
Description:
TechnocloneAnti-ProteinCINHAntibodyisamonoclonalantibody(mAB)4PCIthat bindstointactPCIandPCItargetenzymecomplexes.
Specificity
BindstointactPCIandPCI-targentenzymecomplexes.
Derivation
HybridizationofNSOcellswithspleencellsfromaBALB/cmouseimmunizedwithpurifiedurinaryPCIaccordingtothemethodof Geigeretal.(1).
Antibodyclass
IgG
Purification
Theantibodyispurifiedfrommurineascitesbyaffinity chromatographyonimmobilizedrecombinantProteinA.ThepurityoftheproductistestedbyLaemmliSDS-PAGE.
Application
- Purificationfromurine[Eckeetal.(2)]
- ImmunodepletionofPCIfromhumanplasma
- ELISAtests
Composition:
Theantibodyislyophilizedfroma1mg/mlsolutioninisotonicphosphatebufferedsaline,pH7.4,containing0.02%sodiumazideand 20mg/mlmannitol.Itissuppliedinvialsof500µgandshouldbereconstitutedwith0.5mldistilledwater.
Forextensivedilutionsaproteincontainingsolutionshouldbeused (e.g.1%bovineserumalbumininPBS).
Lyophilizedantibodyshouldbestoredat4°C.Reconstitutedantibodyshouldbealiquotedandstoredat-20°Corlower. Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.
Literature:
- GeigerM.,PriglingerU.,GriffinJH.,B.R.BinderUrinaryProteinCInhibitor. GlycosaminoglycanssynthesizedbytheepithelialkidneycelllineTCI-598enhance itsinteractionwithurokinase.JBiolChem1991,266:11851-11857.
- EckeS.,GeigerM.ReschI.,JerabekI.,StinglL.,MaierM.andB.R.Binder. InhibitonofTissueKallikreinbyProteinCInhibitor.JBiolChem1992,267:inpress
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其主要作用就是人体的防御军队,抵抗外来的病毒、细菌的侵袭。
按作用对象,可将其分为抗毒素、抗菌抗体、抗病毒抗体和亲细胞抗体(能与细胞结合的免疫球蛋白,如1型变态反应中的lgE反应素抗体,能吸附在靶细胞膜上)。
按理化性质和生物学功能
按理化性质和生物学功能,可将其分为IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五类。
IgM抗体是免疫应答中首先分泌的抗体。它们在与抗原结合后启动补体的级联反应。它们还把入侵者相互连接起来,聚成一堆便于巨噬细胞的吞噬;
IgG抗体激活补体,中和多种毒素。IgG持续的时间长,是唯一能在母亲妊娠期穿过胎盘保护胎儿的抗体。他们还从乳腺分泌进入初乳,使新生儿得到保护;
