCR扩增期差异表达条带并其差异显示条带进行收、克隆
6 插入突变离克隆目基
获突变体进行未知基克隆用举T-DNA标签转座诱变离克隆目基例T-DNA标签T-DNA任何兴趣基处产插入性突变获析该基功能照突变体T-DNA左右边界间携带外源报告基片段作选择性遗传标记插入序列已知获转基重组突变体通各种克隆PCR策略加研究倘若35S强启T-DNA整合宿主基组整合内原基游则产异增加或表达空特异性改变破坏基表达效获性突变功能丧失性突变等转座标签株携带功能性转座系统植物与遗传差异同种植物杂交转座插入某特定基序列破坏该基编码蛋白进导致见表性破坏或改变产代筛选新型突变体
物芯片高密度固定固相支持介质物信息微列阵列阵每序列及位置都已知并按预先设定顺序点阵基芯片物芯片种其固定核算类物质主要用于DNA、RNA析DNA芯片微点阵两种
离目基指基组发现或找某目（标）基目前通①比较同物种间或同物种同体间；或同体同发育期或同环境条件基差异表达（基表达平行析）实现采用基芯片技术进行基差异表达研究通杂交直接检测细胞mRNA种类及丰度与传统差异显示相比具品用量自化程度高检测目标DNA密度及并行种类等优点②利用同源探针cDNA或EST微列阵筛选离目基目前DNA 芯片、cDNA芯片两种其基本步骤包括：基芯片制备、靶品制备、杂交与检测、目基离并获全
2 基文库技术离目基
基文库指某物类型全部基集合种集合重组体形式现某物DNA片段群体与载体重组重组转化宿主细胞转化细胞选择培养基单菌落（或噬菌斑或细胞）即DNA片段克隆全部DNA片段克隆集合体即该物基文库其类型基组文库与cDNA文库、克隆文库与表达文库按载体智力文库、噬菌体文库、黏粒载体文库、工染色体文库等基文库构建文库筛选基主要几种：核算杂交、免疫检测、DNA同胞选择、PCR筛选等基文库构建目前基工程核工作离目进用
3 功能蛋白组离目基
蛋白组指细胞内全部蛋白存及式即基组表达产总蛋白质统称功能蛋白质组指些能涉及特定功能机理蛋白质群体主要研究蛋白质双向电泳通高效液相色谱、质普蛋白质序列进行析借用物手段则进行目基离：应用PCR进行离目基：通蛋白质序列析通密码简并性设计简并引物利用RT-PCR 目基全；应用核算杂交筛选离目基：即利用简并寡核苷酸探针筛选cDNA或基组文库；免疫雪筛选离目基：通蛋白特异抗体与目蛋白专结合表达文库离目基蛋白基
4 PCR技术基克隆应用
PCR技术已经渗透物各领域克隆获cDNA全面起着重要作用利用 PCR技术特定条件基表达进行检测即通mRNA差别显示（DDRT-PCR）鉴定离所需目基；通RT-PCR克隆目基 cDNA区域进行cDNA文库构建通锚定PCR或反向PCR快速克隆cDNA末端未知序列、功能基调控区等现用于基离克隆 PCR主要：RT-PCRDDRT-PCR用于cDNA末端快速克隆RACE（第3节）用于DNA序列克隆Panhankle- PCR、Cassette-PCR及减cDNA文库PCR构建等Panhankle-PCR、Cassette-PCR基组已知DNA相临未知序列克隆奠定良基础
5 mRNA差别显示技术离差别表达基
mRNA差异显示技术组织特异性表达基进行离种快速行效mRNA反转录与PCR技术结合发展起种RNA指纹图谱技术利用5’锚定引物oligo（dT）12MN3’端随机引物总mRNA进行PCR扩增期差异表达条带并其差异显示条带进行收、克隆
6 插入突变离克隆目基
获突变体进行未知基克隆用举T-DNA标签转座诱变离克隆目基例T-DNA标签T-DNA任何兴趣基处产插入性突变获析该基功能照突变体T-DNA左右边界间携带外源报告基片段作选择性遗传标记插入序列已知获转基重组突变体通各种克隆PCR策略加研究倘若35S强启T-DNA整合宿主基组整合内原基游则产异增加或表达空特异性改变破坏基表达效获性突变功能丧失性突变等转座标签株携带功能性转座系统植物与遗传差异同种植物杂交转座插入某特定基序列破坏该基编码蛋白进导致见表性破坏或改变产代筛选新型突变体
人脸识别系统品牌商,请问国内比较厉害的人脸识别公司是哪一家?_...123
lone_king2021-07-22
请以下列格式列出
机构：
负责人：
研究方向：如血液病，生育遗传咨询等
成绩：
非常感谢！
机构：
负责人：
研究方向：如血液病，生育遗传咨询等
成绩：
非常感谢！
【转贴】世界首例“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”在吉林大学诞生...123
longjlau2021-09-02
世界首例“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”在吉林大学诞生
