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Assaypro/Human Immunoglobulin G1 (IgG1-Fc) Monoclonal Antibody (Biotin Conjugate)/150 ug/60146-05021
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| Description: | Purified antibody validated for specificity and sensitivity. |
| Type: | Monoclonal, Secondary Antibodies |
| Catalog Number: | 60146-05021 |
| Species: | Human |
| Format: | IgG-Biotin Conjugate |
| Size: | 150 ug |
| Purity: | Affinity Purified |
| Presentation: | PBS pH 7.4, 50% Glycerol, 0.25% BSA, and 0.02% Sodium Azide |
| Storage: | -20C or below |
| Host: | Mouse |
| Immunogen: | Human Immunoglobulin G1 purified from human plasma |
| Antibody Type: | Monoclonal |
| Clone: | AP10D10 |
| Isotype: | IgG2a |
| Conjugate Type: | Biotin conjugated |
| Application: | EIA/RIA |
| Research Area: | Viral Hepatitis, Autoimmune Hepatitis, Cirrhosis |
| Entrez Gene: | 3500 |
| Omim: | 147100 |
| UniProt: | P01857 |
| Unigene: | Hs.510635 |
| Synonyms: | IgG1, ig, immnuoglobuling1, immnuoglobuling 1, immnuoglobuling, immnuoglobuling I, IGHG1, IGHG 1, igg, Ig gamma 1 Chain C Region, IgG Heavy Chain Locus, IGHG1, Immunoglobulin Gm1, Immunoglobulin Heavy Constant Gamma 1, G1m Marker |
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该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
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2021-07-19
无缝克隆（Seamless Cloning/In-Fusion Cloning），区别于传统PCR产物克隆，唯一的差异在于载体末端和引物末端应具有15-20个同源碱基，由此得到的PCR产物两端便分别带上了15-20个与载体序列同源性的碱基，依靠碱基间作用力互补配对成环，无需酶连即可直接用于转化宿主菌，进入宿主菌中的线性质粒（环状）... 查看更多
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2018-11-27
ImmunoChemistry Technologies公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多
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2018-08-06
常用的核酸电泳法有两种。 查看更多
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2021-08-26
本方法成功的关键是模板 DNA 的纯度。琼脂糖、盐和蛋白质的污染都会导致 DNA 聚合酶的提前终止或暂停，而 DNA 和 RNA 降解所产生的寡核苷酸将造成引物错配。这些污染会严重导致假阳性条带或空白出现。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。 查看更多
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2018-12-26
Easy Subcloningby Michael KoelleSubcloning should be easy and fast, and work every time. The following protocols minimize the number of manipulations required 查看更多
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2021-07-16
多莉（Dolly，1996年7月5日 - 2003年2月14日）是一只通过现代工程创造出来的雌性绵羊，也是世界之初第一个成功克隆的人工动物。按照官方的说法，名字是按照美国乡村音乐天后多莉·帕顿（Dolly Parton）来命名，因为多莉·帕顿拥有一对丰满的豪乳，而多莉是由乳腺细胞发育而来的。多莉是用细胞核移植技... 查看更多
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2018-11-28
Lucigen Corporation公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多
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2021-07-26
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。 查看更多
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2021-07-29
聚合酶链式反应-单链构象多态（Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism，PCR-SSCP）技术是在PCR技术基础上发展起来的，它是一种简单、快速、经济的用来显示在PCR反应产物中单碱基突变（点突变）的手段。该方法已被用做癌基因和抑癌基因突变的筛查检测，遗传病的致病基因分析和基因诊断，基因制图等领域。 查看更多
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2021-08-29
