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Singlecellwholegenomeamplification(WGA)withlessbiasmakingthiskitideallysuitedfornextgenerationsequencingapplications.
- Highsensitivity:Typicalyieldisgreaterthan5µgwhenstartingwithasinglemammaliancell.
- Reducedamplificationbiasandnoprimerartefacts:Primer-freeamplificationmethodutilizesacombinationofTthPrimPolPrimase(tosynthesizeprimers)andPhi29DNApolymerase.
- Wellsuitedfornextgenerationsequencing:TestedinIlluminaandIonTorrentNGSworkflows.
- Easyandreliable
- InsensitivetoexternalDNAcontamination
- HowdoesTruePrime™Technologywork?
- Wholegenomeamplificationfrom5cells
- Absenceofprimerartefacts
- InsensitivitytoexternalDNAcontaminations
- Excellentgenomecoverage
HowdoesTruePrimetechnologywork?
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Wholegenomeamplificationfrom5cells
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Absenceofprimerartefacts
1pgofhumangenomicDNA(~1/6ofthecontentofonehuman/mammaliancell)hasbeenamplifiedusingeitherTruePrime™(TthPrimPol-basedMDA)orrandomprimedMDAreactions.Randomprimedreactionscontain20%ofsequencesthatcannotbemappedtoanyorganisminsequencedatabases.
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InsensitivitytoexternalDNAcontaminations
Duetothehighsensitivityofsinglecellwholegenomeamplificationtechniquesthereisaconsiderabledangerofcontaminatingreactionswithnon-targetderivedDNA.Wethereforerecommendtotakeextremecarewhensettingupsinglecellamplificationreactionsaslaidoutinthehandbook.However,TruePrime™usershaveauniqueadvantagehere:TruePrime™doesnotacceptnon-denaturedDNAstrandsastemplateasreADIlyasrandomprimedMDAreactions.Therefore,contaminationscominginfromtheenvironmentetc.afterthedenaturationstepwillnothaveastronginfluenceonthecompositionofyourreactionoutput.WehaveshownthisbehaviourinanexperimentwherewesimulateanexternalDNAcontaminationbydeliberatelyaddinginyeastDNAtoadenaturedhumanDNAtemplate.YeastDNAisinathousand-foldexcessoverthetargetDNA(1pghumangenomicDNA):
WhereaswithTruePrime™thevastmajorityofthesequencesobtainedaretarget-derived,randomprimedMDAshowsamajorityofcontaminant-derivedsequences.
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Excellentgenomecoverage
WehaveamplifiedandsequencedtheyeastgenomeusingTruePrime™andIlluminatechnology.Using2.5millionreadpairswecover99.4%ofthetotalyeastgenome.Shownisthecoveragewithnarrowwidthofthedistributioncurve.
Acoveragegraphofyeastchromosome7exemplifiesthemoreevencoverageobtainedbyTruePrime™MDA(middlebluelinerepresentsmeancoverage).
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ORDERINFORMATION
EachTruePrime™SingleCellWGAKitversion2.0contains:BufferL1,DTT,BufferN,ReactionBuffer,dNTPs,Water,Enzyme1,Enzyme2,Control1,andControl2.ThecompletemanualisavailableundertheManualtab.LucigenisanauthorizeddistributorofSygnisproductsintheUS.TruePrime™SingleCellWGAversion2.0kitisintendedformolecularBIOLOGyuseonlyandinvitrouseonly.Thisproductisnotintendedfordiagnosis,preventionortreatmentofadiseaseinhumanbeingsoranimals.