IgA抗体进入身体的黏膜表面,包括呼吸、消化、生殖等管道的黏膜,中和感染因子。还可以通过母乳的初乳把这种抗体输送到新生儿的消化道黏膜中,是在母乳中含量最多,最为重要的一类抗体;
IgE抗体的尾部与嗜碱细胞、肥大细胞的细胞膜结合。当抗体与抗原结合后,嗜碱细胞与肥大细胞释放组织胺一类物质促进炎症的发展。这也是引发速发型过敏反应的抗体;
IgD抗体的作用还不太清楚。它们主要出现在成熟的B淋巴细胞表面上,可能与B细胞的分化有关。(IgD于1995年从人骨髓瘤蛋白中发现,分子量为175kD,主要由扁桃体、脾等处浆细胞产生,人血清中IgD浓度为3~40μg/ml,不到血清总Ig的1%,在个体发育中合成较晚。IgD铰链区很长,且对蛋白酶水解敏感,因此IgD半衰期很短,仅2.8天。血清中IgD确切的免疫功能尚不清楚。在B细胞分化到成熟B细胞阶段,除了表达SmIgD,抗原刺激后表现为免疫耐受。成熟B细胞活化后或者活化后或者变成记忆B细胞时,SmIgD逐渐消失。)
按可见反应
按与抗原结合后是否出现可见反应,可将其分为:在介质参与下出现可见结合反应的完全抗体,即通常所说的抗体,以及不出现可见反应,但能阻抑抗原与其相应的完全抗体结合的不完全抗体。
按抗体来源
按抗体的来源,可将其分为天然抗体和免疫抗体。
抗体就是免疫球蛋白,是改变了的球蛋白分子。由特异性抗原刺激产生,抗体的产生是由于抗原侵入人体后引起各种免疫细胞相互作用,使淋巴细胞中的B细胞分化增殖而形成浆细胞,浆细胞可产生分泌抗体。
按抗体发展
单克隆抗体的发展经历了四个阶段,分别为:鼠源性单克隆抗体、嵌合性单克隆抗体、人源化单克隆抗体和全人源单克隆抗体。
鼠源性单克隆抗体:鼠杂交瘤单克隆抗体主要是将来源于免疫接种过的小鼠的B 细胞与骨髓瘤细胞融合,继而筛选出既能无限增殖又能分泌抗体的鼠杂交融合细胞,进而进行筛选、抗体制备和抗体纯化。
嵌合性单克隆抗体:指用人的恒定区取代小鼠的恒定区,保留鼠单抗的可变区序列,形成一个人-鼠杂合的抗体。其研制程序快,可大幅度降低异源抗体的免疫原性,却几乎保持亲本鼠单抗全部的特异性和亲和力。另外,它还具有人抗体的效应功能,如补体固定、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)等。
人源化单克隆抗体:利用现有的无数已详细分析过的小鼠抗体,取其与抗原直接接触的那段抗体片段(互补决定区,CDR)与人的抗体框架嫁接,经亲和力重塑,可维持其特异性和大部分的亲和力,同时几乎去除免疫原性和毒副作用。
全人源单克隆抗体:其抗体的可变区和恒定区都是人源的,去除免疫原性和毒副作用。全人源抗体制备的相关技术主要有:人杂交瘤技术、EBV 转化 B 淋巴细胞技术、噬菌体显示技术(phage display)、转基因小鼠抗体制备技术(transgenic mouse)和单个B细胞抗体制备技术等。
由人源化和全人源抗体制备的人源化和全人源抗体药物因其具有高亲和力、高特异性、毒副作用小的特点,克服了动物源抗体及嵌合抗体的各种缺点,已经成为了治疗性抗体药物发展的必然趋势。展开
(一)特异性结合抗原
Ig最显著的生物学特点是能够特异性地与相应的抗原结合,如细菌、病毒、寄生虫、某些药物或侵入机体的其他异物。Ig的这种特异性结合抗原特性是由其V区(尤其是V区中的高变区)的空间构成所决定的。Ig的抗原结合点由L链和H链超变区组成,与相应抗原上的表位互补,借助静电力、氢键以及范德华力等次级键相结合,这种结合是可逆的,并受到pH、温度和电解浓度的影响。在某些情况下,由于不同抗原分子上有相同的抗原决定簇,或有相似的抗原决定簇,一种抗体可与两种以上的抗原发生反应,此称为交叉反应(cross reaction)。
抗体分子可有单体、双体和五聚体,因此结合抗原决定簇的数目(结合价)也不相同。Fab段为单价,不能产生凝集反应和沉淀反应。F(ab')2和单体Ig(如IgG、IgD、IgE)为双价。双体分泌型IgA有4价。五聚体IgM理论上应为10价,但实际上由于立体构型的空间位阻,一般只有5个结合点可结合抗原。 B细胞表面Ig(SmIg)是特异性识别抗原的受体,成熟B细胞主要表达SmIgM和SmIgD,同一B细胞克隆表达不同类SmIg其识别抗原的特异性是相同的。
(二)活化补体
