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NEB/Hemo KlenTaq®/M0332S/200 reactions
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HemoKlenTaqisatruncatedversionofTaqDNAPolymerase,lackingthefirst280aminoacids(1).HemoKlenTaqalsocontainsmutationsthatmakeitresistanttoinhibitorspresentinwholeblood.Itcanamplifydirectlyfromwholebloodfromhumansandmice.HemoKlenTaqtoleratesupto20%wholebloodina25µlreaction(30%in50µlreaction).

AmplificationofhumanwholebloodwithHemoKlenTaq.Percentbloodpresentinsampleandanticoagulantusedareindicatedinthelegend.LadderMisthe2-LogDNALadder(NEB#N3200).

ProductSource

An E.coli strainthatcarriesamutant Taq DNApolymerasegene.TheproteinlackstheN-terminal5´→3´exonucleasedomainandthegenehasthreeinternalpointmutations.

ReagentsSupplied

Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:

Storeat(°C)Concentration
HemoKlenTaq® ReactionBufferPack-205X
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北京金石百优科技有限公司在发布的Long Taq DNA聚合酶供应信息,浏览与Long Taq DNA聚合酶相关的产品或在搜索更多与Long Taq DNA聚合酶相关的内容。 查看更多>
人体内真正发挥作用的是蛋白质,蛋白质扮演着构筑生命大厦的“砖块”角色,随着破译生命密码的人类基因组计划进入尾声,一个以蛋白质和药物基因学为研究重点的后基因组时代已经拉开序幕,蛋白质将是今后的重点研究方向之一。然而,蛋白质的分离和鉴定非常费时,目前测定蛋白质的技术远远落 查看更多>
红荣微再(上海)生物工程技术有限公司在发布的PCR/NGS文库扩增KAPA HiFi HotStart ReadyMix高保真DNA聚合酶预混液供应信息,浏览与PCR/NGS文库扩增KAPA HiFi HotStart ReadyMix高保真DNA聚合酶预混液相关的产品或在搜索更多与PCR/NGS文库扩增KAPA HiFi HotStart ReadyMix高保真DNA聚合酶预混液相关的内容。 查看更多>
复旦大学生化与分子生物学实验室教授撰写碱裂解法从大肠杆菌制备质粒,是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可以我收研究生十几年了,几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因,我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实 查看更多>
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Introduction:C. elegans RNA preps that have been widely used previously involved fairly slow lysis of the worms, potentially leading to degradation of the RNA. 查看更多>
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B、DNA连接酶 C、拓扑异构酶 D、解链酶 E、限制性核酸内切酶查看答案您可能感兴趣的试题 左心衰竭最早出现的症状是( )。 A.劳力性呼吸困难 B.心源性哮... 查看更多>
复杂的生物系统可以被描述为一个网络中发生的化学过程的分子。科学家们“ChemLife”研究计划的康斯坦茨大学的工作在一起,一个同样与动态interconnections-both科目和跨学科的有源网络。最近的见解DNA聚合酶通过跨学科合作有机化学、生物化学、结构生物学和理论化学显示生产力和相互鼓舞人心的生物和化学技术之间的相互作用。这些新的发现在分子水平上的聚合酶可用于基因组测序和分子的其他领域的基于诊断。研究结果刊登在2018年9月17日的《美国国家科学院学报 查看更多>
Hepatitis B is a small DNA virus that contains only 4 open reading frames in its genome. Three of these ORFs have been identified as the envelope, capsid and 查看更多>
第一节 概 述把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线 查看更多>
碱裂解法从大肠杆菌制备质粒,是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。为了方便理解,这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液:溶液I,50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA,pH 8.0;溶液II,0.2 N NaOH / 1% SDS;溶液III,3 M 醋酸钾 / 2 M 查看更多>
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DNA聚合酶是DNA复制时起作用的酶。DNA复制酶这个说法很少见。
合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素。选择最合适的耐热聚合酶,是进行PCR实验首先要考虑的问题。许多耐热DNA聚合酶的主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。
下面是六种不同耐热聚合酶的比较:
Taq:扩增效率最高的耐热DNA聚合酶,能很好的扩增6kb以下的DNA片段。扩增碱基出错率为10-5左右。
Pfu:目前保真度最高的耐热DNA聚合酶,碱基出错率为10-6,但扩增效率低于Taq酶,一般能很好的扩增2kb以下的片段。
TaqPlus:集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高,保真度比Taq好。能有效的扩增10kb以下的片段。
HotstartTaq:经过化学修饰的耐热DNA聚合酶。此酶在常温下,活性被化学基团封闭,要在94℃-95℃加热数分钟才能回复正常活力开始反应,避免了起始循环较低温度下的非特异性扩增,提高了反应的灵敏度和特异性。
LongTaq:具有3’-5’外切酶活性的耐热DNA聚合酶,它不但扩增效率高而且错配率低,对于简单模板可扩增长达40kb的模板,对复杂模板也可扩增长达15kb的片段。
TaqPlatinum:热启动高保真耐热DNA聚合酶。如果对保真度要求很高,而用Pfu扩增有难度,可选用TaqPlatinum,一般扩增长度可达4kb。
根据不同的实验目的选择最合适的酶,

