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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 내용
| 2×One StepTB Green®RT-PCR Buffer 4 *1 | 840 ㎕×3 |
| PrimeScript PLUS RTase Mix *2 | 100 ㎕ |
| TaKaRa Ex Taq HS Mix *3 | 300 ㎕ |
| RNase Free dH2O | 1.25 ㎖×2 |
| ROX Reference Dye (50×conc.) *4 | 100 ㎕ |
| ROX Reference Dye II (50×conc.) *4 | 100 ㎕ |
*1 dNTP Mixture, Mg2+ 및TB Green®을 포함한다.*2 역전사 효소, RNase Inhibitor를 포함한다.*3 TaKaRa Ex Taq HS 및 악세서리 단백질을 포함한다.*4 Applied Biosystems의 Real Time PCR 장치 등 well 간의 형광 신호를 보정하는 장치로 해석하는 경우에 사용한다. ABI PRISM 7000/7700/7900HT나7300 Real-Time PCR System에는 ROX Reference Dye를, 7500/7500 FasrReal-Time PCR System에는 ROX Reference Dye II 를 사용한다.Thermal Cycler Dice Real Time System이나 LightCycler에서는 필요 없다.
□ 보존 -20℃
2×One StepTB Green®RT-PCR Buffer 4는 차광하여 -20℃에서 보관
□ 제품설명
One StepTB Green®PrimeScript PLUS RT-PCR 키트 (Perfect Real Time)는TB Green™을 포함한 1 step Real Time RT-PCR 전용 키트이다. RT-PCR를한 튜브내에서 연속적으로 수행하므로 조작이 간편하고 오염의 걱정이 없다. 또한 증폭 산물을 실시간으로 검출할 수 있고, PCR 후 전기영동 등으로 확인할 필요가 없어 RNA 바이러스 등 미량의 RNA 검출에 이상적이다.본 제품은 1 step Real Time RT-PCR용으로 개발된 새로운 역전사 효소와 HotStart PCR 효소로 정평이 있는 TaKaRa Ex Taq HS를 함께 사용하여 효율적으로 고감도 검출이 가능하다. 또한 최적화된 반응 버퍼와 악세서리 단백질의 첨가에 의해 비특이적 증폭을 억제하여 높은 반응성을 실현하고 있다.
□ 특징
1 step Real Time RT-PCR에 의해 RNA 바이러스 등 미량의 RNA 해석을 신속하고 정확하게 할 수 있다.새로운 역전사 효소 PrimeScript Plus RTase와 Hot Start PCR 효소인 TaKaRaEx Taq HS를 함께 사용하여 효율적으로 고감도 검출이 가능하다. 또한 최적화된 반응 버퍼와 악세서리 단백질의 첨가에 의해 비특이적인 증폭을 효과적으로억제한다.버퍼는TB Green®이 이미 포함되어 있는 2×premix이며, 효소류도 premix화 되어 있으므로 반응액의 조제가 간단하다.
□ 적용기종
Thermal Cycler Dice Real Time System (TaKaRa CodeTP800/TP850등)ABI PRISM 7000, 7500 Real-Time PCR System, 7500 Fast Real-Time PCRSystem (Applied Biosystems)LightCycler (Roche Diagnostics)
□ 사용상의 주의
본 키트에 의한 역전사 반응에는 PCR용 Specific 프라이머 (Reverse)을 이용한다. Random 프라이머나 Oligo dT 프라이머는 사용할 수 없다.
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利用NheI和HindIII双酶切插入目的片段，为什么双酶切有目的片段和切开的质粒，测序却没有？
并且测序后在NheI位点后的序列变成了-GGCTAGGTAC-Kpn位点（CGTTTAAACTTAAGCTTG消失。之前和之后的序列都相符），之间的怎么都没了？
【之前构建的4个重组质粒里也有两个出现这样的问题（aagtcc变成agtcc），但是酶切能切出插入的片段】
目前问测序公司得到的答复是样品可能不是单克隆，测序结果是不准确的，建议重新挑取单克隆测序。
不知道还有没有别的方法？
请教高人，这样的问题怎么解决？
多谢
●应用酶水解多肽不会破坏氨基酸，也不会发生消旋化。水解的产物为较小的肽段。向左转|向右转
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司（ABI）开发，是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术，也称小测序，主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经ABI测序仪检测后，根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点，根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
用takara的in-fusion方法做了个重组质粒，如左图PCR验证，右起第二道是空载质粒为模板的对照。右图是酶切验证，两个图片结合起来觉得除了第四个单克隆外，其他几个应该都可能是阳性克隆。结果送了1，2两个样品后测序的结果都不对。为什么会这样。
目的片段用kpn1和xho1双酶切，然后连接到PGL4.10上，结果用RPV3测序出来目的序列是反向互补的，这是什么原因导致的？