1.IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径活化补体。当抗体与相应抗原结合后,IgG的CH2和IgM的CH3暴露出结合C lq的补体结合点,开始活化补体。由于Clq6个亚单位中一般需要2个C端的球与补体结合点结合后才能依次活化Clr和Cls,因此IgG活化补体需要一定的浓度,以保证两个相邻的IgG单体同时与1个Clq分子的两个亚单位结合。当Clq一个C端球部结合IgG时亲和力则很低,Kd为10-4M,当Clq两个或两个以上球部结合两个或多个IgG分时,亲合力增高Kd为10-8M。IgG与Clq结合点位于CH2功能区中最后一个β折叠股318~322位氨基酸残基(Glu-x-Lys-x-Lys)。IgM倍以上。人类天然的抗A和抗B血型抗体为IgM,血型不符合引韦的输血反应发生快而且严重。
2.凝聚的IgA、IgG4和IgE等可通过替代途径活化补体。
(三)结合Fc受体
不同细胞表面具有不同Ig的Fc受体,分别用FcγR、FcεR、FcαR等来表示。当Ig与相应抗原结合后,由于构型的改变,其Fc段可与具有相应受体的细胞结合。IgE抗体由于其Fc段结构特点,可在游离情况下与有相应受体的细胞(如嗜碱性粒细胞、肥大细胞)结合,称为亲细胞抗体(cytophilic antibody)。抗体与Fc受体结合可发挥不同的生物学作用。1.介导I型变态反应变应原刺激机体产生的IgE可与嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面IgE高亲力受体细胞脱颗粒,释放组胺,合成由细胞FcεRI结合。当相同的变应原再次进入机体时,可与已固定在细胞膜上的IgE结合,刺激细胞脱颗粒,释放组受,合成由细胞脂质来源的介质如白三烯、前列腺素、血小板活化因子等,引起Ⅰ型变态反应。
2.调理吞噬作用 调理作用(opsonization)是指抗体、补体C3b、C4b等调理素(opsonin)促进吞噬细菌等颗粒性抗原。由于补体对热不稳定,因此又称为热不稳定调理素(heat-labile opsonin)。抗体又称热稳定调理素(heat-stable opsonin)。补体与抗体同时发挥调理吞噬作用,称为联合调理作用。中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞具有高亲和力或低亲和力的FcγRI(CD64)和FcγRⅡ(CD32),IgG尤其是人IgG1和IgG3亚类对于调理吞噬起主要作用。嗜酸性粒细胞具有亲和力FcγRⅡ,IgE与相应抗原结合后可促进嗜酸性粒细胞的吞噬作用。抗体的调理机制一般认为是:①抗体在抗原颗粒和吞噬细胞之间“搭桥”,从而加强了吞噬细胞的吞噬作用;②抗体与相应颗粒性抗原结合后,改变抗原表面电荷,降低吞噬细胞与抗原之间的静电斥力;③抗体可中和某些细菌表面的抗吞噬物质如肺炎双球菌的荚膜,使吞噬细胞易于吞噬;④吞噬细胞FcR结合抗原抗体复合物,吞噬细胞可被活化。 抗体的调理吞噬作用。
3.发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用 当IgG抗体与带有相应抗原的靶细胞结合后,可与有FcγR的中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、NK细胞等效应细胞结合,发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作(antibodydependent cellmediated cytotoxicity,ADCC)。目前已知。NK细胞发挥ADCC效应主要是通过其膜表面低亲和力FcγRⅢ(CD16)所介导的,IgG不仅起到连接靶细胞和效应细胞的作用,同时还刺激NK细胞合成和分泌肿瘤坏死因子和γ干扰素等细胞因子,并释放颗粒,溶解靶细胞。嗜酸性粒细胞发挥ADCC作用是通过其FcεRⅡ和FcαR介导的,嗜酸性粒细胞可脱颗粒释放碱性蛋白等,在杀伤寄生虫如蠕虫中发挥重要作用。 抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)。
此外,人IgGFc段能非特异地与葡萄菌A蛋白(staphylococcus proteinA,SPA)结合,应用SPA可纯化IgG等抗体,或代替第二抗体用。展开