[党务办公室][发布人:李荣茂][阅读357次][2008-9-1016:25:18][修改][删除][打印]
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9月9日下午5时40分，世界首例“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”在吉林大学农学部诞生。这标志着人类首次培育的“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”获得了成功。
9月9日下午5时40分至7时10分，在吉林大学原种猪场，三头“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”先后顺利诞生，体重分别为1050克、1100克和550克。
猪瘟是一种严重威胁养猪业的传染病。为了培育出能够抗猪瘟病毒的猪，以吉林大学农学部畜牧兽医学院赖良学教授为首席专家和军事医学科学院军事兽医研究所的专家共同组成的课题组，在国家自然科学基金资助的基础上，经过近两年时间的协作攻关，将能抑制猪瘟病毒的基因转染到“中国实验小型猪”胎儿成纤维细胞内，并以此体细胞进行核移植制备猪克隆胚胎，将此胚胎移植到杜洛克代孕母猪体内，怀孕114天后顺利产出三头健康的克隆仔猪。经对仔猪体细胞进行基因检测，证实该克隆猪的细胞带有所转入的抗猪瘟病毒基因。进一步的抗病毒检测实验正在进行中。这三头克隆猪的诞生标志着我国在转基因猪抗病育种研究领域已经达到了国际领先水平。
[党务办公室][发布人:李荣茂][阅读357次][2008-9-1016:25:18][修改][删除][打印]
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9月9日下午5时40分，世界首例“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”在吉林大学农学部诞生。这标志着人类首次培育的“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”获得了成功。
9月9日下午5时40分至7时10分，在吉林大学原种猪场，三头“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”先后顺利诞生，体重分别为1050克、1100克和550克。
猪瘟是一种严重威胁养猪业的传染病。为了培育出能够抗猪瘟病毒的猪，以吉林大学农学部畜牧兽医学院赖良学教授为首席专家和军事医学科学院军事兽医研究所的专家共同组成的课题组，在国家自然科学基金资助的基础上，经过近两年时间的协作攻关，将能抑制猪瘟病毒的基因转染到“中国实验小型猪”胎儿成纤维细胞内，并以此体细胞进行核移植制备猪克隆胚胎，将此胚胎移植到杜洛克代孕母猪体内，怀孕114天后顺利产出三头健康的克隆仔猪。经对仔猪体细胞进行基因检测，证实该克隆猪的细胞带有所转入的抗猪瘟病毒基因。进一步的抗病毒检测实验正在进行中。这三头克隆猪的诞生标志着我国在转基因猪抗病育种研究领域已经达到了国际领先水平。
克隆给人类带来的坏处有哪些最好不少于10条.我是要开辩论会,需要...123
10426729322021-07-21
少于10条．我要辩论需要些资料我反．给我答案详细点．谢谢
荧光原位杂交（FISH）操作方法123
bachongwang792021-07-20
各位老师好！！
我现在做的课题研究的是肾脏肿瘤。其中有实验涉及到FISH。咨询和查阅过相关文献和公司，一个染色体荧光探针的价格贵的惊人（动不动近万），做过这方面实验的老师，情况是这样的吗？
我要做的是在石蜡切片上进行FISH实验，操作难度是不是很大？有没有公司可以帮助完成此类实验呢？
请知道的老师给我帮助，谢谢！！
我现在做的课题研究的是肾脏肿瘤。其中有实验涉及到FISH。咨询和查阅过相关文献和公司，一个染色体荧光探针的价格贵的惊人（动不动近万），做过这方面实验的老师，情况是这样的吗？
我要做的是在石蜡切片上进行FISH实验，操作难度是不是很大？有没有公司可以帮助完成此类实验呢？
请知道的老师给我帮助，谢谢！！
【求助】我这样克隆基因是否可以写进文章中 PCR技术讨论版...123
实验狂人20132013-12-10
DNA分子克隆技术(也称基因克隆技术)123
2021-07-30
指外源DNA插入运载体,转入细菌等微物胞扩增几百万倍程.