大引物方法最初是由 KAMMANN 等人（1989）建立的，现在的方法是经过许多研究人员包括 Sarkat 和 Sommer (1990,1992), Giebel 和 Spritz(1990)，Landt 等（1990),Marini 等（1993), Picard 等（1994),Ling 和 Robinson(1997) 等人修改后产生的基于 PCR 诱变的最简单、成本低廉的方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。 查看更多
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2021-08-17
对应于 mRNA 的 DNA 序列，可以被回收、克隆、测序，可以用作杂交或筛库的探针。 查看更多
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2021-08-21
SSLP 是含有短的简单序列重复的 DNS 片段，如 (CA)，这些重复分散存在于真核基因组 DNA 中。由于这些 SSLP 在长度上的多态，即等位基因间重复次数的多态，SSLP 是非常有用的遗传学标志。用这些方法达到自动化分型每个标志的关键步骤是选择合适的重复单元侧翼序列的 PCR 引物。 查看更多
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【求助】FISH求助 细胞技术讨论版论坛123
zbzlz2021-08-23
我想了解一下fish的含义，具体操作如何。请各位行家帮忙，谢谢！
【转贴】世界首例“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”在吉林大学诞生...123
longjlau2021-09-02
世界首例“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”在吉林大学诞生
[党务办公室][发布人:李荣茂][阅读357次][2008-9-1016:25:18][修改][删除][打印]
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9月9日下午5时40分，世界首例“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”在吉林大学农学部诞生。这标志着人类首次培育的“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”获得了成功。
9月9日下午5时40分至7时10分，在吉林大学原种猪场，三头“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”先后顺利诞生，体重分别为1050克、1100克和550克。
猪瘟是一种严重威胁养猪业的传染病。为了培育出能够抗猪瘟病毒的猪，以吉林大学农学部畜牧兽医学院赖良学教授为首席专家和军事医学科学院军事兽医研究所的专家共同组成的课题组，在国家自然科学基金资助的基础上，经过近两年时间的协作攻关，将能抑制猪瘟病毒的基因转染到“中国实验小型猪”胎儿成纤维细胞内，并以此体细胞进行核移植制备猪克隆胚胎，将此胚胎移植到杜洛克代孕母猪体内，怀孕114天后顺利产出三头健康的克隆仔猪。经对仔猪体细胞进行基因检测，证实该克隆猪的细胞带有所转入的抗猪瘟病毒基因。进一步的抗病毒检测实验正在进行中。这三头克隆猪的诞生标志着我国在转基因猪抗病育种研究领域已经达到了国际领先水平。
[党务办公室][发布人:李荣茂][阅读357次][2008-9-1016:25:18][修改][删除][打印]
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9月9日下午5时40分，世界首例“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”在吉林大学农学部诞生。这标志着人类首次培育的“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”获得了成功。
9月9日下午5时40分至7时10分，在吉林大学原种猪场，三头“带有抗猪瘟病毒基因的克隆猪”先后顺利诞生，体重分别为1050克、1100克和550克。
猪瘟是一种严重威胁养猪业的传染病。为了培育出能够抗猪瘟病毒的猪，以吉林大学农学部畜牧兽医学院赖良学教授为首席专家和军事医学科学院军事兽医研究所的专家共同组成的课题组，在国家自然科学基金资助的基础上，经过近两年时间的协作攻关，将能抑制猪瘟病毒的基因转染到“中国实验小型猪”胎儿成纤维细胞内，并以此体细胞进行核移植制备猪克隆胚胎，将此胚胎移植到杜洛克代孕母猪体内，怀孕114天后顺利产出三头健康的克隆仔猪。经对仔猪体细胞进行基因检测，证实该克隆猪的细胞带有所转入的抗猪瘟病毒基因。进一步的抗病毒检测实验正在进行中。这三头克隆猪的诞生标志着我国在转基因猪抗病育种研究领域已经达到了国际领先水平。
根据保守区克隆基因家族的新基因遇到的问题特来请教 实验方法 ...123
yvette2021-08-16
我的题目是鸡Mx基因的克隆，我的策略是先根据该基因家族(dynaminfamily)的氨基酸保守区设计简并引物克隆出该基因CDNA的部分片段，然后根据该片段序列设计基因特异性引物，利用RACE技术得到cDNA的3‘和5’末端，然后根据末端序列设计引物扩增出该基因全长cDNA.
我用简并引物从鸡cDNA中扩增出一个片段，约250bp,测序后拿来BLAST时却发现，与之同源性最高的并不是其它的Mx基因，而是人的某一个基因，比对的结果中与该序列同源性较高的有人及鼠Mx基因，但是同源性并不是很高。该基因在同一种生物的不同品种中具有多态性，已经有其它的鸡的Mx基因被克隆，按道理如果该片段是Mx基因的一部分它应该与其它的鸡的Mx基因有很高的同源性才对呀，所以，我怀疑简并引物PCR扩增出来的该片段不是Mx基因，因为RACE试剂盒很贵，现在也不敢继续作下去，怕作下去得不到什么结果。现在贴上我BLAST结果中score排在最前面的部分，还请有经验的兄弟帮我分析分析。我不胜感激。
Sequencesproducingsignificantalignments:(bits)Value
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我用简并引物从鸡cDNA中扩增出一个片段，约250bp,测序后拿来BLAST时却发现，与之同源性最高的并不是其它的Mx基因，而是人的某一个基因，比对的结果中与该序列同源性较高的有人及鼠Mx基因，但是同源性并不是很高。该基因在同一种生物的不同品种中具有多态性，已经有其它的鸡的Mx基因被克隆，按道理如果该片段是Mx基因的一部分它应该与其它的鸡的Mx基因有很高的同源性才对呀，所以，我怀疑简并引物PCR扩增出来的该片段不是Mx基因，因为RACE试剂盒很贵，现在也不敢继续作下去，怕作下去得不到什么结果。现在贴上我BLAST结果中score排在最前面的部分，还请有经验的兄弟帮我分析分析。我不胜感激。
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克隆技术的好处或坏处有哪些,克隆给人带来的好处与坏处?123
2017-11-01
列举几
设计克隆表达引物一定要从ATG和TAG开始吗？ 分子生物 ...123
wrongdna2021-08-19
请教在一般情况下要克隆一个真核生物的蛋白质编码基因从而得到该蛋白质产物，是要从信号肽开始还是直接从成熟肽开始，为什么？还请赐教!
