Boc-protected Cyanine5 hydrazide reactive dye for the labeling of aldehydes and ketones.
Boc- (tert-butoxycarbonyl) protective group can be removed with trifluoroacetic acid, or other strong acid. Reactive hydrazide is formed, which can then couple with various carbonyl groups yielding Cyanine5-labeled molecules.
ChemDraw format
General properties
| Appearance: | dark blue powder |
| Molecular weight: | 633.26 |
| Molecular formula: | C37H49ClN4O3 |
| Solubility: | good in dichloromethane, polar organic solvents (DMF, DMSO), alcohols, low in water |
| Quality control: | NMR 1H, HPLC-MS (95%) |
| Storage conditions: | Storage: 24 months after receival at -20°C in the dark. Transportation: at room temperature for up to 3 weeks. Avoid prolonged exposure to light. |
Spectral properties
| Excitation maximum, nm: | 646 |
| ε, L⋅mol−1⋅cm−1: | 250000 |
| Emission maximum, nm: | 662 |
| Fluorescence quantum yield: | 0.2 |
| CF260: | 0.03 |
| CF280: | 0.04 |
Lumiprobe,LLC.是美国一家高品质生物技术公司，专业提供分子生物学研究用的活性荧光染料。主要产品有：活性染料（ReactiveDye）和SYBRGreenI染料，定制合成荧光双标记引物。产品主要应用：点击化学（ClickChemistry）、蛋白质组学研究中的双向荧光差异凝胶电泳（2DDIGE）和实时荧光定量PCR（RealtimePCR）。
Lumiprobe产品包括：羧酸类染料、羰基类染料，标记分子氨基活性染料，标记分子巯基活性染料，动物活体成像用染料，蛋白质、多肽、核酸等生物分子标记染料、点击化学等。渠道正规（市场上部分是分装，质量不能保证），质量保证，价格极具竞争力,而且我们的货期仅需要5-7工作日，不需要像其他家攒单导致货期3-4周。 Thisisakitforthelabelingofantibodiesandproteinsof similarsizewithsulfo-Cyanine5fluorophore.ThedyeisattachedbyNHSesterchemistry,andthentheexcessofthefluorophoreisremovedbymeansofgelfiltrationusingenclosedspincolumns.Theprotocolrequiresonlyaround40minutesoftime,andprovidesdesaltedantibodyinPBSbuffercontainingoptimalnumberoffluorophoresperAb.Thekitcontainscomponentsfor10reactions,upto100ugofantibodyperreaction.
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1.小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法
(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块,在培养皿内用PBS冲洗.
(2).去除结缔组织及脂肪,剪碎肿块.
(3).小碎片移入1.20×38mm注射针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中.
(4).将200～300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL),染色3LL细胞,于4℃存放20～30分钟.
(5).测定580～750nm之间的发射荧光,以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分.
荧光燃料使用的问题有两个：
一个就是迁移性，使用时要严格控制用量，以避免产生迁移现象；
二是荧光染料使用有一个极限值，如果超量使用，导致荧光线被吸收，使吸收和发光成叠所致。
荧光增白剂是一种荧光染料，也是一种复杂的有机化合物，其特性就是能产生蓝色荧光，可使肉眼看到的物质很白。
测试面膜是否含有荧光增白剂，打开面膜的包装，然后放到“ZF-C型三用紫外分析仪”下，使用紫外光照射面膜，看其是否会发出亮蓝色光，如果有，说明面膜上含有荧光剂。 如果没有紫外分析仪，可以用紫外手电筒，紫外验钞机/笔等。
含荧光剂的面膜在紫外光照射下，显现出非常大面积的亮蓝色。稍微接触面膜液体，就会粘附上荧光剂成分，拿了面膜的手，也有荧光。用清水冲洗手3遍后， 手上的荧光剂在紫外光照射下依然发出强烈的亮蓝色光，几乎没有洗掉。改用洗手液清洗3遍，照射后手上也发出蓝光，只是比清水的效果略好一些。用洗面奶清洗，与洗手液的效果差不多，都无法彻底清洗掉残留在手上的荧光...
