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Enzymatics/Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase/500 U/P7590L
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Enzymatics/Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase/500 U/P7590L
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酶科技公司
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P7590L
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Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase is a recombinant, thermostabile Taq DNA polymerase complexed with a thermolabile, neutralizing antibody that blocks the 5′→3′ polymerase activity prior to the initial DNA denaturation step of PCR (1,2). Such antibody-mediated Hot-Start capability enhances the overall specificity, sensitivity and yield of the PCR by reducing nonspecific amplification and primer-dimer formation prior to PCR cycling, and allows the convenience of reaction set up at room temperature. When the temperature of the PCR reaction mix reaches ≥94°C during the initial DNA denaturing step of PCR cycling, activity of the Taq DNA polymerase is fully restored. Phoenix Hot Start Taq DNA Polymerase, like standard Taq DNA polymerase, also has 5′→3′ exonuclease activity, but lacks any detectable 3′→5′ exonuclease activity.

Source of ProteinA recombinant E. coli strain carrying the Taq DNA polymerase gene from the thermophilic organism Thermus Aquaticus YT-1 complexed with a monoclonal antibody derived from murine cell culture.

Supplied in20 mM Tris-HCl100 mM NaCl0.1 mM EDTAStabilizer50% GlycerolpH 7.5 @ 25°C

Supplied With:5X Phoenix Hot Start Taq Reaction Buffer (B7590)5X Phoenix Hot Start Taq GC Reaction Buffer (B7591)

Unit Definition1 unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10 nmol of dNTP into acid-insoluble material in 30 minutes at 75°C.

Enzymatics专注于于酶产品的研发,为市场带来了特殊的、高品质的产品。是一家试剂、试剂盒和测定的领先生产商,使全球客户变革了诊断、治疗和生命科学的研究。业务包括:试剂、供应链解决方案,应用科学,其测序产品市场占有率达80%。


酶科技公司产品包括八类:超纯连接酶如T4连接酶、超纯poly酶、ArcherTM系列测序工具(ArcherProducts)、连接蛋白、DNA修饰酶、NGS文库制备(NGSLibraryConstruction)、核酸和RNA酶。


Enzymatics是分子生物学试剂和制造服务的L先供应商,提供了无与伦比的质量,*性和价值的商业基因组科学界。该公司在美国制造商在ISO13485认证,专注于建立长期合作伙伴关系,并利用内部和外部创新的突破性技术商业化。


Enzymatics专注于于酶产品的研发,为市场带来了特殊的、高品质的产品。是一家试剂、试剂盒和测定的领先生产商,使全球客户变革了诊断、治疗和生命科学的研究。业务包括:试剂、供应链解决方案,应用科学。目前市场上80%测序产品来自Enzymatics(“Todayourproductsunderpinover80%ofthesequencingreactionsthatarerunaroundtheglobe”)。Enzymatics产品的好处之一--能提高效率:NatureMethods中提到“使用Enzymatics超纯连接酶,连接步骤的效率得以提高,连接片段的产量增加了20-30%”。好处之二--有效降低测序成本:遗传学界的泰斗GeorgeChurch更是认为Enzymatics是"apowerfulcatalystinthedemocratizationofsequencing"。合作伙伴包括:BGI,BerryGenomics,Illumina,454LifeSciences和IonTorrentSyst,皆对Enzymatics的出品赞不绝口。


Enzymatics--核酸25mM100µmoldNTPSolutionMix--N2050L,N2050F

核酸25mM100µmoldNTPSolutionMix

摘要:四种天然脱氧核苷酸的等摩尔混合溶液(25mM)

产品描述

Anequimolar(25mM)mixtureofthefournaturaldeoxynucleotides.

