测脂肪酶活性时底物4甲基伞型油酸脂用什么溶解? 微生物...
1.10ml菌液过夜培养至饱和（OD600值为2-3）2.离心沉降细胞（Sorvall中以2000rpm的速度），然后以冷的、等体积的无菌蒸馏水洗涤3.将细胞沉淀在200μl裂解缓冲液中重悬浮，然后加入约300μl玻璃珠和200μl的1：1苯酚：氯仿混和液4.漩涡摇匀1-2min5.加入200μl的TE缓冲液，倒置混合6-10次。注意：从这步开始漩涡摇匀可能会剪切DNA6.在微型离心机中以13000rpm的速度离心样品5min7.将上层的水相转移到干净的微量离心管中8.加入1体积（400μl）氯虏⒎旌蟤ixbyinversion9.同第6步离心10.将上层的水相转移到新的微量离心管中11.加1ml乙醇，翻转混匀12.在微型离心机中以13000rpm的速度离心2min13.弃上清液，用1ml的70%乙醇洗涤沉淀14.完全弃去上清液，并将沉淀在室温下干燥。在干燥过程中沉淀颜色会发白但无酒精味15.在400μl含有最后浓度为2μg/ml的核糖核酸酶的TE缓冲液中重悬浮沉淀16.37℃培养10min17.重复9-12步18.在50μlTE中重悬浮沉淀裂解缓冲液：2%（v/v）TritonX-100，1%（v/v）SDS，100mMNaCl，10mMTris碱(pH8.0)，1mMEDTA(pH8.0)TE缓冲液：10mMTris碱（pH8.0），1mMEDTA（pH8.0）YPD：1%酵母浸膏，2%细菌用蛋白胨，2%葡萄糖，20min/升高压灭菌酸洗玻璃珠：425-600μm，Sigma公司，G8772，使用前高压灭菌
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发布于 ： 2021-08-31
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