获得一个未知的基因的核苷酸系列后,你如何对其功能进行初步预测？...123
煞TAe72017-11-01
基克隆需要烟草内验证功能
基克隆利用体外重组技术,特定基其DNA顺序插入载体基克隆主要目标识别、离特异基并获基完整 全序列,确定染色体定位,阐明基化功能,明确其特定性状遗传控制关系通几十努力由于植物发育,理化,遗传等科迅速发展,使 掌握量关植物优良性状基物遗传知识,再运用先进酶物技术已经克隆与植物抗病、抗虫、抗除草剂、抗逆,育性、高蛋白质 及与植物发育关许基我实验室麻抗真菌蛋白基作功能克隆研究(舒群芳等,1995;舒群芳等,1997),克隆植物基探讨 其克隆,本文论述基克隆策略、及取些进展
1 功能克隆(functional Cloning)
功能克 隆根据性状基本化特性功能信息,鉴定已知基功能克隆(Collis,1995)其具体作:纯化相应编码蛋白构建 cDNA文库或基组文库,DNA文库基筛选根据情况主要用二种办进行,(1)纯化蛋白质进行氨基酸测序,据合寡核苷酸探针cDNA 库或基组文库筛选编码基,(2)相应编码蛋白制相应抗体探针,cDNA入载体表达库筛选相应克隆功能克隆种经典基克隆策略, 基离利用种策略
Hain等葡萄克隆两编码白藜芦醇合二苯乙烯合酶基(Vst1Vst2),葡萄抗菌化合 物白藜芦醇存,提高灰质葡萄孢(Botrytis cinerce)抗性,烟草其些植物二苯乙烯合酶,克隆该基经转基,些植物产灰质葡萄孢抗性意义(Hain 等,1985)Kondo等1989编码水稻巯基蛋白酶抑制剂基组DNA做克隆序列析(Kondo等,1989)周兆斓等构建水稻 cDNA文库,离编码水稻巯基蛋白酶抑制剂cDNA(周兆斓等,1996)植物蛋白酶抑制剂类抗虫物质,抑制摄食害虫蛋白质消 化,使害虫缺乏所需氨基酸导致非发育或死亡胡华等烟草离流行于我黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic virus)(CMV),并克隆编码该病毒外壳蛋白cDNA基(胡华等,1989)王春香等病烟草叶片离纯化马铃薯x病毒 (potato virus X, pvx),克隆完整马铃薯x病毒外壳蛋白基,并外壳蛋白基转入马铃薯,期获抗pvx病毒栽培种马铃薯(王春香等,1991)病毒外壳 蛋白(Coat protein cp)基功克隆,使转基植物产病毒外壳蛋白基介导抗性(Coat Protein Mediated Resistance CPMR)或病毒CP-RNA介导抗性Van kan 报道真菌功克隆毒基Avr9,直接利用基介导广谱高效基工程植物(Van Kan等,1991)我1995构建麻cDNA文库,制备抗体探针功离编码麻抗真菌蛋白基cDNA克隆,抗真菌基农业、医 药等面应用打基础(舒群芳等,1995;舒群芳等,1997)功能克隆特点用基表达产物蛋白质克隆基、虽某性状编码基未 知其理化及代谢途径研究比较清楚,离纯化控制该性状蛋白质功能克隆关键离纯度高蛋白质要纯 蛋白质,十特异探针,策略行效采用功能克隆虽已经克隆基,由于绝数基产物目前知道所数基 难用经典克隆随着物技术发展,条新基克隆策略逐渐形,定位克隆
2 定位克隆(Positional cloning)
根据遗传连锁析,染色体步移基定位染色体具体位置断缩筛选区域进克隆该基,研究该基功能或抗性化机制,种策略 叫定位克隆(Monaco,1994)连锁析即通基与DNA标记间重组系数估计两者间距离,若某种性状基与DNA标记代 离,即连锁起趋势根据原理与已知某DNA标记连锁基染色体定位由于连锁析需要依赖特定基作连锁标记,即标记基 与待研基间存连锁关系,满足与待研基相连锁基实太少,所连锁析克隆数基存着定困难RFLP现使态性基标记存 于整基组内,解决连锁析难克服困难
1980Wyman等科家首建立限制酶切片段度态性RFLP (restriction fragment length polymorphism),使任何种表型相关基定位能限制酶切片段度态性用限制性内切酶切割产DNA片段度态性呈 孟德尔式遗传,存于全基组独特态标记,RFLP使基定位变易行(Wyman等,1980)目前定位克隆般用RFLP等标记制作 遗传图谱,寻找与待测基连锁RFLP标记,获基染色体定位克隆基所RFLP发展起RAPD技术建立,待测基相 准确定位,利用已知基离与连锁未知基其基本程序构建基组文库、用已知A基探针,基组文库筛选与其同源序列 a克隆,再用a克隆探针基组文库筛选与a克隆同源序列b克隆,类推筛选未知基并离目前已番茄、烟草、麦、 水稻、豆、玉米等植物发现与抗病基紧密连锁RFLP标记并构建遗传图谱(Figdore等,1988;Heun等,1991;Smith, 1991;Diers等,1992)用种已别克隆拟南芥菜、番茄、水稻等植物关抗病基(Martin等,1993;Bent等, 1994;Mindrinos等,1994;Wenyuan等,1995) Martin等1993早用定位克隆技术克隆番茄pto基,pto基负责带毒基Avrpto细菌,丁香假单胞菌 (pseudomonas syringae pv)菌株抗性,Pto基导入病番茄转基植株增强病原菌抗性(Martin等,1993)Wenyuan等1995用技术克隆 水稻Xa21基,Xa21基真菌Xanthomonas oryzae pv oryzae (Xoo)具抗性(Wenyuan等,1995)
3 转座标记(transposon tagging)
