固相化pH梯度双向凝胶电泳实验13资讯
| 实验材料 | 含蛋白质样品的凝胶 试剂、试剂盒 | 乙酸钼酸铵溶液含硝酸的钼酸铵溶液甲基绿溶液NaOH磺基水杨酸溶液含氯化钙的磺基水杨酸溶液 仪器、耗材 | 带有盖子的玻璃或塑料平皿烘箱往复式或定轨式摇床 实验步骤 | 1.将凝胶放入盛有50ml水的平皿中，在往复式或定轨式摇床上摇动凝胶1Omin。 2.将凝胶转移到盛有25ml磺基水杨酸溶液的平皿中，摇动15mm。 3.再将凝胶放在25ml含氯化钙的磺基水杨酸溶液中，在摇床上摇动30min。 4.迅速用清水洗涤凝胶表面以去除连接在其上的氯化钙。 5.将凝胶转移到25ml0.5mol/LNaOH，用盖子将平皿盖上，在65°C下保温20min。 6.再将凝胶放入25ml钼酸铵溶液中，在摇床上摇动lOmin。 7.重复步骤6。 8.将凝股转移到25ml含硝酸的钼酸铵溶液中，在摇床上摇动20min。 9.将凝胶放人甲基绿溶液中，在摇床上摇动20min。 10.进行脱色，将凝胶转移到25ml硫代硫酸钠溶液，在摇床上摇动15min。 11.重复步骤10，此时可以看见磷酸化蛋白的绿色点。 12.为了使凝胶完全脱色，将其放人25ml的7%乙酸中，在摇床上摇动过夜。在脱色期间，当溶液变绿时，换一次乙酸溶液。 13.在磷酸化蛋白呈现颜色之后，用考马斯亮蓝染凝胶上的总蛋白。 |
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发布于 ： 2021-09-07
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