The End-Repair mix converts DNA containing damaged or incompatible 5′- and/or 3′-protruding ends to 5′-phosphorylated, blunt-ended DNA. This high-concentration formulation of the End-Repair Mix is compatible with applications requiring >1 microgram of DNA to be prepared for blunt-end ligation. The conversion to blunt-ended DNA is accomplished by exploiting the 5′→3′ polymerase and 3′→5′ exonuclease activities of T4 DNA Polymerase (P7080). T4 Polynucleotide Kinase (Y9040) ensures that the ends of the blunt-ended DNA fragments are 5′-phosphorylated for subsequent ligation by T4 DNA Ligase (L6030-HC).
Source of ProteinPurified from strains of E. coli that express the recombinant T4 DNA Polymerase, and T4 Polynucleotide Kinase genes, respectively.
Supplied in100 mM KCl10 mM Tris-HCl0.1 mM EDTA1 mM DTT0.1% Triton X-10050% glycerolpH 7.4 @ 25°C
Supplied WithB9140 (10X End-Repair Buffer)N2060 (1 mM dNTPs)
10X End-Repair Buffer (B9140):1 M Tris-HCl500 mM NaCl100 mM MgCl250 mM DTT0.25% Triton-X 100pH 7.5 @ 25°C
Enzymatics专注于于酶产品的研发，为市场带来了特殊的、高品质的产品。是一家试剂、试剂盒和测定的领先生产商，使全球客户变革了诊断、治疗和生命科学的研究。业务包括：试剂、供应链解决方案，应用科学，其测序产品市场占有率达80%。
酶科技公司产品包括八类：超纯连接酶如T4连接酶、超纯poly酶、ArcherTM系列测序工具(ArcherProducts)、连接蛋白、DNA修饰酶、NGS文库制备(NGSLibraryConstruction)、核酸和RNA酶。
Enzymatics专注于于酶产品的研发，为市场带来了特殊的、高品质的产品。是一家试剂、试剂盒和测定的领先生产商，使全球客户变革了诊断、治疗和生命科学的研究。业务包括：试剂、供应链解决方案，应用科学。目前市场上80%测序产品来自Enzymatics（“Todayourproductsunderpinover80%ofthesequencingreactionsthatarerunaroundtheglobe”）。Enzymatics产品的好处之一--能提高效率：NatureMethods中提到“使用Enzymatics超纯连接酶，连接步骤的效率得以提高，连接片段的产量增加了20-30%”。好处之二--有效降低测序成本：遗传学界的泰斗GeorgeChurch更是认为Enzymatics是"apowerfulcatalystinthedemocratizationofsequencing"。合作伙伴包括：BGI，BerryGenomics，Illumina，454LifeSciences和IonTorrentSyst，皆对Enzymatics的出品赞不绝口。
Enzymatics--核酸25mM100µmoldNTPSolutionMix--N2050L,N2050F
核酸25mM100µmoldNTPSolutionMix
摘要：四种天然脱氧核苷酸的等摩尔混合溶液(25mM)
产品描述
Anequimolar(25mM)mixtureofthefournaturaldeoxynucleotides.
四种天然脱氧核苷酸的等摩尔混合溶液(25mM)
SuppliedAs:25mMeachdNTP(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)atpH7.5
产品信息
PartNumberN2050L,N2050F
Concentration25mM
UnitSize100µmol,20µmol
产品特性
StorageTemperature-25to-15°C
Purity≥99%
BasePurity≥99.5%
Pyrophosphate≤0.003pmol/pmolofnucleotide
EnzScript™(MMLV逆转录酶，RNaseH-)
摘要：基于RNA的DNA聚合酶，无核酸内切酶活性
产品描述：
EnzScript™(M-MLV逆转录酶RNaseHminus)属于RNA依赖的DNA聚合酶，该酶无RNaseH活性。EnzScript™被用于从polyAmRNA或总RNA中产生首链CDNA以用于下游的一些用途，如RT-PCR,cDNA克隆或RNA-Seq的文库构建。RNaseH结构域中的点突变能增加酶的热稳定性，相比于野生型M-MLV逆转录酶，它支持全长转录物种产生更高的cDNA产量
ebiomall.com
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你所说的“测序酶”在一般情况下就是“聚合酶”。
因为目前的的测序方法主要就是借助聚合反应。
当然，有些测序方法（比如曾经的SOLiD系统）是利用连接反应，那么它用的“测序酶”肯定是连接酶。
估计，也就是这个原因有人把它。
●应用酶水解多肽不会破坏氨基酸，也不会发生消旋化。水解的产物为较小的肽段。向左转|向右转
两个基因大小分别230kb和450kb，酶切后，450kb的有目的条带，但很弱，230kb的质粒条带亮，其下方有一很微弱条带，用的酶分别是：Ncol和Spel体系是（Takara，两个酶切体系不同，用的官网推荐体系）：
NcoI1μl
Spel1μl
10×KBuffer2μl
0.1%BSA2μl
DNA3ul
灭菌水upto20μl37℃4h电泳1h
目的片段用kpn1和xho1双酶切，然后连接到PGL4.10上，结果用RPV3测序出来目的序列是反向互补的，这是什么原因导致的？
期待着高手们的指点，谢谢。
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司（ABI）开发，是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术，也称小测序，主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经ABI测序仪检测后，根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点，根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以下几种：大规模平行签名测序（Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆（Polony Sequencing）、454焦磷酸测序（454 pyrosequencing）、Illumina (Solexa) sequencing、ABI SOLiD sequencing、离子半导体测序（Ion semiconductor sequencing）、DNA 纳米球测序 （DNA nanoball sequencing）等。 基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物，使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳，从而避免了泳道间迁移率差异的影响，大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同，在毛细管电泳中的迁移率也不同，当其通过毛细管读数窗口段时，激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测，激发的荧光经光栅分光，以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光，并在CCD摄影机上同步成像，分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列，从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司（ABI）开发，是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术，也称小测序，主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经ABI测序仪检测后，根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点，根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
用takara的in-fusion方法做了个重组质粒，如左图PCR验证，右起第二道是空载质粒为模板的对照。右图是酶切验证，两个图片结合起来觉得除了第四个单克隆外，其他几个应该都可能是阳性克隆。结果送了1，2两个样品后测序的结果都不对。为什么会这样。
