
The Advantage HD Polymerase Mix provides maximum fidelity and extended PCR product length, making it particularly useful for applications that require high accuracy, such as cDNA cloning, site-directed mutagenesis, and mutation genotyping (i.e., SNP analysis).
The Advantage HD Polymerase Mix consists of a novel DNA polymerase with a hot-start antibody, and comes with a tube of 5X buffer (with Mg2+).
The Advantage HD Polymerase Mix provides maximum fidelity and extended PCR product length, making it particularly useful for applications that require high accuracy, such as cDNA cloning, site-directed mutagenesis, and mutation genotyping (i.e., SNP analysis).
The Advantage HD Polymerase Mix consists of a novel DNA polymerase with a hot-start antibody, and comes with a tube of 5X buffer (with Mg2+).
Advantage HD Polymerase Mix provides outstanding accuracy due to the presence of 3" → 5" exonuclease activity that results in an extremely low error rate. It also performs extremely well on GC-rich and other more complex templates. The Advantage HD Polymerase Mix amplifies targets of up to 8.5 kb from human genomic DNA, 10 kb fromE. coligenomic DNA, and 22 kb from lambda DNA. The amplification efficiency of Advantage HD Polymerase Mix is greater than that of wild-typeTaq polymerase.
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下面是六种不同耐热聚合酶的比较:
Taq:扩增效率最高的耐热DNA聚合酶,能很好的扩增6kb以下的DNA片段。扩增碱基出错率为10-5左右。
Pfu:目前保真度最高的耐热DNA聚合酶,碱基出错率为10-6,但扩增效率低于Taq酶,一般能很好的扩增2kb以下的片段。
TaqPlus:集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高,保真度比Taq好。能有效的扩增10kb以下的片段。
HotstartTaq:经过化学修饰的耐热DNA聚合酶。此酶在常温下,活性被化学基团封闭,要在94℃-95℃加热数分钟才能回复正常活力开始反应,避免了起始循环较低温度下的非特异性扩增,提高了反应的灵敏度和特异性。
LongTaq:具有3’-5’外切酶活性的耐热DNA聚合酶,它不但扩增效率高而且错配率低,对于简单模板可扩增长达40kb的模板,对复杂模板也可扩增长达15kb的片段。
TaqPlatinum:热启动高保真耐热DNA聚合酶。如果对保真度要求很高,而用Pfu扩增有难度,可选用TaqPlatinum,一般扩增长度可达4kb。
根据不同的实验目的选择最合适的酶,
克隆普通长度的目的DNA片段:Taq、TaqPlus
保真度要求较高,片段比较短,如点突变、基因筛选等:Pfu、TaqPlatinum
高保真长片段扩增,如构建基因图谱及分子遗传学研究等:LongTaq、TaqPlus
扩增基因组模板,需要降低背景:HotstartTaq、TaqPlatinum
扩增GC含量较高或二级结构较复杂的模板:TaqPlus、LongTaq、TaqPlatinum
实时荧光定量PCR反应:Taq、HotstartTaq、TaqPlatinum
从菌株或质粒模板,筛选鉴定目的克隆,扩增6kb以下的片段:Taq、TaqPlus、2×TaqPCRMasterMix
模板比较复杂或目的片段丰度低,用普通Taq酶扩增不出条带:2×TaqPCRMasterMix、2×PfuPCRMasterMix
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶;(2)依赖RNA的DNA聚合酶;(3)依赖DNA的RNA聚合酶;(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶,它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);DNA聚合酶只能在有引物的基础上,即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸,这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外,还需要Mg2+ 、模板DNA和引物,迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。同样,上述(3)和(4)是催化RNA生物合成反应中最主要的RNA合成酶,它们以四种三磷酸核糖核苷(NTP)为底物,并需有DNA模板以及Mn2 及Mg2 的存在下,在前一个核苷酸3′-OH与下一个核苷酸的5′-P聚合形成3′,5′-磷酸二酯键,其新生链的方向也是5′→3′。RNA聚合酶也大量存在于原核和真核生物的细胞中。如大肠杆菌RNA聚合酶分子量4.8×105,由5条多肽链组成,分别命名为α,α,β,β′,和γ,全酶可用α2ββ′λ表示。真核生物RNA聚合酶分子大于5×105,由10~12个大小不等亚基组成。聚合酶除作为自然界生命活动中不可缺少的组分外,在实验室中大多用作生命科学研究的工具酶类之一。向左转|向右转
DNA连接酶作用于基因工程,用于连接两个DNA片段间的磷酸二酯键。
不同点:
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP;DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物,而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能,而DNA聚合酶没有,当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。
4、RNA聚合酶只具有5‘到3’端的聚合酶活性,而DNA聚合酶不仅有5‘到3’端的聚合酶活性,还具有3‘到5’端的外切酶活性。保证DNA复制时候校对,所以复制的忠实性高于转录的。
5、RNA聚合酶通常作用于转录过程;DNA聚合酶通常作用于DNA复制过程。
再来说真核生物,真核生物的DNA聚合酶分为α,β,γ,δ,ε,.首先我来说三个和原核生物中的Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ功能相同的酶.ε类似于原核生物DNA聚合酶Ⅰ,β类似于原核生物DNA聚合酶Ⅱ,δ类似于原核生物DNA聚合酶Ⅲ.α具有引物酶活性,而γ则是作为复制真核生物线粒体内的DNA所需要的酶.
B、酶大部分是蛋白质、少量是RNA,故某种酶的基本组成单位是氨基酸或核糖核苷酸,B错误;
C、内分泌细胞能产生激素,活的细胞能产生酶,故能产生激素的细胞就能产生酶,C正确;
D、酶通常是蛋白质,蛋白质在低温条件下更加稳定,利于保存,而且低温不会使酶失活,因此在最适温度保存没有意义,D错误.
相同点:都能以DNA为模板,从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP;DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物,而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能,而DNA聚合酶没有,当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。
4、RNA聚合酶只具有5‘到3’端的聚合酶活性,而DNA聚合酶不仅有5‘到3’端的聚合酶活性,还具有3‘到5’端的外切酶活性。保证DNA复制时候校对,所以复制的忠实性高于转录的。
5、RNA聚合酶通常作用于转录过程;DNA聚合酶通常作用于DNA复制过程