荧光剂对人体的危害：
荧光剂不像一般化学成分那样容易被分解，而是在人体内蓄积，产生许多有害的作用，大大削减人体免疫力；荧光剂与伤口外的蛋白质结合，还会阻碍伤口的愈合；荧光剂能使人体细胞出现变异性倾向，其毒性累积在肝脏或其他重要**，会成为潜在的致癌因素。造成血液系统受损：化学物质容易污染人体血液，虽然血液具有一定的自净能力，微量的有害物质进入其中，会被稀释、分解、吸附和排出，但长期、大量的有毒物质倾注而入，必致其发生质的变化；进入血液循环，会破坏红细胞的细胞膜，引起溶血现象。
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这些染料都非常成熟，光毒和淬灭都很低，当然要考虑到你采集图像时的显微镜参数。
比如calcein，常用的示踪，绿光（虽然这些颜色只是根据光谱加上去的伪彩），但要考虑你的实验过程中结合细胞结构，是否会伴随calcein的泄漏，就是荧光降低。
dri，还可以看膜啊
cfda也不错
bcef虽是ph指示，但你试验时不仅可观察细胞，还可看细胞ph变化，也行。
当然你或许还要结合其他方法，如细胞免疫化学等手段去双染或多染，都需要综合考虑染料之间特性。单独染一个染料，有点浪费，不如多染，数据和图像也好看些。现在流行细胞成像。
(1)、分子内含有发射荧光的基团，如羰基、氮氮双键、碳氮双键等。
(2)、分子内含有助色基团。助色基团使光谱红移并增大荧光效率，如伯胺基、仲胺基、羟基、醚键、酰胺基等。
(3)、分子内含有刚性平面结构的共轭π键。分子内共轭体系愈大平面性愈强其荧光强度愈高。一些能提高共轭度的因素能提高荧光效率，并使荧光波长向长波方向移动。 就是荧光染料的附着物，主要作用有帮助荧光染料展色、提高荧光染料与下游树酯的相溶性、保护荧光染料的性能。通常载体树脂是强极性树脂，分子中含有胺基、羟基、醚键、酰胺基等强极性基团，一方面有助色作用，增大荧光效率;另一方面与荧光染料有很好的相溶性，有助于染料的均匀分散。
荧光颜料常用的载体树脂有胺基树脂、苯代三聚氰胺一甲醛树脂、聚丙烯酸酯树脂、聚酰胺树酯、聚酯树脂、聚氨酯树脂等。 （1）、热塑性荧光颜料：线型
（2）、热固性荧光颜料： 体型
（3）、可溶解色精荧光颜料
（4）、水乳型荧光颜料 （1）、胺基树酯
（2）、聚酰胺树酯
（3）、聚酯树酯
（4）、丙烯酸乳液 （1）、塑胶类
低温型
中温型
高温型
（2）、涂料类
水性涂料
油性涂料
粉末涂料 （1）、含甲醛
（2）、不含甲醛
随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前，市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(Biotium,USA);AlexaFluor®系列(Lifetechnology,USA);DyLight系列;Cy系列;IRDye系列等等。使用最多的为AlexaFluor®系列和CFTM系列。
一、CFTM系列染料的核心对比AlexaFluor®系列具有以下几点优势：
1、新型罗丹明核心
罗丹明染料以优异的耐光性和良好的荧光量子产量著称。因此很多AlexaFluor®染料具有罗丹明核心结构，但是，传统罗丹明的化学结构很难从长波长的荧光染料延伸至远红外区域甚至是更具挑战性的近红外区域，而且生物偶联后其水溶性并不理想。Biotium科学家发现从绿色到近红外多色荧光的罗丹明染料的新型化学方法。该方法被有效的应用于CF染料的产品中，尤其是远红外CF染料，而且通过这种方法制备的染料不仅水溶性极佳而且耐光性极好。
2、特异性高的近红外染料
近红外染料最大的特点是比可见光范围要大很多，大滴的染料常会导致染料水溶性低、染料聚合体多、荧光量子产量差等问题。为了解决这些问题，许多商用的近红外染料比如AlexaFluor®、DyLight®dyes和IRDyes®近红外染料，在制备时吸附了大量的带负电荷的磺化基团，其磺化作用可以在一定程度上会提高染料的溶解性和荧光性，但这样也带来了另一些更加严重的问题，经这种染料标记的生物耦联物的非特异性结合。Biotium的科学家用**性的方法设计出近红外染料CF，在避免引入大量负电荷的情况下，极大的保证了染料优异的理化特性。Biotium近红外的CF染料以花青或罗丹明染料为核心结构，该核心结构的特殊化学修饰限制了染料的分子内位移，从而获得染料的高量子产率和更好的水溶性。因此，近红外CF染料比其他近红外染料荧光强度更高，光稳定性好。最重要的是，在免疫印迹实验上应用近红外CF染料标记蛋白质样品相对于其他商业用近红外染料制备的抗体偶联物，最大限度的提高了信噪比。
3、优异的标记效率
生物偶联后的活性染料一般很容易水解，会在运输，操作及储存中带来诸多不便，最终致染料结合效率低下。像AlexaFluor®dyes,DyLight™dyesandIRDyes®等严重的磺化作用有较强的吸湿性，恶化水解作用等问题。所有Biotium的CF染料具有相对稳定的胺活性的SE基团型，这比大部分AlexaFluor染料的SE更耐水解。总体来说，CF染料SE产品一贯的给出更高的标记效率，提供给用户更好的使用价值。
二、选择方案：
1、蓝色（350-450nm处激发）
CF350、AlexaFluor350、AMCA等----亮蓝和紫外光激发。
CF350是类似于AlexaFluor350和传统荧光染料AMCA的蓝色荧光染料，CF350的荧光强度高于AlexaFluor350、AMCA，吸附在蛋白上的荧光超过50%，水溶性更好，耐光性非常优秀亮，更容易与现有的绿色荧光基团区分。
CF405S/CF405M、AlexaFluor405----近乎完美的匹配蓝色二极管激光器。