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2018-03-27
宝予德（中国）有限公司（BIO-DL）在发布的Life Eco扩增仪/PCR扩增仪供应信息，浏览与Life Eco扩增仪/PCR扩增仪相关的产品或在搜索更多与Life Eco扩增仪/PCR扩增仪相关的内容。 查看更多
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2021-08-10
重组酶T4uvsX,单链结合蛋白T4gp32,2mM DTT,购于TwistDX;模板等);在PCR管管2中添加100μL50μg/mL MnO2和20μM钙黄绿素;管3添加100μL 500μM焦磷酸盐... 查看更多
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2018-04-08
单细胞全基因组扩增试剂盒 WGA 单细胞全基因组扩增试剂盒是由红荣微再（上海）生物工程技术有限公司代理或销售的Rubicon Genomics品牌的试剂，产品来源于美国。红荣微再（上海）生物工程技术有限公司是中国最权威的单细胞全基因组扩增试剂盒 WGA 单细胞全基因组扩增试剂盒试剂销售服务商之一，在上海等地方销售单细胞全基因组扩增试剂盒 WGA 单细胞全基因组扩增试剂盒试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业单细胞全基因组扩增试剂盒 WGA 单细胞全基因组扩增试剂盒仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的 查看更多
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2021-07-30
北京泽平科技有限责任公司在发布的亿康基因 MALBAC全基因组重扩增试剂盒供应信息，浏览与亿康基因 MALBAC全基因组重扩增试剂盒相关的产品或在搜索更多与亿康基因 MALBAC全基因组重扩增试剂盒相关的内容。 查看更多
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2018-06-03
北京惠博远致科技有限公司在发布的cDNA末端的快速扩增 (RACE)供应信息，浏览与cDNA末端的快速扩增 (RACE)相关的产品或在搜索更多与cDNA末端的快速扩增 (RACE)相关的内容。 查看更多
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北京爱尚阳光科技有限公司在发布的TAdvanced 96 基因扩增仪 供应信息，浏览与TAdvanced 96 基因扩增仪 相关的产品或在搜索更多与TAdvanced 96 基因扩增仪 相关的内容。 查看更多
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2021-08-12
最新一期《科学》杂志刊登了哈佛大学华人科学家陈崇毅课题组的突破性研究成果：一种名叫转座子插入线性扩增（LIANTI）的技术，首次实现了全基因组的线性扩增。陈崇毅博士接受科 查看更多
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2021-08-03
Paragon Genomics是一家位于美国硅谷的生命科技初创公司。我们致力于开发具有突破性且易于使用的超高多重PCR技术, 用于基因组分析和临床诊断市场。我们的核心技术将首先应用于下一代基因测序文库制备市场，从而实现更准确, 更快, 并且更便宜的DNA测序样品制备和个体化医疗。基因检测是整个精准医学的基础，来自美国硅谷的Paragon Genomics正是一家致力于突破目前基因检测领 查看更多
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2021-09-09
北京普凯瑞生物科技有限公司在发布的二手 ABI PCR 扩增仪供应信息，浏览与二手 ABI PCR 扩增仪相关的产品或在搜索更多与二手 ABI PCR 扩增仪相关的内容。 查看更多
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2021-07-17
货号：PKT0051K 查看更多
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2017-12-05
品牌:TwistDx | 技术资料:1 篇 TwistDX T16 便携式常温等温扩增荧光检测仪 应用领域:广泛应用于医疗诊断、食品检测、动物健康、农业、环境测试、生物防御、科学研... 查看更多
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2021-08-08
(1)从兔肝细胞中提取mRNA,在逆转录酶的作用下形成互补DNA,然后以此DNA为模板在体外利用聚合酶链式(PCR)反应大量扩增,得到基因E.在相关酶的作用下,将基因E与Ti... 查看更多
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【分享】欢迎加入环介导的恒温扩增法(LAMP)讨论群70918628 ...123
cxbyunong2021-07-22
欢迎加入环介导的恒温扩增法（LAMP）讨论群70918628
鹤刺绣衬衫搭配|鹤刺绣衬衫穿搭|鹤刺绣衬衫品牌|尺寸 淘宝海外123