转座 基位置转移另位置DNA片段转座程原位置DNA片段(转座)并未消失,发转移转座拷贝、基发转座引起插入突 变使插入位置基失并诱导产突变型或插入位置现新编码基通转座标记基(抗药性等)检测突变基位置克隆突变基 转座标记转座作基定位标记通转座染色体插入嵌合克隆基(Fedoroff等,1984;Jones等, 1994)
利用转座克隆植物基操作步骤主要应几面:(1) 已离转座与选择标记构建含转座质粒载体(2) 转座导入目标植物(3) 利用Southern杂交等技术检测转座否载体质粒转座目标植物基组,转座定位离目标基所缺少(4) 转座插入突变鉴定及其离(Ellis等,1992)通用于克隆植物基转座玉米Ac. Mu, SmpDs等Ac含编码转座酶基,能够自主转座,Ds含转座酶所能自主转座,Ds-Ac系统AcDs提供转座酶自主 转座用转座标记进行植物基离,首要Ac等转座转化要进行基克隆植物,目前数利用土壤农杆菌介导转化系统转座导入 目标植物(Keller等,1993;Bancroft等,1993)目前已玉米、烟草、番茄、亚麻等植物克隆抗性基(Johal Briggs,1992;Whitham等,1994;Jones等,1994;Gregory等,1995)JohalBrigge离抗灰色 蠕孢(Helminth osporium carbonum)1号种玉米HMI特异真菌抗性基该基存于玉米抗性品种,能够解蠕孢1号种产玉米具特异致病性HC毒素, 该基编码HC毒素脱毒酶使植物具抗病性(JohalBriggs,1992)转座标记原理相似T-DNA标记,两者都由于 段基插入导致染色体结构发变化产突变体,T-DNA标记产突变由于T-DNA插入导致Kenneth等利用T-DNA插入标记培育 拟南芥矮化突变体(Kenneth等,1989)
4 工合并克隆基
蜘蛛毒素种肽,37氨基酸,体外实 验表明能杀死种农作物害昆虫,蒋红等1995根据蜘蛛毒素氨基酸序列,采用植物偏密码、工合并克隆肽基(蒋红等, 1995)Adang 1995工合苏云金杆菌毒蛋白(Bacillus thuringiensis insecticidal crystal protein)基(Adang等,1995)
5 表型克隆(phenotype cloning)
1995JonssonWeissman提表型克隆概念(JonssonWeissman,1995),些植物目前即解基产物,没 进行基定位,已知植物表型存差异,利用表型差异或组织器官特异表达产差异克隆植物基表型克隆San等用表型差异拟南芥 克隆赤霉素合酶基(Sun等,1992)表型克隆策略试图表型与基结构或基表达特征联系起,离特定表型相关基,力求必 事先知道基化功能或图谱定位根据基表达效应直接离该基(Brown,1994)
6 mRNA差异显示(mRNA differential display)
1993LiangAverboukh 等科家提mRNA差异显示(mRNA DD, mRNA differential display)案(Liang等,1993)案依据高等真核物所命程病理变化,论由单基控制由基控制 ,终都通基表达质或量差异体现研究基表达差异,研究两基组差异表达基离,克隆复杂性状相关基辟重要途径该 案检测、离全任何部突变mRNA,其基本程序:(1)提取两种细胞mRNA,反转录2种cDNA(2) 定引物作随机聚合酶链反应(3) 通扩增产物电泳析,离同品间差异条带(4)差异DNA做探针(5) cDNA文库或基组文库筛选基并作功能析(Baeur等,1993)LiangPardee建立mRNA差别显示PCR (LiangPardee,1992),该同析几品间基表达,检测灵敏度高,PCR扩增,些表达量低mRNA能检测 ,应用PCR及DNA测序两种技术简单易行,目前已功用离麦热激蛋白基(Joshi等,1996)水稻蔗糖调节基(Tseng等, 1995)等
7 减杂交(Subtractive hybridization)
Lee等1991提减杂交技术 (Lee等,1991),植物发育程同组织或同组织同发育阶段,由于基特异性表达,其mRNA表现同,表达特异基组织 提取 mRNA,反转录cDNA,特异基表达组织提取mRNA,两者杂交,表达特异基组织特异基表达组织均表达基产物形杂交 ,特异mRNA转录cDNA仍保持单链状态,种单链cDNA离即差异表达基,Chong等用技术克隆麦春化相关基 (Chong等,1994)
8 PCR扩增克隆
种参考已知基序列克隆基目前已经知道植物基序 列,克隆类似基先Gene bank库找关基序列,用PCR克隆同植物基基本根据已知基序列设计并合引物,植物提取DNA进行PCR扩增, 扩增片段纯化连接合适载体,用酶切析序列析检测重组,并与已知基序列进行比较,目前已玉米、水稻、向葵、巴西豆等植物离 富含甲硫氨酸蛋白及其编码基,根据Masumura等(1989)发表10KD水稻醇溶蛋白基序列合引物,王广立等克隆水稻10KD醇溶 蛋白基(王广立等,1994)
9 依据序列同源性克隆基
物种、属间编码基序列同源性高于非编码区序列 基本作其种属同源基克隆前提,构建cDNA文库或基组文库,已知基序列探针筛选目克隆马德钦等根据文献报道 甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基序列作菠菜甜菜碱醛脱氢酶基克隆序列析(马德钦等,1996)
综所述,见发现克隆基 程艰巨富收获,几十各科家基克隆激物高技术领域内走艰难曲折历程,创造发展述种种植物基 克隆,使类认识自、掌握自道路前进步前辈所创造技术疑我功克隆植物基提供快捷高效途径利用已知 序列克隆基,用同种或同属已知同源序列筛选基都比较容易,适合于克隆些研究较晚许重要农作物基获极纯蛋白质功能克隆关键,随 着蛋白质纯化技术提高,功能克隆发挥潜作用随着植物遗传图谱基定位基础研究工作提高,定位克隆发挥其巨作用