四种天然脱氧核苷酸的等摩尔混合溶液(25mM)

SuppliedAs:25mMeachdNTP(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)atpH7.5

产品信息

PartNumberN2050L,N2050F

Concentration25mM

UnitSize100µmol,20µmol

产品特性

StorageTemperature-25to-15°C

Purity≥99%

BasePurity≥99.5%

Pyrophosphate≤0.003pmol/pmolofnucleotide

EnzScript™(MMLV逆转录酶,RNaseH-)

摘要:基于RNA的DNA聚合酶,无核酸内切酶活性

产品描述:

EnzScript™(M-MLV逆转录酶RNaseHminus)属于RNA依赖的DNA聚合酶,该酶无RNaseH活性。EnzScript™被用于从polyAmRNA或总RNA中产生首链CDNA以用于下游的一些用途,如RT-PCR,cDNA克隆或RNA-Seq的文库构建。RNaseH结构域中的点突变能增加酶的热稳定性,相比于野生型M-MLV逆转录酶,它支持全长转录物种产生更高的cDNA产量

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2021-09-07
“微小残留病 (Minimal Residual Disease, MRD) 是指白血病/淋巴瘤/骨髓瘤患者经治疗缓释后,体内仍残留少量癌细胞的状态,其最终可能会引起疾病复发。因残留的癌细胞数量较少,不易察觉,所以需要一个更灵敏的MRD检测手段,这是实现个体化治疗的重要步骤。”围绕微小残留病(MRD)检测的争议之一是其评估的最佳技术。纽约纪念斯隆凯特琳癌症中心的Landgren教授在2017年美国血液学会(ASH)年会中接受采访,就MR... 查看更多>
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目前"精准医疗"成为覆盖全球的热门话题,二代测序、液态活检等新技术在精准医学中扮演着越来越重要的角色,尤其在肿瘤的靶向治疗领域倍受瞩目,各类二代测序服务公司如雨后春笋般不断涌现。然而,二代测序的实验复杂、流程冗长,任何一个环节出问题都可能造成最终检测结果的错误,进而误导临床决策。因此,二代测序市场亟需规范和管理。本期网络研讨会将带您了解基因诊断市场风向,为提高您的检测灵敏度、稳定性和重复性出谋划策。拥有基因检测的金标准,才能得到"精准... 查看更多>
第二代测序技术的核心思想是边合成边测序(Sequencing by Synthesis),即通过捕捉新合成的末端的标记来确定DNA的序列,现有的技术平台主要包括Roche/454 FLX、Illumina/Solexa Genome Analyzer和Appl 查看更多>
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2013年6月21日在上海举行的“第二代基因工程酶与二代测序技术专题研讨会”圆满的落下了帷幕。此次活动是由美国KAPABiosystems公司,上海希匹吉生物技术有限公司与生物360携手举办的一次全球最新DNA聚合酶开发技术与二代测序技术讲座,同时也是美国KAPABiosystems公司第1次在中国上海举办技术研讨会。本次活动为期半天,在学术气氛浓厚的中科院上海生命科学信息中心隆重召开。来自KAPABiosyst... 查看更多>
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最近在构建质粒,遇到奇怪的问题,向大牛们求助!!通过CDNA文库扩增目的基因片段后连接至载体上,转化后挑取克隆进行菌落PCR鉴定,选择阳性菌落扩增后提取质粒,再将质粒酶切鉴定,选择酶切结果正确的质粒送测序,通用引物测序结果显示上游测序结果为载体序列,无目的基因序列,下游引物无信号?!崩溃了,为嘛!我同一批做的其他几个质粒都没有问题,这个质粒构了两次了都这样。。。欲哭无泪啊,求大神们慷慨相助!!

构建重组质粒,在pSET4S质粒上插入一段基因的上下游同源臂,双酶切验证正确,同时以重组质粒为模板PCR扩增插入的片段,均与阳性对照一致,但测序结果进行NCBI比对,发现插入的一段序列不正确。而且这个重组质粒曾经构建出来过,因其中一个碱基突变所以重新构建,使用了primestar重新构建却总是测序不正确或者酶切不正确
高通量测序技术(High-throughput sequencing)又称“下一代”测序技术(Next-generation sequencing technology),以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。
根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等,主要有以下几种:大规模平行签名测序(Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆(Polony Sequencing)、454焦磷酸测序(454 pyrosequencing)、Illumina (Solexa) sequencing、ABI SOLiD sequencing、离子半导体测序(Ion semiconductor sequencing)、DNA 纳米球测序 (DNA nanoball sequencing)等。 基因分析仪(即DNA测序仪),采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳,应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法),因此通过单引物PCR测序反应,生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物,使得四种荧光染料的测序PCR产物可在一根毛细管内电泳,从而避免了泳道间迁移率差异的影响,大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同,在毛细管电泳中的迁移率也不同,当其通过毛细管读数窗口段时,激光检测器窗口中的CCD(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测,激发的荧光经光栅分光,以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光,并在CCD摄影机上同步成像,分析软件可自动将不同荧光转变为DNA序列,从而达到DNA测序的目的。分析结果能以凝胶电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种形式输出。
我在做基因敲除实验(CRISPR/Cas9),实验室一直都是直接送测序验证的,又看到资料说,有用T7E1酶的,也有用SURVEYOR的。
不是很相信网上的商家,遂求助各位路过的大虾们,有用过的吗?这些酶特异性怎样啊?贵不贵,跟我直接测序相比,有优势吗?