5910456602018-01-24
主要是该方法使用了Bst酶，双链的DNA有一个特性，就是在65度时双链之间的结合较为松散，称之为动态平衡状态，所以不需要预变性使双链解开，而Bst酶在65度时的活性是最高的，这样LAMP反应就能正常进行了
交叉引物恒温扩增技术（CPA）研究进展_爱学术123
qiqishichaoren2021-07-25
恒温扩增RPA实验中如何避免污染123
xiaohe199004252018-01-24
(1)严格分区操作，样品提取区、配液区、扩增区、检测区应相互独立，各区耗材及移液器应专用，实验前先用紫外线消毒以破坏残留的核酸。
(2)操作多份样品时，应先配制反应混合液并分装，减少操作，避免污染，同时增加反应的精确度。试剂的配置和分装应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台操作。
(3)移液器和吸头需专用。由于移液器极易受气溶胶或模板核酸的污染，移液器应尽可能使用可替换或可高压处理的，吸头尽可能使用带滤芯的吸头。
(4)防止操作人员污染，使用一次性手套，EP管与吸头应一次性使用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染。
(5)加样或吸取模板核酸时要十分小心，吸样要缓慢，防止样品进入移液器内；吸样时尽量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或产生气溶胶污染。
(6)EP管打开应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部。开管动作要轻，以防管内液体溅出。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
(7)模板核酸应密封保存，防止外溢及外来核酸的进入。
(8)设立适当的阴阳性对照及重复实验，既可验证LAMP反应的准确性，又可以协助判断扩增系统的可信性。
(9)扩增产物应妥善处理，尽量避免开盖检测，开盖极易产生气溶胶污染。本公司的试剂均采用闭管检测，有效防止污染发生。展开
(2)操作多份样品时，应先配制反应混合液并分装，减少操作，避免污染，同时增加反应的精确度。试剂的配置和分装应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台操作。
(3)移液器和吸头需专用。由于移液器极易受气溶胶或模板核酸的污染，移液器应尽可能使用可替换或可高压处理的，吸头尽可能使用带滤芯的吸头。
(4)防止操作人员污染，使用一次性手套，EP管与吸头应一次性使用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染。
(5)加样或吸取模板核酸时要十分小心，吸样要缓慢，防止样品进入移液器内；吸样时尽量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或产生气溶胶污染。
(6)EP管打开应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部。开管动作要轻，以防管内液体溅出。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
(7)模板核酸应密封保存，防止外溢及外来核酸的进入。
(8)设立适当的阴阳性对照及重复实验，既可验证LAMP反应的准确性，又可以协助判断扩增系统的可信性。
(9)扩增产物应妥善处理，尽量避免开盖检测，开盖极易产生气溶胶污染。本公司的试剂均采用闭管检测，有效防止污染发生。展开
PCR技术在食品检测中的应用123
绿萝2015的春天2018-01-24
应用很广泛，因为比荧光定量PCR的操作简单方便，无需专业人员操作，仪器的性价比也比较高，挺受食品企业的追捧，食药系统也用的不少，现在技术越来越成熟，以后的应用会越来越广
环介导等温扩增技术(loopmediated isothermal amplification,LAMP)123
mylab2021-07-20
各位战友：
今天发现，我在核酸技术区开辟的“DIG/Biotin标记的Southern/Northern杂交专题讨论”4个月，今天回帖数破100，点击达1500多次。能和大家一起分享和交流，并且得到共同提高，心情很是愉快。
所以想借PCR技术区的宝地，新开辟“环介导等温扩增技术(Loop-MediatedIsothermalAmplification,LAMP)专题讨论”。我做LAMP一年多了，有些经验。而最近，和我谈起LAMP的朋友明显增多。所以在这方面大家有什么心得、体会、资料和实验困难，希望能一起交流讨论。谢谢支持！
今天发现，我在核酸技术区开辟的“DIG/Biotin标记的Southern/Northern杂交专题讨论”4个月，今天回帖数破100，点击达1500多次。能和大家一起分享和交流，并且得到共同提高，心情很是愉快。
所以想借PCR技术区的宝地，新开辟“环介导等温扩增技术(Loop-MediatedIsothermalAmplification,LAMP)专题讨论”。我做LAMP一年多了，有些经验。而最近，和我谈起LAMP的朋友明显增多。所以在这方面大家有什么心得、体会、资料和实验困难，希望能一起交流讨论。谢谢支持！
【求助】关于最近滚环扩增遇到的障碍 PCR技术讨论版论坛123
sd200502922021-07-29
各位大侠好！我最近在做滚环扩增的时候遇到问题了，来和大家讨论一下，希望各路高手不吝赐教！