基因克隆在医学的应用 123
2021-08-07
引物设计:primer 5oligo 7
序列析：SnapGene ViewerSerialCloner 2-6-1
序列析：SnapGene ViewerSerialCloner 2-6-1
应用细菌分子间同源重组机制快速克隆腺病毒基因组的研究123
hixpp2021-07-29
最近在做腺病毒基因克隆，吃了大亏，长了见识。
我总共要做6个克隆。先把6个基因的CDNA克隆到shuttle质粒pAdTrack-CMV，进展很顺利。然后用PmeI处理重组shuttle质粒，过夜酶切，也很顺利。但与腺病毒backbone质粒pAdEasy-1共转化时遇到了大麻烦。起初，我没有BJ5183Ecoli菌株，就想当然像拿DH5a替代，但一直不成功。无论CaCl2法和电转法都不行，挑出来的克隆不是只含重组shuttle质粒，就是同时含有两种质粒，即重组shuttle质粒和pAdEasy-1。但各是各的，二者并没有在细菌内发生同源重组。
于是我借了BJ5183Ecoli菌株，采用电转化法，这时总算有点成功。6个重组腺病毒质粒构建成功了4个。经酶切鉴定均这4个克隆均正确。但是，另外2个总是失败，原因不详。于是我就重复重复，期间，糟糕的事情发生了....电转杯总是被击破，Bio-Rad电转仪总是出现"检测到低压故障电弧”的字样。想来想去找不到好的对策。起初我以为是有气泡，于是在做电转时尽可能避免气泡的出现。遗憾的是，这毫无帮助，电转杯还是击一个破一个。我那个心疼呀。倒不是心疼杯子，心疼的是我的细菌、质粒，用Tip又吸不出来，所以只好把它们丢掉。
Finally，我发现了其中的问题。我改用去离子水来溶解重组shuttle质粒和pAdEasy-1时电转杯就再也不破了。我分析，原因可能与电转菌液的离子强度有关。当我放较大体积（>15ul）的质粒到BJ5183Ecoli菌（20ul）中时，里面的TE缓冲液可能导致电击时产生高强度电流，结果杯子就破了。由此看来，气泡本身对电击可能不无影响，反而会减弱电流强度。但离子强度就不同了，离子强度太高，足以导致一次实验报废。
后感：失败并不可怕，可怕的是想当然去重复，而不去探究失败的原因。朋友们，如在这方面好的经历坏的经历，尽可拿出来一起分享。
让我们一起成长。
我总共要做6个克隆。先把6个基因的CDNA克隆到shuttle质粒pAdTrack-CMV，进展很顺利。然后用PmeI处理重组shuttle质粒，过夜酶切，也很顺利。但与腺病毒backbone质粒pAdEasy-1共转化时遇到了大麻烦。起初，我没有BJ5183Ecoli菌株，就想当然像拿DH5a替代，但一直不成功。无论CaCl2法和电转法都不行，挑出来的克隆不是只含重组shuttle质粒，就是同时含有两种质粒，即重组shuttle质粒和pAdEasy-1。但各是各的，二者并没有在细菌内发生同源重组。
于是我借了BJ5183Ecoli菌株，采用电转化法，这时总算有点成功。6个重组腺病毒质粒构建成功了4个。经酶切鉴定均这4个克隆均正确。但是，另外2个总是失败，原因不详。于是我就重复重复，期间，糟糕的事情发生了....电转杯总是被击破，Bio-Rad电转仪总是出现"检测到低压故障电弧”的字样。想来想去找不到好的对策。起初我以为是有气泡，于是在做电转时尽可能避免气泡的出现。遗憾的是，这毫无帮助，电转杯还是击一个破一个。我那个心疼呀。倒不是心疼杯子，心疼的是我的细菌、质粒，用Tip又吸不出来，所以只好把它们丢掉。
Finally，我发现了其中的问题。我改用去离子水来溶解重组shuttle质粒和pAdEasy-1时电转杯就再也不破了。我分析，原因可能与电转菌液的离子强度有关。当我放较大体积（>15ul）的质粒到BJ5183Ecoli菌（20ul）中时，里面的TE缓冲液可能导致电击时产生高强度电流，结果杯子就破了。由此看来，气泡本身对电击可能不无影响，反而会减弱电流强度。但离子强度就不同了，离子强度太高，足以导致一次实验报废。
后感：失败并不可怕，可怕的是想当然去重复，而不去探究失败的原因。朋友们，如在这方面好的经历坏的经历，尽可拿出来一起分享。
让我们一起成长。
RNA干扰的作用机制及小干扰RNA的合成方法 123
TD哥哥34972017-11-01