抗体都是免疫球蛋白而免疫球蛋白不一定都是抗体。原因是抗体是由浆细胞产生,且能与相应抗原特异性结合发挥免疫功能的球蛋白。而免疫球蛋白是具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白,如骨髓瘤患者血清中异常增高的骨髓瘤蛋白,是由浆细胞瘤产生,其结构与抗体相似,但无免疫功能。因此,免疫球蛋白可看做是化学结构上的概念,抗体则是生物学功能上的概念。
二、特异性免疫:
病原体进入机体后,又可分为胞外菌感染免疫和胞内菌感染免疫两类。
1、胞外菌感染免疫:胞外菌感染时,病菌位于宿主细胞外的血液、淋巴液、组织液等体液中。这时发生的是非特异性的吞噬细胞吞噬和炎症反应;随后产生待异性抗体,两者配合,共同消灭病菌。
2、胞内菌感染免疫:原菌侵入机体后进入宿主细胞内,此时的体液免疫对胞内菌作用不大,因抗体不能进入宿主细胞内,故对这些菌的清除需依靠细胞免疫。一般先由吞噬细胞将它们吞噬,但不能有效地将其杀灭,因此病原菌容易随吞噬细胞在体内扩散,蔓延,而造成全身感染。但在此过程中,机体在病原菌的刺激下逐渐形成细胞免疫,通过致敏淋巴细胞释放的各种淋巴因子,激活吞噬细胞,可大增强其吞噬消化能力,抑制病原菌在吞噬细胞内生存,从而获得防御同种病种原菌再感染的免疫力。
作者:陈丹来源:中国科技网
今日视点
美国约翰·霍普金斯儿童中心、密西西比大学医学中心和麻省大学医学院的研究人员3月3日在第20届逆转录病毒和机会性感染大会上报告说,他们首次实现了对一名感染艾滋病病毒(HIV)婴儿的“功能性治愈”。这项成果将有助于为根治儿童艾滋病病毒感染铺平道路。
“功能性治愈”艾滋病婴儿
据物理学家组织网报道,这名婴儿的母亲是位艾滋病病毒感染者,在他出生30小时后,医生便对其实施了抗逆转录病毒联合治疗。一系列测试表明,婴儿血液中的病毒在逐步减少,在他出生29天之后,病毒降低到了无法检测的水平。治疗一直持续到该婴儿18个月大时停止。10个月后,多次对其进行标准的血液检测,均没有发现血液中存在艾滋病病毒。HIV特异性抗体这一标准的HIV感染临床指标的测试结果也始终为负。
研究人员说,这名婴儿现在被视为“功能性治愈”,也就是说,无需终身用药,其体内的HIV感染已被完全控制,且标准的临床测试无法检测到血液中的HIV复制。但“功能性治愈”患者体内仍有少量病毒,可通过超灵敏方法识别出来,而与之相对而言的“根本性治愈”,则是指患者体内病毒已完全清除。
研究人员认为,可能是由于及时采用了抗病毒治疗,制止了病毒宿主的形成,该婴儿才得以治愈。病毒宿主指的是一种休眠细胞,其在大多数艾滋病患者停止治疗后短短数周内会再度引发感染,极难对付。
及早治疗是关键目前,为防止高风险新生儿感染HIV病毒,通常会对其施以为时6周的预防性剂量的多种抗病毒药物联合治疗;而一旦确诊感染,则改用治疗性剂量。但研究人员说,此次的特殊病例可能会改变目前的做法,因为它凸显了在极早期采用抗逆转录病毒疗法的治疗潜力。
“立即对新生儿采取抗病毒疗法,防止病毒的藏身之地在第一时间形成,由此可以帮助婴儿清除病毒,实现(对感染的)长期控制,而无需终身接受治疗。”该报告的主要作者、约翰·霍普金斯儿童中心的病毒学家德博拉·佩尔绍德说。
专家表示,不需要治疗、具有天然抑制艾滋病病毒的能力是极为罕见的,只在不到0.5%的成人艾滋病毒感染者身上观察到,他们被称为“精英控制者”,其免疫系统能抑制病毒的复制,使病毒数量保持在临床检测不到的水平。HIV专家一直在寻求一种方法,希望将所有的艾滋病患者转化为“精英控制者”,而这项最新成果有望改变局面。
“大规模地完全根除病毒是我们的长期目标,但就目前而言,这仍是遥不可及的,而对高风险新生儿实施积极、及时、准确、有针对性的抗病毒疗法,可能是我们实现功能性治愈的最佳机会。”麻省大学医学院免疫学家凯瑟琳·卢苏里亚加说。
研究人员同时提醒,他们还缺乏足够的数据,尚不能建议改变目前的做法,用治疗性剂量取代预防性剂量对高风险新生儿实施治疗,不过,这名“功能性治愈”婴儿的例子为开展原理验证研究提供了理论基础。
佩尔绍德说:“下一步是要证实,这究竟是对极早期抗逆转录病毒治疗的一个极不寻常的反应,还是一种同样可适用于其他高风险新生儿的方法。”

