【求助】天然蛋白提取时加入尿素的目的

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【求助】天然蛋白提取时加入尿素的目的

2021-07-24

问题描述：

从组织中粗提蛋白时加尿素是为了增加蛋白的溶解,是吧？一般用多大浓度呢？

但是尿素是否会导致天然蛋白的失活呢？通过透析除去尿素后蛋白能“复活”吗？

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antimen

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据我所知尿素的作用就是降低了蛋白质的活度系数使其溶解，当然要求是低浓度的，要是浓度高了就产生负面影响。适当浓度尿素是不会使蛋白变性的，所以放心使用了。

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moxiaohui1980

用户

尿素的作用可溶解蛋白质,有些文献中用8M的浓度(配置溶液时需要加热才能溶解尿素).溶解后可能会变性,需要复性.我的蛋白复性的过程于下:(1)将蛋白溶液放入低吸附试管内，缓慢滴加等体积的PBS,轻摇混匀，置冰上30min(此时尿素浓度降至4M)；（2）将溶液转入透析袋中，然后将透析袋浸于透析液（3MUrea、2mMGSH、0.2mMGSSG、PBSpH7.4）中，4℃搅拌透析过夜；（3）次日将透析液更换为（2MUrea、2mMGSH、0.2mMGSSG、PBSpH7.4），并缓慢向透析杯中滴加1000mlPBS,以缓慢降低Urea浓度，使蛋白自然复性。（4）最后用聚乙二醇（PEG400）浓缩复性蛋白。

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zoujie8171

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urea也有裂解细胞释放蛋白的作用，如果是天然蛋白（除脂类蛋白）一般是比较好溶的，因此我想加尿素的目的可能更偏向于裂解细胞。

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