许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。
最适用于：已经找到最有效的siRNA的情况下，需要大量siRNA进行研究。
不适用于：筛选siRNA等长时间的研究，主要原因是价格因素。 以DNA Oligo为模版，通过体外转录合成siRNAs，成本相对化学合成法而言比较低，而且能够比化学合成法更快的得到siRNAs。不足之处是实验的规模受到限制，虽然一次体外转录合成能提供足够做数百次转染的siRNAs，但是反应规模和量始终有一定的限制。而且和化学合成相比，还是需要占用研究人员相当的时间。值得一提的是体外转录得到的siRNAs毒性小，稳定性好，效率高，只需要化学合成的siRNA量的1/10就可以达到化学合成siRNA所能达到的效果，从而使转染效率更高。
最适用于：筛选siRNAs，特别是需要制备多种siRNAs，化学合成的价格成为障碍时。
不适用于：实验需要大量的，一个特定的siRNA。长期研究。
用RNase Ⅲ 消化长片断双链RNA制备siRNA
其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs “混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版，用体外转录的方法制备长片断双链dsRNA ，然后用RNase Ⅲ (or Dicer) 在体外消化，得到一种siRNAs“混合鸡尾酒”。在除掉没有被消化的dsRNA后，这个siRNA混合物就可以直接转染细胞，方法和单一的siRNA转染一样。由于siRNA混合物中有许多不同的siRNAs，通常能够保证目的基因被有效地抑制。
dsRNA消化法的主要优点在于可以跳过检测和筛选有效siRNA序列的步骤，为研究人员节省时间和金钱（注意：通常用RNAse Ⅲ通常比用Dicer要便宜）。不过这种方法的缺点也很明显，就是有可能引发非特异的基因沉默，特别是同源或者是密切相关的基因。多数的研究显示这种情况通常不会造成影响。
最适用于：快速而经济地研究某个基因功能缺失的表型
不适用于：长时间的研究项目，或者是需要一个特定的siRNA进行研究，特别是基因治疗 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子RNA，而且它是通过添加一串（3到6个）U来终止转录的。要使用这类载体，需要订购2段编码短发夹RNA序列的DNA单链，退火，克隆到相应载体的pol Ⅲ 启动子下游。由于涉及到克隆，这个过程需要几周甚至数月的时间，同时也需要经过测序以保证克隆的序列是正确的。
siRNA表达载体的优点在于可以进行较长期研究——带有抗生素标记的载体可以在细胞中持续抑制靶基因的表达，持续数星期甚至更久。
病毒载体也可用于siRNA表达，其优势在于可以直接高效率感染细胞进行基因沉默的研究，避免由于质粒转染效率低而带来的种种不便，而且转染效果更加稳定。
最适用于：已知一个有效的siRNA序列，需要维持较长时间的基因沉默。
不适用于：筛选siRNA序列（其实主要是指需要多个克隆和测序等较为费时、繁琐的工作）。 siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs不需要载体克隆、测序等颇为费时的步骤，可以直接由PCR得到，不用一天的时间。因此，SECs成为筛选siRNA的最有效工具，甚至可以用来筛选在特定的研究体系中启动子和siRNA的最适搭配。如果在PCR两端添加酶切位点，那么通过SECs筛选出的最有效的siRNA后，可以直接克隆到载体中构建siRNA表达载体。构建好的载体可以用于稳定表达siRNA和长效抑制的研究。
这个方法的主要缺点是①PCR产物很难转染到细胞中（晶赛公司的Protocol可以解决这一问题）②不能进行序列测定，PCR和DNA合成时可能差生的误读不能被发现导致结果不理想。
最适用于：筛选siRNA序列，在克隆到载体前筛选最佳启动子
不适用于：长期抑制研究。（如果克隆到载体后就可以了）向左转|向右转
最适用于：已经找到最有效的siRNA的情况下，需要大量siRNA进行研究。