克隆普通长度的目的DNA片段:Taq、TaqPlus
保真度要求较高,片段比较短,如点突变、基因筛选等:Pfu、TaqPlatinum
高保真长片段扩增,如构建基因图谱及分子遗传学研究等:LongTaq、TaqPlus
扩增基因组模板,需要降低背景:HotstartTaq、TaqPlatinum
扩增GC含量较高或二级结构较复杂的模板:TaqPlus、LongTaq、TaqPlatinum
实时荧光定量PCR反应:Taq、HotstartTaq、TaqPlatinum
从菌株或质粒模板,筛选鉴定目的克隆,扩增6kb以下的片段:Taq、TaqPlus、2×TaqPCRMasterMix
模板比较复杂或目的片段丰度低,用普通Taq酶扩增不出条带:2×TaqPCRMasterMix、2×PfuPCRMasterMix
RT说得概括一点考试简答用~!
大家谁用过Invitrogen的platinumpfxDNA聚合酶?保真性是否如宣传的那样
我用来扩增一个1.1kb的基因,用TAKARA的EXtaq和其他的总是出现突变不知道这个酶能不能完全保真,另外末端是否加A
各位,我需要做基因的序列测定检测突变,想请教一下各位用过哪个公司的哪种高保真酶比较好?(最好是保真性能高而且扩增效率也好)谢谢!
TaqDNA聚合酶是Mg2+依赖性酶,该酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感。以活性程度很低的鲑鱼精子DNA为模板,dNTP的浓度为0.7~0.8mmol/L时,用不同浓度Mg2+进行PCR反应10min,测定结果为Mgcl2浓度在2.0mmol/L时该酶催化活性最高,此浓度能最大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性,Mg2+过高就抑制酶活性,当Mgcl2浓度在10mmol/L时可抑制40~50%的酶活性。由于Mg2+能与dNTP结合而影响PCR反应液中游离的Mg2+浓度,因而Mgcl2的浓度在不同的反应体系中应适当调整,优化浓度。一般反应中Mg2+浓度至少应比dNTP总浓度高0.5~1.0mmol/L。适当浓度的KCl能使Taq DNA聚合酶的催化活性提高50~60%,其最适浓度为50mmol/L,高于75mmol/L时明显抑制该酶的活性。
我以质粒为模板进行定点突变,质粒加目的片段一共6.5kb,不知道选用那种高保真聚合酶比较好,想选PfuDNA聚合酶,查了查比较好的公司Promega生产的了,现在又查到TaKaRa生产的PyrobestDNA聚合酶,不知道这两种酶哪个比较好一些。请哪位高手指点一下。
我要P一个3kb左右的目的基因,需要一个保真性高的酶,因为后面要测序,而且我的两个引物的GC含量相差也很大,还需要一个载体连接去进行筛选,这个载体要4kb以上的,因为要和我的目的基因大小相差大一点的,而且这个载体上还要有多个切割位点,好让我切割下来,与最终的质粒相连。
最近,我看了很多这方面的资料,但是我对这个方面不是很了解,所以现在搞得头昏眼花的,不知道该选什么酶和载体,希望大家多多帮忙
在此十分感谢
一般来说,以DNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶都的结合位点都在DNA上。
但是也有以RNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶 (也就是反转录酶和RNA依赖的RNA聚合酶),它们的结合位点在RNA上.
也就是说,模版是谁,结合位点就在谁上。
2.结合位点就是启动合成DNA或者RNA的碱基序列,如RNA聚合酶结合位点是转录起始位点,是一段特殊的位于编码基因上游的DNA序列.这段DNA序列可以结合RNA聚合酶,从而起始转录过程.经典的RNA聚合酶结合位点是TATA box.
TATA box是编码序列前的4个碱基.在大多数生物的基因前面都有TATA着4个碱基序列的存在,它就是一个RNA聚合酶结合位点.
DNA聚合酶作用于DNA复制时,用于连接两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键以及碱基互补配对时的氢键。
DNA连接酶作用于基因工程,用于连接两个DNA片段间的磷酸二酯键。
二者的区别在于作用的底物:DNA连接酶与DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键。但DNA连接酶连接的是DNA片段(比如冈崎片段);DNA聚合酶是将单个脱氧核糖核苷酸按顺序连接到DNA链上。向左转|向右转


问一个弱弱的问题,本人现在打算用直接测序方法来检测SNP,那么PCR体系中DNA聚合酶有特殊要求吗?比如要精确的pfu酶,如果需要那么哪个厂家的酶比较可靠,成功率高呢?谢谢
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