【求助】动物组织DNA提取纯化

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【求助】动物组织DNA提取纯化

2021-07-24

问题描述：

想获得高纯度的组织基因组DNA用于做定量PCR。先将小鼠脚趾放入组织裂解液(10mMTris-Hcl(pH7.5),100mMNaCl,10mMEDTA,and0.5%SDSwith0.4mg/mlproteinaseK)56°过夜,买了生工的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)溶液PH8.0，接下来该怎么做呀？感谢各位老师帮忙

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fried-shrimp

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你好！我今天也在提取DNA，是青虾尾部肌肉的，方法很简单，所用裂解液是TE 缓冲液，NaOH含量极高，SDS也是10%的，蛋白酶K用量为10ul，所以只用消化3h 就够了。然后把基本消化至澄清的EP管放入预冷至4℃的离心机，12000r 10min；取上清，不要取到沉淀，转移至新EP管，加入等V的 25241的抽提液，中度涡旋30s 即可，这样再12000r 10min；取上清，这一步尤其尤其尤其小心，最好用100ul的枪吸取，小心地把上清转移出来，仔细看的话，下层的蛋白或酚的交界处会不时地往上窜，一不小心就被吸出来了。所以宁可少取，不要贪多；可能这一步只能取到300ul左右的量，但不用太在意，加入等V的冰无水乙醇后，摇一摇，立刻会看到DNA析出来了，室温放置10min 即可；下一步，既可以用枪头把DNA挑出来，单独洗涤一下，也可以13000r 离心10min，倒去乙醇，用70%乙醇洗涤2次，都可以的；最后于通风处充分晾干，加入100~200ul DEPC 水/三蒸无菌水溶解，-20℃保存。我的试剂也基本是从生工买的，混合抽提液和你一样。

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xuwei00

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展开引用fried-shrimp你好！我今天也在提取DNA，是青虾尾部肌肉的，方法很简单，所用裂解液是TE缓冲液，NaOH含量极高，SDS也是10%的，蛋白酶K用量为10ul，所以只用消化3h就够了。然后把基本消化至澄清的EP管放入预冷至4℃的离心机，12000r10min；取上清，不要取到沉淀，转移至新EP管，加入等V的25241的抽提液，中度涡旋30s即可，这样再12000r10min；取上清，这一步尤其尤其尤其小心，最好用100ul的枪吸取，小心地把上清转移出来，仔细看的话，下层的蛋白或酚的交界处会不时地往上窜，一不小心就被吸出来了。所以宁可少取，不要贪多；可能这一步只能取到300ul左右的量，但不用太在意，加入等V的冰无水乙醇后，摇一摇，立刻会看到DNA析出来了，室温放置10min即可；下一步，既可以用枪头把DNA挑出来，单独洗涤一下，也可以13000r离心10min，倒去乙醇，用70%乙醇洗涤2次，都可以的；最后于通风处充分晾干，加入100~200ulDEPC水/三蒸无菌水溶解，-20℃保存。我的试剂也基本是从生工买的，混合抽提液和你一样。......谢谢你！

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qiqnqiqn12345

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您好，我是新手，最近在在提病毒的DNA，需要把病料组织裂解后释放出病毒，可以用TE缓冲液加SDS裂解组织吗？可以的话比例是多少呢？

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pbao77

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mark

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