毕赤酵母高效转化实验方案 实验方法
毕赤酵母高效转化实验方案1.收集菌体取1mlGS115过夜培养物(OD约6-10)分装到1.5mlEP管中，4℃、10000g离心1min，弃上清，沉淀用无菌水(4℃)洗涤，同样条件下离心，弃上清。2.菌体处理加入1ml处理液，室温下放置20min。处理液：10mMLiAc10mMDTT0.6Msorbitol10mMTrisHCl(pH7.5)3.离心，弃上清，加入1ml1Msorbitol，离心，弃上清，4.用1Msorbitol洗涤二次，到最终体积约为80μl.（菌体太多可适当弃去部分）5.加入10μl.经过BglⅡ酶切处理的工程质粒，混匀后转入电击杯中，冰浴5min.6.电转.1.5kv，25μF，200Ω条件下进行电转。7.电击后立刻加入1mL1Msorbitol，吸出后于30℃培养2h。8.取一定量涂平板(YPDS+Zeocin，涂布的量分别为100、200微升，剩余的经离心处理后全部涂在一个平板上)有一点要注意的是处理液中的DTT是在使用前加入，其它配好后于4度保存，DTT单独于-20度保存，可配成100倍的贮备液。
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发布于 ： 2018-12-26
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