罗氏诊断在华推广KAPA NGS新一代测序系列产品
| 实验方法原理 | RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。
| ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | RNA样品溶液 试剂、试剂盒 | 琼脂糖TAE电泳缓冲液溴化乙锭载样缓冲液MOPS缓冲液 仪器、耗材 | 电泳仪电泳槽电子天平移液器枪头微波炉紫外透射检测仪封口膜 实验步骤 | 一、实验材料、器具及药品 蘑菇的总RNA溶液。电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，0.5μg/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液。 二、实验步骤 1. 用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。 2. 在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。在实验台上再加入5μl1×TAE电泳缓冲液及1μl的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。 3. 打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min，用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。 三、 RNA的变性琼脂糖凝胶检测 1. 试剂 （1）MOPS缓冲液（10*）:0.4mol/L吗啉代丙烷磺酸（MOPS）(pH7.0)，0.1mol/LNaAc，10mol/LEDTA。 （2）上样染料：50%甘油，1mmol/LEDTA，0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。 （3）甲醛。 （4）去离子甲酰胺。v电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。 2. 操作 （1）将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。 （2）配制琼脂糖凝胶。 ①称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。 ②待胶凉至60--70℃，依次向其中加入9ml甲醛、5ml10XMOPS缓冲液和0.5ul溴化乙锭，混合均匀。 ③灌制琼脂糖凝胶。 （3）样品准备： ① 取DEPC处理过的500ul小离心管，依次加入如下试剂：10xMOPS缓冲液2ul，甲醛3.5ul，甲酰胺（去离子）10ul，RNA样品4.5ul，混匀。 ② 将离心管置于60℃水浴中保10分钟，再置冰上2分钟。 ③ 向管中加入3ul上样染料，混匀。 （4）上样。 （5）电泳：电泳槽内加入1XMOPS缓冲液，于7.5V/ml的电压下电泳。 （6）电泳结束后，在紫外灯下检查结果。 |
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2021-07-29
阅读（251）
▍
相关分类
▍
相关文章
电泳槽与电泳仪之间有什么区别?
dGTP Solution(100 mM) 脱氧鸟苷三磷酸溶液（100 mM）https://www.yeasen.com/products/detail/96脱氧核糖核苷三磷酸溶液套装（dATP, dCTP, dTTP, dGTP, 100mM each ） 10122ES74 4×40
5.2.1 甲醛变性琼脂糖凝胶电泳_实验⽅法_
Aviva Systems品牌简介 (Aviva Systems Biology ) 抗体;生物 ...
安玛西亚品牌简介 GE Amersham Biosciences 安玛西亚 ...
固相化pH梯度双向凝胶电泳实验7
分离外周血单个核细胞的常用方法()_
fine是什么意思?帮你突破I’m fine的框框 蔡妈笔记网
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳法实验报告
鉴定分析植物蛋白复合物的蓝绿非变性凝胶电泳实验 ...
其它_chengfong的专栏_chengfong
循环水式真空泵实验室常规仪器浙江杭州凯弗克斯实验室设备 ...
▍
相关问答