基克隆利用体外重组技术,特定基其DNA顺序插入载体基克隆主要目标识别、离特异基并获基完整 全序列,确定染色体定位,阐明基化功能,明确其特定性状遗传控制关系通几十努力由于植物发育,理化,遗传等科迅速发展,使 掌握量关植物优良性状基物遗传知识,再运用先进酶物技术已经克隆与植物抗病、抗虫、抗除草剂、抗逆,育性、高蛋白质 及与植物发育关许基我实验室麻抗真菌蛋白基作功能克隆研究(舒群芳等,1995;舒群芳等,1997),克隆植物基探讨 其克隆,本文论述基克隆策略、及取些进展
1 功能克隆(functional Cloning)
功能克 隆根据性状基本化特性功能信息,鉴定已知基功能克隆(Collis,1995)其具体作:纯化相应编码蛋白构建 cDNA文库或基组文库,DNA文库基筛选根据情况主要用二种办进行,(1)纯化蛋白质进行氨基酸测序,据合寡核苷酸探针cDNA 库或基组文库筛选编码基,(2)相应编码蛋白制相应抗体探针,cDNA入载体表达库筛选相应克隆功能克隆种经典基克隆策略, 基离利用种策略
Hain等葡萄克隆两编码白藜芦醇合二苯乙烯合酶基(Vst1Vst2),葡萄抗菌化合 物白藜芦醇存,提高灰质葡萄孢(Botrytis cinerce)抗性,烟草其些植物二苯乙烯合酶,克隆该基经转基,些植物产灰质葡萄孢抗性意义(Hain 等,1985)Kondo等1989编码水稻巯基蛋白酶抑制剂基组DNA做克隆序列析(Kondo等,1989)周兆斓等构建水稻 cDNA文库,离编码水稻巯基蛋白酶抑制剂cDNA(周兆斓等,1996)植物蛋白酶抑制剂类抗虫物质,抑制摄食害虫蛋白质消 化,使害虫缺乏所需氨基酸导致非发育或死亡胡华等烟草离流行于我黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic virus)(CMV),并克隆编码该病毒外壳蛋白cDNA基(胡华等,1989)王春香等病烟草叶片离纯化马铃薯x病毒 (potato virus X, pvx),克隆完整马铃薯x病毒外壳蛋白基,并外壳蛋白基转入马铃薯,期获抗pvx病毒栽培种马铃薯(王春香等,1991)病毒外壳 蛋白(Coat protein cp)基功克隆,使转基植物产病毒外壳蛋白基介导抗性(Coat Protein Mediated Resistance CPMR)或病毒CP-RNA介导抗性Van kan 报道真菌功克隆毒基Avr9,直接利用基介导广谱高效基工程植物(Van Kan等,1991)我1995构建麻cDNA文库,制备抗体探针功离编码麻抗真菌蛋白基cDNA克隆,抗真菌基农业、医 药等面应用打基础(舒群芳等,1995;舒群芳等,1997)功能克隆特点用基表达产物蛋白质克隆基、虽某性状编码基未 知其理化及代谢途径研究比较清楚,离纯化控制该性状蛋白质功能克隆关键离纯度高蛋白质要纯 蛋白质,十特异探针,策略行效采用功能克隆虽已经克隆基,由于绝数基产物目前知道所数基 难用经典克隆随着物技术发展,条新基克隆策略逐渐形,定位克隆
2 定位克隆(Positional cloning)
根据遗传连锁析,染色体步移基定位染色体具体位置断缩筛选区域进克隆该基,研究该基功能或抗性化机制,种策略 叫定位克隆(Monaco,1994)连锁析即通基与DNA标记间重组系数估计两者间距离,若某种性状基与DNA标记代 离,即连锁起趋势根据原理与已知某DNA标记连锁基染色体定位由于连锁析需要依赖特定基作连锁标记,即标记基 与待研基间存连锁关系,满足与待研基相连锁基实太少,所连锁析克隆数基存着定困难RFLP现使态性基标记存 于整基组内,解决连锁析难克服困难
1980Wyman等科家首建立限制酶切片段度态性RFLP (restriction fragment length polymorphism),使任何种表型相关基定位能限制酶切片段度态性用限制性内切酶切割产DNA片段度态性呈 孟德尔式遗传,存于全基组独特态标记,RFLP使基定位变易行(Wyman等,1980)目前定位克隆般用RFLP等标记制作 遗传图谱,寻找与待测基连锁RFLP标记,获基染色体定位克隆基所RFLP发展起RAPD技术建立,待测基相 准确定位,利用已知基离与连锁未知基其基本程序构建基组文库、用已知A基探针,基组文库筛选与其同源序列 a克隆,再用a克隆探针基组文库筛选与a克隆同源序列b克隆,类推筛选未知基并离目前已番茄、烟草、麦、 水稻、豆、玉米等植物发现与抗病基紧密连锁RFLP标记并构建遗传图谱(Figdore等,1988;Heun等,1991;Smith, 1991;Diers等,1992)用种已别克隆拟南芥菜、番茄、水稻等植物关抗病基(Martin等,1993;Bent等, 1994;Mindrinos等,1994;Wenyuan等,1995) Martin等1993早用定位克隆技术克隆番茄pto基,pto基负责带毒基Avrpto细菌,丁香假单胞菌 (pseudomonas syringae pv)菌株抗性,Pto基导入病番茄转基植株增强病原菌抗性(Martin等,1993)Wenyuan等1995用技术克隆 水稻Xa21基,Xa21基真菌Xanthomonas oryzae pv oryzae (Xoo)具抗性(Wenyuan等,1995)
3 转座标记(transposon tagging)
转座 基位置转移另位置DNA片段转座程原位置DNA片段(转座)并未消失,发转移转座拷贝、基发转座引起插入突 变使插入位置基失并诱导产突变型或插入位置现新编码基通转座标记基(抗药性等)检测突变基位置克隆突变基 转座标记转座作基定位标记通转座染色体插入嵌合克隆基(Fedoroff等,1984;Jones等, 1994)
