测序酶相关问答,测序酶知道,测序酶疑问,测序酶解答,测序酶说明,测序酶论坛-蚂蚁淘商城-生命科学科研用品平行进口B2B商城

发布人 zhoushanxin 发布时间 2021-08-06

正在做bmp4启动子的一段序列，两端分别加的Sac1和Nhe1的位点，pcr之后跑胶显示条带位置正确，回收后分别与pgemt-easy载体和peasy-t5zero载体连接，连接之后单酶切和双酶切均显示连接成功，但测序结果就是不对，已经测了3次，求哪位大神指教一二，多谢了！！难道真的是pcr出的序列本来就是错的？而且连接peasy-t5zero载体后双酶切切不开。我用的Sac1和Nhe1是Thermo的，正在尝试换takara的重新双酶切。pgem-teasy载体插入片段位点两侧各有一个EcoR...

质粒分别酶切均有正确条带,但双酶切只有一条条带,这是怎么回事?

发布人 sunshinewfu 发布时间 2021-08-05

两个基因大小分别230kb和450kb，酶切后，450kb的有目的条带，但很弱，230kb的质粒条带亮，其下方有一很微弱条带，用的酶分别是：Ncol和Spel体系是（Takara，两个酶切体系不同，用的官网推荐体系）：NcoI1μlSpel1μl10×KBuffer2μl0.1%BSA2μlDNA3ul灭菌水upto20μl37℃4h电泳1h

载体构建,菌落PCR酶切鉴定都正确,测序无目的片段_问答详情_测...

发布人小泥人-墨点发布时间 2021-08-03

我的目的蛋白D2，是膜表达蛋白，构建了三种载体的重组质粒，分别为CMV,pCDNA3.1,pEGFP-N1,三个重组质粒酶切正确、测序正确，也曾表达过，可以砸出相应大小的目的条带。大提过后，有近一个半月没有进行转染表达，突然发现我的质粒不能砸出目的条带了，甚至外源性的anti-Flag都砸不到（pEGFP重组质粒转染可以观察到微弱荧光，比以前较少），已经重修小提过，也重新进行了酶切，进行测序，都没有问题，现在就是砸不到条带（阳性对照的Flag每次都可以），请各位大神帮忙！！！！！！！！！！！！！...

请问重组质粒PCR有目的条带双酶切没有目的条带是什么原因? 实验...

发布人 momo602201879 发布时间 2021-08-01

利用NheI和HindIII双酶切插入目的片段，为什么双酶切有目的片段和切开的质粒，测序却没有？并且测序后在NheI位点后的序列变成了-GGCTAGGTAC-Kpn位点（CGTTTAAACTTAAGCTTG消失。之前和之后的序列都相符），之间的怎么都没了？

【求助】请教战友:检测一个明确的多态性位点能不能只测序,不做...

发布人 yaobiye 发布时间 2021-07-30

我的实验中，为了检测一个明确报道的多态性位点（该位点为酶切位点）在细胞中的多态性状态，能不能用高保真酶扩增含该位点的一段序列后，直接测序？还是应该先做酶切，在测序？测序是需要做一个t载体克隆不？期待着高手们的指点，谢谢。

...继续往后面做,测序显示目的基因已连在载体上,菌落PCR也可以P出...

发布人 dxy_20y4ry49 发布时间 2021-07-28

1、目的基因与质粒载体（pET21b）双酶切连接，转DH5a感受态细胞，挑取单菌落，菌落PCR可以P出目的条带（引物是pET21b载体上设计的），扩大培养，提取质粒，但是双酶切只有一条带，测序显示目的基因已连在载体上，双酶切了很多次，都切不出来目的条带，也不是酶切体系（20-100ul都尝试过）和酶切时间（3-4h,过夜都试过）的问题。求高手指点，到底哪里出问题了！！！

【容量瓶能否贮存溶液】

发布人鳄鱼妹发布时间 2021-07-27

构建重组质粒，在pSET4S质粒上插入一段基因的上下游同源臂，双酶切验证正确，同时以重组质粒为模板PCR扩增插入的片段，均与阳性对照一致，但测序结果进行NCBI比对，发现插入的一段序列不正确。而且这个重组质粒曾经构建出来过，因其中一个碱基突变所以重新构建，使用了primestar重新构建却总是测序不正确或者酶切不正确

载体构建,菌落PCR酶切鉴定都正确,测序无目的片段生物信息学讨论...

发布人 xiaoyuer6688 发布时间 2021-07-25

最近在构建质粒，遇到奇怪的问题，向大牛们求助！！通过CDNA文库扩增目的基因片段后连接至载体上，转化后挑取克隆进行菌落PCR鉴定，选择阳性菌落扩增后提取质粒，再将质粒酶切鉴定，选择酶切结果正确的质粒送测序，通用引物测序结果显示上游测序结果为载体序列，无目的基因序列，下游引物无信号？！崩溃了，为嘛！我同一批做的其他几个质粒都没有问题，这个质粒构了两次了都这样。。。欲哭无泪啊，求大神们慷慨相助！！

目的片段双酶切后连接载体,测序结果是连反了,为什么会这样?_问答...

发布人 huangmwone 发布时间 2021-07-23

目的片段用kpn1和xho1双酶切，然后连接到PGL4.10上，结果用RPV3测序出来目的序列是反向互补的，这是什么原因导致的？

DNA测序的原理?基因组测序的原理?这两个有什么区别吗,具体查字典...

发布人小飞ur5 发布时间 2017-10-03

高通量测序技术（High-throughput sequencing）又称“下一代”测序技术（Next-generation sequencing technology），以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以下几种：大规模平行签名测序（Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆（Polony Sequencing）、454焦磷酸测序（454 p...

二代测序过程使用哪些酶? 生物信息学专业医生社区,医学...

发布人小天才DM00L 发布时间 2017-10-03

没有专门的“测序酶”的说法。你所说的“测序酶”在一般情况下就是“聚合酶”。因为目前的的测序方法主要就是借助聚合反应。当然，有些测序方法（比如曾经的SOLiD系统）是利用连接反应，那么它用的“测序酶”肯定是连接酶。估计，也就是这个原因有人把它。

蛋白质的酶水解过程研究

发布人 ℡欠诚灬发布时间 2017-10-03

●目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶（proteolytic enzyme）或称蛋白酶（proteinase）已有十多种。●应用酶水解多肽不会破坏氨基酸，也不会发生消旋化。水解的产物为较小的肽段。向左转|向右转

PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶,这种酶要能忍受93℃左右的...

发布人末日审判丶济璬发布时间 2017-10-03

PCR程延伸阶段温度升72摄氏度左右高温度所溶液四种脱氧核苷酸需要耐高温Taq DNA聚合酶作用据碱基互补配原则合新DNA链

DNAsanger测序法原理.pdf

发布人专心学生物发布时间 2017-10-02

为甚么只有加法系统不行？最好举例说明，谢谢!!!

SNP数据构建系统进化树

发布人爆儿███2b揯发布时间 2017-10-02

1.TaqMan探针法　针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针，进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时，该探针与模板退火，即产生了适合于核酸外切酶活性的底物，从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来，破坏两荧光分子间的PRET，发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。2.SNaPshot法　该技术由美国应用生物公司（ABI）开发，是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术，也称小测序，主要针...

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