
This beta-lactam antibiotic is an aminopenicillin. Likepenicillin, it inhibits bacterial cell wall synthesis bypreventing peptidoglycan cross-linking and murein assembly. Thepresence of an amino group confers greater efficacy againstGram-negative bacteria as compared to penicillin. Ampicillin iscommonly used in molecular biology to assay for gene uptake(e.g., plasmid vectors carrying the ampicillin resistance gene).
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CAS Number 7177-48-2
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RAW细胞,6孔板,RIPA提取蛋白(提前加好PMAF),每孔100uLRIPA,冰上用tip倒过来刮细胞,放置15min,12000gX15min离心,取上清。做WB时,沸水煮5min,胶冻样物质还是存在。
操作过程中发现离心后还是有胶冻样物质,和上清混在一起无法分开,严重的时候基本上全是胶冻样物质。
这个胶冻样物质应该是DNA,园友提供的方法为用超声碎裂器,但是我们实验室没有。请问还有别的方法可以使用么?
去垢剂作为添加剂生长蛋白质晶体是一项很有用的技术。非离子和两性离子结晶剂在膜蛋白结晶中已经得到很好应用,目前已经变成常规的实验手段。去垢剂在一些可溶蛋白中也起到了一定的作用,提高了晶体的质量和结果的可重复性 ,促进了单晶的生长, 但具体的影响机制尚不明确。其可能原因是去垢剂的引入使结晶液滴中的蛋白分子更具有亲水性,使溶液中同质蛋白质分子增加。向左转|向右转
我要做的两个目的蛋白,分子量一个是140的,另一个是36,内参用的GAPDH。这几天刚刚要做小鼠组织的蛋白,就把新提取的组织蛋白和之前做过的细胞蛋白一起上了,细胞和组织的各上了3个孔。
电泳转膜孵育等条件都是以前做成熟的
之后显影,细胞蛋白的,两个目的和内参都出得挺好;但是小鼠的组织蛋白只有分子量140的那个显出条带了,36的那个显出来的像一片水渍一样,斑片状的黑,内参有时也这样、有时干脆什么都不显。不知道这是什么原因...按说细胞同样的蛋白做出来,WB的各个步骤应该不会有太大问题的。
有点怀疑蛋白提取的不好,我提组织蛋白的的操作是在冰上进行的,裂解液也加有PMSF,用BCA法测得的蛋白浓度大概也有3~5mg/ml。
在这里求助各位高手~望给我指点一下~不胜感激啊!
我打算用HPLC分离已经初步纯化的蛋白,大小40kd到200kd,机器是安捷伦1200.
目前只有C18的柱子,用来分环肽。
如果分比较大的蛋白,有什么效果相对好的柱子,请推荐一下。
在网上见到有人说C18也可以试着分析大蛋白,不知道会不会堵,洗不下来?
如常用于缓冲的Tris、HEPES、MPOS等等,去垢剂如NP40,Tween-20,TritonX100,CHAPS,脱氧胆酸钠,SDS等等,
大家能说说这些试剂的使用区别吗(最好讲讲某些情况下使用一些会优于另一些的例子)
有时候某些裂解液含10%左右甘油,又是为何?
平时我们用习惯了一些配方,可能有时候不太清楚为何有些是可替代的,有些是不可替代的,借此机会想听听大家的见解?