利用转座克隆植物基操作步骤主要应几面:(1) 已离转座与选择标记构建含转座质粒载体(2) 转座导入目标植物(3) 利用Southern杂交等技术检测转座否载体质粒转座目标植物基组,转座定位离目标基所缺少(4) 转座插入突变鉴定及其离(Ellis等,1992)通用于克隆植物基转座玉米Ac. Mu, SmpDs等Ac含编码转座酶基,能够自主转座,Ds含转座酶所能自主转座,Ds-Ac系统AcDs提供转座酶自主 转座用转座标记进行植物基离,首要Ac等转座转化要进行基克隆植物,目前数利用土壤农杆菌介导转化系统转座导入 目标植物(Keller等,1993;Bancroft等,1993)目前已玉米、烟草、番茄、亚麻等植物克隆抗性基(Johal Briggs,1992;Whitham等,1994;Jones等,1994;Gregory等,1995)JohalBrigge离抗灰色 蠕孢(Helminth osporium carbonum)1号种玉米HMI特异真菌抗性基该基存于玉米抗性品种,能够解蠕孢1号种产玉米具特异致病性HC毒素, 该基编码HC毒素脱毒酶使植物具抗病性(JohalBriggs,1992)转座标记原理相似T-DNA标记,两者都由于 段基插入导致染色体结构发变化产突变体,T-DNA标记产突变由于T-DNA插入导致Kenneth等利用T-DNA插入标记培育 拟南芥矮化突变体(Kenneth等,1989)
4 工合并克隆基
蜘蛛毒素种肽,37氨基酸,体外实 验表明能杀死种农作物害昆虫,蒋红等1995根据蜘蛛毒素氨基酸序列,采用植物偏密码、工合并克隆肽基(蒋红等, 1995)Adang 1995工合苏云金杆菌毒蛋白(Bacillus thuringiensis insecticidal crystal protein)基(Adang等,1995)
5 表型克隆(phenotype cloning)
1995JonssonWeissman提表型克隆概念(JonssonWeissman,1995),些植物目前即解基产物,没 进行基定位,已知植物表型存差异,利用表型差异或组织器官特异表达产差异克隆植物基表型克隆San等用表型差异拟南芥 克隆赤霉素合酶基(Sun等,1992)表型克隆策略试图表型与基结构或基表达特征联系起,离特定表型相关基,力求必 事先知道基化功能或图谱定位根据基表达效应直接离该基(Brown,1994)
6 mRNA差异显示(mRNA differential display)
1993LiangAverboukh 等科家提mRNA差异显示(mRNA DD, mRNA differential display)案(Liang等,1993)案依据高等真核物所命程病理变化,论由单基控制由基控制 ,终都通基表达质或量差异体现研究基表达差异,研究两基组差异表达基离,克隆复杂性状相关基辟重要途径该 案检测、离全任何部突变mRNA,其基本程序:(1)提取两种细胞mRNA,反转录2种cDNA(2) 定引物作随机聚合酶链反应(3) 通扩增产物电泳析,离同品间差异条带(4)差异DNA做探针(5) cDNA文库或基组文库筛选基并作功能析(Baeur等,1993)LiangPardee建立mRNA差别显示PCR (LiangPardee,1992),该同析几品间基表达,检测灵敏度高,PCR扩增,些表达量低mRNA能检测 ,应用PCR及DNA测序两种技术简单易行,目前已功用离麦热激蛋白基(Joshi等,1996)水稻蔗糖调节基(Tseng等, 1995)等
7 减杂交(Subtractive hybridization)
Lee等1991提减杂交技术 (Lee等,1991),植物发育程同组织或同组织同发育阶段,由于基特异性表达,其mRNA表现同,表达特异基组织 提取 mRNA,反转录cDNA,特异基表达组织提取mRNA,两者杂交,表达特异基组织特异基表达组织均表达基产物形杂交 ,特异mRNA转录cDNA仍保持单链状态,种单链cDNA离即差异表达基,Chong等用技术克隆麦春化相关基 (Chong等,1994)
8 PCR扩增克隆
种参考已知基序列克隆基目前已经知道植物基序 列,克隆类似基先Gene bank库找关基序列,用PCR克隆同植物基基本根据已知基序列设计并合引物,植物提取DNA进行PCR扩增, 扩增片段纯化连接合适载体,用酶切析序列析检测重组,并与已知基序列进行比较,目前已玉米、水稻、向葵、巴西豆等植物离 富含甲硫氨酸蛋白及其编码基,根据Masumura等(1989)发表10KD水稻醇溶蛋白基序列合引物,王广立等克隆水稻10KD醇溶 蛋白基(王广立等,1994)
9 依据序列同源性克隆基
物种、属间编码基序列同源性高于非编码区序列 基本作其种属同源基克隆前提,构建cDNA文库或基组文库,已知基序列探针筛选目克隆马德钦等根据文献报道 甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基序列作菠菜甜菜碱醛脱氢酶基克隆序列析(马德钦等,1996)
综所述,见发现克隆基 程艰巨富收获,几十各科家基克隆激物高技术领域内走艰难曲折历程,创造发展述种种植物基 克隆,使类认识自、掌握自道路前进步前辈所创造技术疑我功克隆植物基提供快捷高效途径利用已知 序列克隆基,用同种或同属已知同源序列筛选基都比较容易,适合于克隆些研究较晚许重要农作物基获极纯蛋白质功能克隆关键,随 着蛋白质纯化技术提高,功能克隆发挥潜作用随着植物遗传图谱基定位基础研究工作提高,定位克隆发挥其巨作用
