DNA Polymerase I is a mesophilic DNA polymerase that exhibits 5′-3′ DNA synthesis in addition to both 3′→ 5′ and 5′→ 3′ exonuclease activities. The combination of DNA synthesis and 5′→ 3′ nuclease characteristics enable nick-translation during DNA synthesis.
Source of ProteinA recombinant E. coli strain carrying the PolA gene.
Supplied in 25 mM Tris-HCl0.1 mM EDTA1.0 mM DTT50% glycerolpH 7.4 @ 25°C
Supplied WithB0110 (10X Blue Buffer)
10X Blue Buffer (B0110)500 mM NaCl100 mM Tris-HCl100 mM MgCl210 mM DTTpH 7.9 @ 25°C
Unit Definition1 unit is defined as the amount of polymerase required to convert 10 nmol of dNTPs into acid insoluble material in 30 minutes at 37°C.
Enzymatics专注于于酶产品的研发，为市场带来了特殊的、高品质的产品。是一家试剂、试剂盒和测定的领先生产商，使全球客户变革了诊断、治疗和生命科学的研究。业务包括：试剂、供应链解决方案，应用科学，其测序产品市场占有率达80%。
酶科技公司产品包括八类：超纯连接酶如T4连接酶、超纯poly酶、ArcherTM系列测序工具(ArcherProducts)、连接蛋白、DNA修饰酶、NGS文库制备(NGSLibraryConstruction)、核酸和RNA酶。
Enzymatics专注于于酶产品的研发，为市场带来了特殊的、高品质的产品。是一家试剂、试剂盒和测定的领先生产商，使全球客户变革了诊断、治疗和生命科学的研究。业务包括：试剂、供应链解决方案，应用科学。目前市场上80%测序产品来自Enzymatics（“Todayourproductsunderpinover80%ofthesequencingreactionsthatarerunaroundtheglobe”）。Enzymatics产品的好处之一--能提高效率：NatureMethods中提到“使用Enzymatics超纯连接酶，连接步骤的效率得以提高，连接片段的产量增加了20-30%”。好处之二--有效降低测序成本：遗传学界的泰斗GeorgeChurch更是认为Enzymatics是"apowerfulcatalystinthedemocratizationofsequencing"。合作伙伴包括：BGI，BerryGenomics，Illumina，454LifeSciences和IonTorrentSyst，皆对Enzymatics的出品赞不绝口。
Enzymatics--核酸25mM100µmoldNTPSolutionMix--N2050L,N2050F
核酸25mM100µmoldNTPSolutionMix
摘要：四种天然脱氧核苷酸的等摩尔混合溶液(25mM)
产品描述
Anequimolar(25mM)mixtureofthefournaturaldeoxynucleotides.
四种天然脱氧核苷酸的等摩尔混合溶液(25mM)
SuppliedAs:25mMeachdNTP(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)atpH7.5
产品信息
PartNumberN2050L,N2050F
Concentration25mM
UnitSize100µmol,20µmol
产品特性
StorageTemperature-25to-15°C
Purity≥99%
BasePurity≥99.5%
Pyrophosphate≤0.003pmol/pmolofnucleotide
EnzScript™(MMLV逆转录酶，RNaseH-)
摘要：基于RNA的DNA聚合酶，无核酸内切酶活性
产品描述：
EnzScript™(M-MLV逆转录酶RNaseHminus)属于RNA依赖的DNA聚合酶，该酶无RNaseH活性。EnzScript™被用于从polyAmRNA或总RNA中产生首链CDNA以用于下游的一些用途，如RT-PCR,cDNA克隆或RNA-Seq的文库构建。RNaseH结构域中的点突变能增加酶的热稳定性，相比于野生型M-MLV逆转录酶，它支持全长转录物种产生更高的cDNA产量
ebiomall.com
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2.SNaPshot 该技术由美应用物公司（ABI）发基于荧光标记单碱基延伸原理型技术称测序主要针等通量SNP型项目含测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临态位点5’-端同度延伸引物PCR产物模板反应体系引物延伸碱基即终止经ABI测序仪检测根据峰移位置确定该延伸产物应SNP位点根据峰颜色知掺入碱基种类确定该本基型于PCR产物模板通重PCR反应体系获通用于10-30SNP位点析
用takara的in-fusion方法做了个重组质粒，如左图PCR验证，右起第二道是空载质粒为模板的对照。右图是酶切验证，两个图片结合起来觉得除了第四个单克隆外，其他几个应该都可能是阳性克隆。结果送了1，2两个样品后测序的结果都不对。为什么会这样。
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司（ABI）开发，是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术，也称小测序，主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经ABI测序仪检测后，根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点，根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
期待着高手们的指点，谢谢。
两个基因大小分别230kb和450kb，酶切后，450kb的有目的条带，但很弱，230kb的质粒条带亮，其下方有一很微弱条带，用的酶分别是：Ncol和Spel体系是（Takara，两个酶切体系不同，用的官网推荐体系）：
NcoI1μl
Spel1μl
10×KBuffer2μl
0.1%BSA2μl
DNA3ul
灭菌水upto20μl37℃4h电泳1h
以这些标准看，目前的基因组测序结果，还没有一个是完美的。
人类基因组：缺点在哪里?
首先，人类基因组还不够精确。人是“二倍体”，也就是有一半遗传物质来自父亲，一半遗传物质来自母亲，且在受精卵形成过程中，还会发生基因重组，这是人类遗传多样性的来源之一。科学家们需要更精确的“单倍型”数据，这样基因组才够“完美”，而这种“完美”正是研究者们追求的目标。
其次，人类基因组还不够多元。
按照传统的人种分类，人类按照肤色黑白黄棕，被粗分为四大类：尼格罗人种、高加索人种、蒙古人种、澳大利亚人种。基因组测序数据是从高加索人种开始的，人类基因组计划是人类的标准参考基因组，也是高加索人种的标准参考基因组。文特尔的基因组，测序对象是他自己，同样是高加索人种。
然而，从基因组研究的角度，为了尽可能地包括各种遗传背景，需要为更多族裔建立自己的参考基因组。
资料来源：http://www.mv163.cn/jkgl/news/2015/1224/5227.html
【之前构建的4个重组质粒里也有两个出现这样的问题（aagtcc变成agtcc），但是酶切能切出插入的片段】
目前问测序公司得到的答复是样品可能不是单克隆，测序结果是不准确的，建议重新挑取单克隆测序。
不知道还有没有别的方法？
目的片段用kpn1和xho1双酶切，然后连接到PGL4.10上，结果用RPV3测序出来目的序列是反向互补的，这是什么原因导致的？
