放射免疫对流电泳实验_实验⽅法_
| 实验方法原理 | 将放射性元素标记的抗体(或抗原)与相应的抗原(或抗体)沉淀时，沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影，就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线，作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影，再经过显影把“像”显示出来。这样,能检出肉眼看不见的沉淀线，从而提高反应的敏感性，这种方法可应用于凝胶中的所有反应。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 放射性同位素标记的抗原抗体 试剂、试剂盒 | 显影液定影液 仪器、耗材 | X—射线胶片全色胶片电泳仪电泳槽 实验步骤 | 一、材料 1. 放射性同位素标记的抗原或抗体 2. X—射线胶片或全色胶片 3. 显影液与定影液 4. 其它同对流免疫电泳 二、操作方法 1. 按对流免疫电泳制备凝胶板并打孔。 2. 加样阴极端孔内加抗原,阳极端孔内加抗体。在加被检抗体样品时，迅速加入标记抗原(2000~3000cpm)，并使之混合，勿使抗原吸收后再加标记抗原，以免由于标记原的滞面而形成假阳性。 3. 电泳电流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。 4. 电泳后，平板浸在3%HCl中漂洗8h，换液2次。 5. 用流水漂洗过夜。 6. 干燥室温或鼓风机吹干。 7. 曝光在暗室将胶片切成与平板一样大小，然后将药面密接凝胶面，再在胶片上压一张玻板，用黑布包严，皮筋扎紧，曝光时间与所用同位素及保存期有关。181I，一周内5h~10h；1~2周内24h；2~3周内48h。125I，在2个月内10h。 8. 冲洗全色胶片冲片方法,水洗、20℃显影10min、水洗、定影、水洗、凉干,观察结果。 三、结果判定 在抗原抗体孔之间形成一条清晰的黑色影像者，判为阳性。 |
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发布于 ： 2021-08-06
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