启动子的克隆和研究方法123
天生我才2021-08-06
我想得到水稻一个基因的启动子序列，只知道基因序列，不知道启动子的序列，想的到启动子序列，各位大侠帮帮忙。先谢谢了。
[原创] Western blot转膜整个过程 123
苦丁奶茶2021-08-31
听说种找相近物种该基全序列做比找内含位置再设计引物内含区域测序没用种能能说具体操作选物种用软件比较序列
应用细菌分子间同源重组机制快速克隆腺病毒基因组的研究123
hixpp2021-07-29
最近在做腺病毒基因克隆，吃了大亏，长了见识。
我总共要做6个克隆。先把6个基因的CDNA克隆到shuttle质粒pAdTrack-CMV，进展很顺利。然后用PmeI处理重组shuttle质粒，过夜酶切，也很顺利。但与腺病毒backbone质粒pAdEasy-1共转化时遇到了大麻烦。起初，我没有BJ5183Ecoli菌株，就想当然像拿DH5a替代，但一直不成功。无论CaCl2法和电转法都不行，挑出来的克隆不是只含重组shuttle质粒，就是同时含有两种质粒，即重组shuttle质粒和pAdEasy-1。但各是各的，二者并没有在细菌内发生同源重组。
于是我借了BJ5183Ecoli菌株，采用电转化法，这时总算有点成功。6个重组腺病毒质粒构建成功了4个。经酶切鉴定均这4个克隆均正确。但是，另外2个总是失败，原因不详。于是我就重复重复，期间，糟糕的事情发生了....电转杯总是被击破，Bio-Rad电转仪总是出现"检测到低压故障电弧”的字样。想来想去找不到好的对策。起初我以为是有气泡，于是在做电转时尽可能避免气泡的出现。遗憾的是，这毫无帮助，电转杯还是击一个破一个。我那个心疼呀。倒不是心疼杯子，心疼的是我的细菌、质粒，用Tip又吸不出来，所以只好把它们丢掉。
Finally，我发现了其中的问题。我改用去离子水来溶解重组shuttle质粒和pAdEasy-1时电转杯就再也不破了。我分析，原因可能与电转菌液的离子强度有关。当我放较大体积（>15ul）的质粒到BJ5183Ecoli菌（20ul）中时，里面的TE缓冲液可能导致电击时产生高强度电流，结果杯子就破了。由此看来，气泡本身对电击可能不无影响，反而会减弱电流强度。但离子强度就不同了，离子强度太高，足以导致一次实验报废。
后感：失败并不可怕，可怕的是想当然去重复，而不去探究失败的原因。朋友们，如在这方面好的经历坏的经历，尽可拿出来一起分享。
让我们一起成长。
我总共要做6个克隆。先把6个基因的CDNA克隆到shuttle质粒pAdTrack-CMV，进展很顺利。然后用PmeI处理重组shuttle质粒，过夜酶切，也很顺利。但与腺病毒backbone质粒pAdEasy-1共转化时遇到了大麻烦。起初，我没有BJ5183Ecoli菌株，就想当然像拿DH5a替代，但一直不成功。无论CaCl2法和电转法都不行，挑出来的克隆不是只含重组shuttle质粒，就是同时含有两种质粒，即重组shuttle质粒和pAdEasy-1。但各是各的，二者并没有在细菌内发生同源重组。
于是我借了BJ5183Ecoli菌株，采用电转化法，这时总算有点成功。6个重组腺病毒质粒构建成功了4个。经酶切鉴定均这4个克隆均正确。但是，另外2个总是失败，原因不详。于是我就重复重复，期间，糟糕的事情发生了....电转杯总是被击破，Bio-Rad电转仪总是出现"检测到低压故障电弧”的字样。想来想去找不到好的对策。起初我以为是有气泡，于是在做电转时尽可能避免气泡的出现。遗憾的是，这毫无帮助，电转杯还是击一个破一个。我那个心疼呀。倒不是心疼杯子，心疼的是我的细菌、质粒，用Tip又吸不出来，所以只好把它们丢掉。
Finally，我发现了其中的问题。我改用去离子水来溶解重组shuttle质粒和pAdEasy-1时电转杯就再也不破了。我分析，原因可能与电转菌液的离子强度有关。当我放较大体积（>15ul）的质粒到BJ5183Ecoli菌（20ul）中时，里面的TE缓冲液可能导致电击时产生高强度电流，结果杯子就破了。由此看来，气泡本身对电击可能不无影响，反而会减弱电流强度。但离子强度就不同了，离子强度太高，足以导致一次实验报废。
后感：失败并不可怕，可怕的是想当然去重复，而不去探究失败的原因。朋友们，如在这方面好的经历坏的经历，尽可拿出来一起分享。
让我们一起成长。
克隆基因总克隆不出,为什么 123
鬼鬼令尊丶囧傤2017-11-01
高等物基组克隆完整基 真核物与原核物启同且真核物基通间隔基即外显内含相间排列真核物完整基直接转入肠杆菌没用相应启能启mRNA转录且内含能确剪切
基因克隆的基本步骤有哪些 123
瘦or死1492021-08-14
选择目基,并设计相应引物；
用引物PCR扩增目基片段；
选择合适（抗性标记、酶切位点等）克隆载体（保真扩增）,并PCR片段连接入克隆载体；（般用Taq酶PCR产物末尾自带A,Solution 1作用与两端各带T线性T载体直接相连）
连接产物转化入受态肠杆菌,使含抗素培养基扩增；
肠杆菌提取质粒（即前面连接产物）,酶切鉴定测序鉴定均误目基片段切并与新表达载体连接,再转化入肠杆菌扩增,再提质粒,即想要目基片段克隆.
用引物PCR扩增目基片段；
选择合适（抗性标记、酶切位点等）克隆载体（保真扩增）,并PCR片段连接入克隆载体；（般用Taq酶PCR产物末尾自带A,Solution 1作用与两端各带T线性T载体直接相连）
连接产物转化入受态肠杆菌,使含抗素培养基扩增；
肠杆菌提取质粒（即前面连接产物）,酶切鉴定测序鉴定均误目基片段切并与新表达载体连接,再转化入肠杆菌扩增,再提质粒,即想要目基片段克隆.
