Details
Source
RecombinantE.colistrain
ReagentsSupplied
10XT4PolynucleotideKinaseReactionBuffer
Applications
- Catalyzesthetransferofthegamma-phosphateofATPtothe5"-OHterminusinDNAorRNA
- Contains3"-phosphataseactivity(1)
- Usedfor5"-endlabelingofnucleicacidspriortoDNAorRNAsequencing(2,3)
- PhosphorylatessyntheticlinkersandfragmentsofDNAorRNApriortoligation
- Labels5"-terminipriortopartialrestrictionenzymedigestion
UnitDefinition
Oneunitistheamountofenzymerequiredtotransfer1nmolofγ-phosphatefromATPtothe5"OHterminusofsalmonspermDNAat37°C in30minutes
HeatInactivation
15minutesat65ºC
Concentration
20-30Units/µl
StorageBuffer
50mMTrisHCl(pH7.6)
0.1mMEDTA
25mMKCl
5mMdithiothreitol
0.1µMATP
50%(v/v)glycerol
AssayConditions
70mMTris-HCl(pH7.6)
10mMMgCl2
5mMdithiothreitol
50ug5"-OHterminatedDNA(micrococcalnucleasetreatedsalmonspermDNA)
0.07mM[γ-32P]ATP
Reactionvolumeof100µl
StorageConditions
Storeat-20°C
Productshippedondryice
Downloads
CertificateofAnalysisPDF -CurrentLot
MSDSPDF -CurrentLot
References
(1)Richardson,C.C.(1971)ProgressinNucleicAcidsRes.andMol.Biol.2,815-828
(2)Maxam,A.andGilbert,W.(1977)Proc.Natl.Acad.Sci.USA74,560-56
(3)Donis-Keller,H.(1980)NucleicAcidsRes.8,3133-3142
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希望同路人多多交流啊!
这些染料都非常成熟,光毒和淬灭都很低,当然要考虑到你采集图像时的显微镜参数。
比如calcein,常用的示踪,绿光(虽然这些颜色只是根据光谱加上去的伪彩),但要考虑你的实验过程中结合细胞结构,是否会伴随calcein的泄漏,就是荧光降低。
dri,还可以看膜啊
cfda也不错
bcef虽是ph指示,但你试验时不仅可观察细胞,还可看细胞ph变化,也行。
当然你或许还要结合其他方法,如细胞免疫化学等手段去双染或多染,都需要综合考虑染料之间特性。单独染一个染料,有点浪费,不如多染,数据和图像也好看些。现在流行细胞成像。