两个基因大小分别230kb和450kb,酶切后,450kb的有目的条带,但很弱,230kb的质粒条带亮,其下方有一很微弱条带,用的酶分别是:Ncol和Spel体系是(Takara,两个酶切体系不同,用的官网推荐体系):

NcoI1μl

Spel1μl

10×KBuffer2μl
0.1%BSA2μl
DNA3ul
灭菌水upto20μl37℃4h电泳1h

片段长度143bp,酶切位点kpn1和Hind3,连入pGL3b载体,测序引物公司用的pGL3-,第一次反向测序不成功,原因是质粒出现重叠峰,正向加测后成功,对比发现下游引物的酶切位点(Hind3)少了一个碱基(aagtcc变成aagct),重组质粒酶切切不出插入片段;之后将测序成功的质粒重新转化DH5α,再提质粒酶切还是切不出来。质粒小提试剂盒Qiagen的,提取菌液1.5mL,浓度608.2ng/uL,酶切质粒2ug。
【之前构建的4个重组质粒里也有两个出现这样的问题(aagtcc变成agtcc),但是酶切能切出插入的片段】
目前问测序公司得到的答复是样品可能不是单克隆,测序结果是不准确的,建议重新挑取单克隆测序。
不知道还有没有别的方法?
没有专门的“测序酶”的说法。
你所说的“测序酶”在一般情况下就是“聚合酶”。
因为目前的的测序方法主要就是借助聚合反应。
当然,有些测序方法(比如曾经的SOLiD系统)是利用连接反应,那么它用的“测序酶”肯定是连接酶。
估计,也就是这个原因有人把它。
蛋白质的酶水解过程研究123
℡欠诚灬2017-10-03
●目前用于蛋白质肽链断裂的蛋白水解酶(proteolytic enzyme)或称蛋白酶(proteinase)已有十多种。
●应用酶水解多肽不会破坏氨基酸,也不会发生消旋化。水解的产物为较小的肽段。向左转|向右转
我的实验中,为了检测一个明确报道的多态性位点(该位点为酶切位点)在细胞中的多态性状态,能不能用高保真酶扩增含该位点的一段序列后,直接测序?还是应该先做酶切,在测序?测序是需要做一个t载体克隆不?

期待着高手们的指点,谢谢。

1、目的基因与质粒载体(pET21b)双酶切连接,转DH5a感受态细胞,挑取单菌落,菌落PCR可以P出目的条带(引物是pET21b载体上设计的),扩大培养,提取质粒,但是双酶切只有一条带,测序显示目的基因已连在载体上,双酶切了很多次,都切不出来目的条带,也不是酶切体系(20-100ul都尝试过)和酶切时间(3-4h,过夜都试过)的问题。

求高手指点,到底哪里出问题了!!!

我的目的蛋白D2,是膜表达蛋白,构建了三种载体的重组质粒,分别为CMV,pCDNA3.1,pEGFP-N1,三个重组质粒酶切正确、测序正确,也曾表达过,可以砸出相应大小的目的条带。大提过后,有近一个半月没有进行转染表达,突然发现我的质粒不能砸出目的条带了,甚至外源性的anti-Flag都砸不到(pEGFP重组质粒转染可以观察到微弱荧光,比以前较少),已经重修小提过,也重新进行了酶切,进行测序,都没有问题,现在就是砸不到条带(阳性对照的Flag每次都可以),请各位大神帮忙!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!

用takara的in-fusion方法做了个重组质粒,如左图PCR验证,右起第二道是空载质粒为模板的对照。右图是酶切验证,两个图片结合起来觉得除了第四个单克隆外,其他几个应该都可能是阳性克隆。结果送了1,2两个样品后测序的结果都不对。为什么会这样。