第6章目的基因的分离克隆(植物基因工程)123
风音28082021-08-17
离目基
物芯片高密度固定固相支持介质物信息微列阵列阵每序列及位置都已知并按预先设定顺序点阵基芯片物芯片种其固定核算类物质主要用于DNA、RNA析DNA芯片微点阵两种
离目基指基组发现或找某目（标）基目前通①比较同物种间或同物种同体间；或同体同发育期或同环境条件基差异表达（基表达平行析）实现采用基芯片技术进行基差异表达研究通杂交直接检测细胞mRNA种类及丰度与传统差异显示相比具品用量自化程度高检测目标DNA密度及并行种类等优点②利用同源探针cDNA或EST微列阵筛选离目基目前DNA 芯片、cDNA芯片两种其基本步骤包括：基芯片制备、靶品制备、杂交与检测、目基离并获全
2 基文库技术离目基
基文库指某物类型全部基集合种集合重组体形式现某物DNA片段群体与载体重组重组转化宿主细胞转化细胞选择培养基单菌落（或噬菌斑或细胞）即DNA片段克隆全部DNA片段克隆集合体即该物基文库其类型基组文库与cDNA文库、克隆文库与表达文库按载体智力文库、噬菌体文库、黏粒载体文库、工染色体文库等基文库构建文库筛选基主要几种：核算杂交、免疫检测、DNA同胞选择、PCR筛选等基文库构建目前基工程核工作离目进用
3 功能蛋白组离目基
蛋白组指细胞内全部蛋白存及式即基组表达产总蛋白质统称功能蛋白质组指些能涉及特定功能机理蛋白质群体主要研究蛋白质双向电泳通高效液相色谱、质普蛋白质序列进行析借用物手段则进行目基离：应用PCR进行离目基：通蛋白质序列析通密码简并性设计简并引物利用RT-PCR 目基全；应用核算杂交筛选离目基：即利用简并寡核苷酸探针筛选cDNA或基组文库；免疫雪筛选离目基：通蛋白特异抗体与目蛋白专结合表达文库离目基蛋白基
4 PCR技术基克隆应用
PCR技术已经渗透物各领域克隆获cDNA全面起着重要作用利用 PCR技术特定条件基表达进行检测即通mRNA差别显示（DDRT-PCR）鉴定离所需目基；通RT-PCR克隆目基 cDNA区域进行cDNA文库构建通锚定PCR或反向PCR快速克隆cDNA末端未知序列、功能基调控区等现用于基离克隆 PCR主要：RT-PCRDDRT-PCR用于cDNA末端快速克隆RACE（第3节）用于DNA序列克隆Panhankle- PCR、Cassette-PCR及减cDNA文库PCR构建等Panhankle-PCR、Cassette-PCR基组已知DNA相临未知序列克隆奠定良基础
5 mRNA差别显示技术离差别表达基
mRNA差异显示技术组织特异性表达基进行离种快速行效mRNA反转录与PCR技术结合发展起种RNA指纹图谱技术利用5’锚定引物oligo（dT）12MN3’端随机引物总mRNA进行PCR扩增期差异表达条带并其差异显示条带进行收、克隆
6 插入突变离克隆目基
获突变体进行未知基克隆用举T-DNA标签转座诱变离克隆目基例T-DNA标签T-DNA任何兴趣基处产插入性突变获析该基功能照突变体T-DNA左右边界间携带外源报告基片段作选择性遗传标记插入序列已知获转基重组突变体通各种克隆PCR策略加研究倘若35S强启T-DNA整合宿主基组整合内原基游则产异增加或表达空特异性改变破坏基表达效获性突变功能丧失性突变等转座标签株携带功能性转座系统植物与遗传差异同种植物杂交转座插入某特定基序列破坏该基编码蛋白进导致见表性破坏或改变产代筛选新型突变体
物芯片高密度固定固相支持介质物信息微列阵列阵每序列及位置都已知并按预先设定顺序点阵基芯片物芯片种其固定核算类物质主要用于DNA、RNA析DNA芯片微点阵两种
离目基指基组发现或找某目（标）基目前通①比较同物种间或同物种同体间；或同体同发育期或同环境条件基差异表达（基表达平行析）实现采用基芯片技术进行基差异表达研究通杂交直接检测细胞mRNA种类及丰度与传统差异显示相比具品用量自化程度高检测目标DNA密度及并行种类等优点②利用同源探针cDNA或EST微列阵筛选离目基目前DNA 芯片、cDNA芯片两种其基本步骤包括：基芯片制备、靶品制备、杂交与检测、目基离并获全
2 基文库技术离目基
基文库指某物类型全部基集合种集合重组体形式现某物DNA片段群体与载体重组重组转化宿主细胞转化细胞选择培养基单菌落（或噬菌斑或细胞）即DNA片段克隆全部DNA片段克隆集合体即该物基文库其类型基组文库与cDNA文库、克隆文库与表达文库按载体智力文库、噬菌体文库、黏粒载体文库、工染色体文库等基文库构建文库筛选基主要几种：核算杂交、免疫检测、DNA同胞选择、PCR筛选等基文库构建目前基工程核工作离目进用
3 功能蛋白组离目基
蛋白组指细胞内全部蛋白存及式即基组表达产总蛋白质统称功能蛋白质组指些能涉及特定功能机理蛋白质群体主要研究蛋白质双向电泳通高效液相色谱、质普蛋白质序列进行析借用物手段则进行目基离：应用PCR进行离目基：通蛋白质序列析通密码简并性设计简并引物利用RT-PCR 目基全；应用核算杂交筛选离目基：即利用简并寡核苷酸探针筛选cDNA或基组文库；免疫雪筛选离目基：通蛋白特异抗体与目蛋白专结合表达文库离目基蛋白基
4 PCR技术基克隆应用
PCR技术已经渗透物各领域克隆获cDNA全面起着重要作用利用 PCR技术特定条件基表达进行检测即通mRNA差别显示（DDRT-PCR）鉴定离所需目基；通RT-PCR克隆目基 cDNA区域进行cDNA文库构建通锚定PCR或反向PCR快速克隆cDNA末端未知序列、功能基调控区等现用于基离克隆 PCR主要：RT-PCRDDRT-PCR用于cDNA末端快速克隆RACE（第3节）用于DNA序列克隆Panhankle- PCR、Cassette-PCR及减cDNA文库PCR构建等Panhankle-PCR、Cassette-PCR基组已知DNA相临未知序列克隆奠定良基础
5 mRNA差别显示技术离差别表达基
mRNA差异显示技术组织特异性表达基进行离种快速行效mRNA反转录与PCR技术结合发展起种RNA指纹图谱技术利用5’锚定引物oligo（dT）12MN3’端随机引物总mRNA进行PCR扩增期差异表达条带并其差异显示条带进行收、克隆
6 插入突变离克隆目基
获突变体进行未知基克隆用举T-DNA标签转座诱变离克隆目基例T-DNA标签T-DNA任何兴趣基处产插入性突变获析该基功能照突变体T-DNA左右边界间携带外源报告基片段作选择性遗传标记插入序列已知获转基重组突变体通各种克隆PCR策略加研究倘若35S强启T-DNA整合宿主基组整合内原基游则产异增加或表达空特异性改变破坏基表达效获性突变功能丧失性突变等转座标签株携带功能性转座系统植物与遗传差异同种植物杂交转座插入某特定基序列破坏该基编码蛋白进导致见表性破坏或改变产代筛选新型突变体
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