CF405S/CF405M、AlexaFluor405与近来使用的荧光显微镜和流式细胞仪405nm;谱线的蓝色二极管激光器完美的匹配。在流式细胞仪上的分析结果显示CF405S/CF405M荧光信号强度高于AlexaFluor405染料1.7倍。
2、绿色（488nm处激发）
CF488A、AlexaFluor488、FITC、FAM、DyLight488、Cy2等----针对488nm氩离子激光器的绿色荧光染料。
以上染料其标记的抗体蛋白适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪，流式细胞仪的FL1通道检测，或者可用于荧光显微镜技术。
CF488A最低限度的带电量降低了与抗体耦联物的非特异性结合，在红色通道溢出少于AlexaFluor488，耐光性好、水溶性好和pH不敏感，良好的稳定性和活性染料的标记率。
AlexaFluor488在较宽的PH值范围内保持稳定（PH4~10）；
FITC激发波长488nm，最大发射波长525nm，缺点：荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。
3、橙红色（543-555nm处激发）
CF543、AlexaFluor546、ATTO550,Cy3,DyLight549,Rhodamine(TRITC)匹配543nm的橙色荧光染料；
CF™543荧光条带明亮，耐光，水溶性好，确保了CF543染料与抗体的耦联物保持优异的水溶性，为该波段最亮的橙色荧光染料。例如：同等的标记程度下，CF543标记的羊抗鼠IgG抗体的亮度高于用AlexaFluor546标记的2~10倍。
CF555、AlexaFluor555、Tetramethylrhodamine(TAMRA)等匹配Cy3滤光片的橙色荧光染料。
4、红色（568-594nm处激发）
CF568、AlexaFluor®568,ATTO565,RhodamineRed等568nm处红色荧光染料。
CF568染料耐光性最好；高效水溶性；比AlexaFluor568标记的抗体亮度更亮。
CF594、AlexaFluor®594,ATTO™594,DyLight™594,TexasRed等最亮红色荧光染料。
CF594由于其高量子产量和优异的水溶性而比AlexaFluor594明亮2~4倍。同时CF594对光极其稳定，使它能被理想地应用于诸如共聚焦显微镜和单分子显像条件苛刻的应用中去。
5、远红外（620-660nm处激发）
CF620R、LightCyclerRed640等620nm处。
CF™620R是以红色荧光染料罗若丹（rhodamine）为基础的远红外的荧光染料，该染料有高荧光亮度和极度的耐光性。它的吸收和发射光谱为617和639nm，该染料能被用于荧光能量共振转移中高能量的接收者，或者在激发和发射窗口能和该染料的光谱特性匹配的条件下，被应用于多色检测中的最高荧光量采集。染料的卓越的水溶性有利于生物耦合在水介质中，更好的保持耦联物的生物特异性结合。
CF633、AlexaFluor633,AlexaFluor647,Cy5,DyLight633,DyLight649等633/635nm激光线的最佳染料荧光染料。
CF633染料的优点：当被633nm氦氖激光或635nm红色二极管激光激发时，产生最亮的抗体耦联物，光稳定性远高于AlexaFluor647，高效的水溶性。
CF640、AlexaFluor647,ATTO647N,Cy5,DyLight649等远红外荧光染料。
CF640R的优点：以红色染料罗丹明（rhodamine）为基础，吸收和发射峰类似Cy5、AlexaFluor647；但以罗丹明（rhodamine）为基础的红色染料CF640R它最大的优点就是对光稳定性，Cy5和AlexaFluor647以花青素为基础，因此有着和花青素一样的特点即耐光性较差。极好的亮度和耐光性使CF™640R被理想的用于共聚焦显微镜和单分子成像等条件苛刻的检测中。
CF647、AlexaFluor647,ATTO647N,DyLight649等远红外荧光染料。
以花青素为基础的远红外荧光染料CF647比Cy5、AlexaFluor647明亮。
CF660、AlexaFluor®660,Allophycocyanin(APC)等介于远红外近红外之间的荧光染料。
6、近红外（680-790nm处激发）
CF680R/680、AlexaFluor680,Cy5.5,IRDye680等近红外荧光染料。
CF680是高水溶性的以花青素为基础的染料，分子量大约为3000。该染料标记抗体极佳，发出最亮的荧光和在免疫染色光谱相似的染料中产生最高的信噪比。
CF680R分子量约为900，更适合标记核酸或者相对小的生物分子。CF680R是新型的以罗丹明（rhodamine）为基础的高荧光亮度,极度耐光性染料，这使它可被理想地用于共聚焦显微镜，单分子成像等条件要求苛刻的应用中。
CF750、CF™770andCF™790等近红外荧光染料。
CF750、CF770、CF790是领域内真正具有突破性的长波长的新型染料代表。其他近红外染由于受到染料聚集和稳定性差等因素的影响而导致荧光亮度有限。基于Biotium科学家研制的新型分子工程技术，近红外CF染料克服了这些问题。即使在633nm被激发，CF750也会比APC-AlexaFluor750拥有足够的亮度来在流式细胞仪检测中带来更好的信噪比，而且不存在串联染料的低稳定性等问题。另外，近红外CF染料高度水溶性，没有会增加抗体耦联物非特异性结合的过剩的负电荷，也代表了该产品的优秀性能。
