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【求助】vimentin(波形蛋白)是否可作阳性对照 论坛
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QuickDNAPlasmidPrep

Thisprotocolgivesverycleanplasmidprepsforrestrictiondigestsandcloning.However,duetothealkalinelysisstep,theDNAisoftennickedandmaynotgiveexceptionalsequencedata.

Solutions

TENS

0.1NNaOH1ml10NNaOH

0.2%SDS1ml20%SDS

10mMTris7.51ml1MTris7.5

1mMEDTA200ul0.5MEDTA

upto100mlwithQ

storeatroomtemperature

3MNaOAc5.2

24.6ganhydroussodiumacetate

pHto5.2withaceticacidandbringupto100mlwithQ

Procedure

•Inoculatea2mlovernightculturewithasinglecolony.

•Pellet1.5mloftheovernightcultureandaspirateallbut50mloftheLB.

•ResUSPendthecellpelletintheremainingLBandadd300mlTENS.

•Vortex,andadd150ml3MNaOAc5.2.

•Vortexagainandspinfor2minutesinthemicrofuge.Discardthepelletusingatoothpick.

•Add300mlphenol/chloroform,vortexandspinfor5minutesinthemicrofuge.

•Retrieve200mlofaqueoussupernatantandadd600mlEtOH.Spinfor10minutesinthemicrofuge,washanddrythepellet.

•Resuspendin40mlTE.5mlisgenerallysufficientforrestrictiondigests(addRNaseA).

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