不适用于：筛选siRNA等长时间的研究，主要原因是价格因素。 以DNA Oligo为模版，通过体外转录合成siRNAs，成本相对化学合成法而言比较低，而且能够比化学合成法更快的得到siRNAs。不足之处是实验的规模受到限制，虽然一次体外转录合成能提供足够做数百次转染的siRNAs，但是反应规模和量始终有一定的限制。而且和化学合成相比，还是需要占用研究人员相当的时间。值得一提的是体外转录得到的siRNAs毒性小，稳定性好，效率高，只需要化学合成的siRNA量的1/10就可以达到化学合成siRNA所能达到的效果，从而使转染效率更高。
最适用于：筛选siRNAs，特别是需要制备多种siRNAs，化学合成的价格成为障碍时。
不适用于：实验需要大量的，一个特定的siRNA。长期研究。
用RNase Ⅲ 消化长片断双链RNA制备siRNA
其他制备siRNA的方法的缺陷是需要设计和检验多个siRNA序列以便找到一个有效的siRNA。而用这种方法——制备一份混合有各种siRNAs “混合鸡尾酒” 就可以避免这个缺陷。选择通常是200—1000碱基的靶mRNA模版，用体外转录的方法制备长片断双链dsRNA ，然后用RNase Ⅲ (or Dicer) 在体外消化，得到一种siRNAs“混合鸡尾酒”。在除掉没有被消化的dsRNA后，这个siRNA混合物就可以直接转染细胞，方法和单一的siRNA转染一样。由于siRNA混合物中有许多不同的siRNAs，通常能够保证目的基因被有效地抑制。
dsRNA消化法的主要优点在于可以跳过检测和筛选有效siRNA序列的步骤，为研究人员节省时间和金钱（注意：通常用RNAse Ⅲ通常比用Dicer要便宜）。不过这种方法的缺点也很明显，就是有可能引发非特异的基因沉默，特别是同源或者是密切相关的基因。多数的研究显示这种情况通常不会造成影响。
最适用于：快速而经济地研究某个基因功能缺失的表型
不适用于：长时间的研究项目，或者是需要一个特定的siRNA进行研究，特别是基因治疗 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子RNA，而且它是通过添加一串（3到6个）U来终止转录的。要使用这类载体，需要订购2段编码短发夹RNA序列的DNA单链，退火，克隆到相应载体的pol Ⅲ 启动子下游。由于涉及到克隆，这个过程需要几周甚至数月的时间，同时也需要经过测序以保证克隆的序列是正确的。
siRNA表达载体的优点在于可以进行较长期研究——带有抗生素标记的载体可以在细胞中持续抑制靶基因的表达，持续数星期甚至更久。
病毒载体也可用于siRNA表达，其优势在于可以直接高效率感染细胞进行基因沉默的研究，避免由于质粒转染效率低而带来的种种不便，而且转染效果更加稳定。
最适用于：已知一个有效的siRNA序列，需要维持较长时间的基因沉默。
不适用于：筛选siRNA序列（其实主要是指需要多个克隆和测序等较为费时、繁琐的工作）。 siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs不需要载体克隆、测序等颇为费时的步骤，可以直接由PCR得到，不用一天的时间。因此，SECs成为筛选siRNA的最有效工具，甚至可以用来筛选在特定的研究体系中启动子和siRNA的最适搭配。如果在PCR两端添加酶切位点，那么通过SECs筛选出的最有效的siRNA后，可以直接克隆到载体中构建siRNA表达载体。构建好的载体可以用于稳定表达siRNA和长效抑制的研究。
这个方法的主要缺点是①PCR产物很难转染到细胞中（晶赛公司的Protocol可以解决这一问题）②不能进行序列测定，PCR和DNA合成时可能差生的误读不能被发现导致结果不理想。
最适用于：筛选siRNA序列，在克隆到载体前筛选最佳启动子
不适用于：长期抑制研究。（如果克隆到载体后就可以了）向左转|向右转
网传“猪坚强”已入弥留!比克隆体都活得久的它,是如何成为生命的...123
易利仁一2021-08-11
基克隆即重组DNA技术,指体外DNA按照既定目案,采用酶同源DNA体外剪切重新连接,组装新DNA.基础,DNA导入定宿主细胞,使能够宿主细胞扩增,形量代,程即称基克隆.基克隆包括四基本技术环节:
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