我做的是用锁式探针来检测dna模板的ram，探针80base，其中杂交区40base，引物分别为16、18base，连接酶选取的T4 ligase和Taq DNA ligase两种，分别对应恒温和变温情况下的扩增。水解体系为EXO I和Exo Ⅲ的混合体系，参考的外文文献，应该没什么问题。聚合酶用的是Bst DNA大片段聚合酶。
一开始选择的探针浓度为200pmol/L，扩增效果挺好，当时用的DNA模板是质粒阳性标准品，但是后来在做敏感性的时候发现条带梯度差异几乎没有，而且阴性也出带，后来就没法做敏感性和特异性验证了，实验停滞了2个月一直也没进展。
按理说RAM借助锁式探针扩增的独特方式以及水解体系的存在可以有效防止污染才对，希望大家给点建议该如何解决。
万分感谢！！！！！！！！！！
附一张以前做敏感性的图（marker为2000的DNA ladder）以做参考
我做的是用锁式探针来检测dna模板的ram，探针80base，其中杂交区40base，引物分别为16、18base，连接酶选取的T4 ligase和Taq DNA ligase两种，分别对应恒温和变温情况下的扩增。水解体系为EXO I和Exo Ⅲ的混合体系，参考的外文文献，应该没什么问题。聚合酶用的是Bst DNA大片段聚合酶。
一开始选择的探针浓度为200pmol/L，扩增效果挺好，当时用的DNA模板是质粒阳性标准品，但是后来在做敏感性的时候发现条带梯度差异几乎没有，而且阴性也出带，后来就没法做敏感性和特异性验证了，实验停滞了2个月一直也没进展。
按理说RAM借助锁式探针扩增的独特方式以及水解体系的存在可以有效防止污染才对，希望大家给点建议该如何解决。
万分感谢！！！！！！！！！！
附一张以前做敏感性的图（marker为2000的DNA ladder）以做参考
LAMP(环介导等温扩增)技术 实验方法 123
cxbyunong2021-07-24
欢迎讨论环介导的恒温扩增法（LAMP）
【求助】梯度PCR有条带,恒温扩增无条带 核酸基因技术论坛123
yangjunfly2010-09-09
恒温核酸扩增学术百科知网空间123
冰洁20112012-09-24
LAMP(环媒介导恒温扩增法),LAMP (Loopmediated isothermal ...123
momanqian2021-07-26
目前，我在研究有关LAMP的技术，但做了十几次都没有作出来，国外做的多数是用环介导的扩增试剂盒做的，而我们国内买不到相关的试剂，只能是自己配。不知是我配制的试剂不准，还是方法不对，总之是做不出来。有那位大侠做过这个技术的，希望能给我指点，或者我们交流一下。我qq号码为：86339603
交叉引物恒温扩增技术(CPA)研究进展123
zheng_ran2021-07-21
交叉引物恒温扩增技术
核酸扩增是核酸分子诊断的关键技术。根据核酸扩增反应中温度变化要求，可以将核酸扩增技术分为两大类：一类是PCR核酸扩增技术，另一类是核酸恒温扩增技术。
PCR技术是指通过控制温度的变化来实现DNA扩增的三个步骤：模板变性（如95℃）－引物杂交（如58℃）－DNA合成（如72℃）。这种温度变化的循环重复（如重复35次）过程通常由精密而复杂的仪器（PCR仪）来控制。核酸恒温扩增技术（NucleicAcidIsothermalAmplification，NAIA）则是扩增反应的全过程均在同一温度下进行，不须象PCR反应那样需要经历几十个温度变化的循环过程。这一特点使得它们对扩增所需仪器的要求大大简化，反应时间大大缩短，因而具有巨大的应用价值，成为分子诊断行业发展中的热点。
目前的NAIA技术主要有滚环扩增技术（RollingCircleAmplification，RCA）、转录酶扩增技术(TranscriptionMediatedAmplification，TMA)、依赖核酸序列扩增技术(NucleicAcidSequenceBasedAmplification，NASBA)、链置换扩增技术(stranddisplacementamplification，SDA)、环介导的等温扩增技术（Loop-MediatedIsothermalAmplification，LAMP）、解链酶扩增技术（HelicaseDependentAmplification，HDA）。上述各种核酸扩增技术均由国外公司所拥有。
交叉引物扩增技术（CrossingPrimingAmplification，CPA）是完全由优思达公司独立研发成功的一种新的核酸恒温扩增技术，也是中国首个具有自主知识产权的核酸扩增技术。CPA与优思达公司其他技术相结合(如快速核酸提取技术、核酸试纸条检测技术等)，形成一个完整的现场快速分子检测平台，可以开发出众多恒温扩增检测试剂盒，广泛应用于分子诊断、防疫检疫、生物医学研究、个体化治疗等领域。该技术已申请中国和美国发明专利，在美国《MolecularDiagnostics》等杂志发表论文二篇，并通过了比尔?盖茨基金会资助申请。
CPA扩增体系中除包含具有链置换功能的BstDNA聚合酶外，还主要包括扩增引物和两条交叉引物。这些寡聚核苷酸链能依靠BstDNA聚合酶的高活性的链置换特性，使DNA的循环扩增能不断的实现。CPA扩增主要包含以下几个步骤：
交叉正向引物CPF中的PFs与模板DNA中PFa互补，启动DNA合成，使得PRa被引入到所扩增的产物中;
外围引物DP1s与PFa前端DP1a序列互补，通过链置换型DNA聚合酶向前延伸，一边置换CPF合成的能与CPR和DP2a结合的单链产物（结构3），一边与模板DNA形成双链产物（结构2）;
在结构3中，DP2a通过链置换型DNA聚合酶向前延伸，置换出由CPR所延伸的单链产物（结构5），同时合成与步骤2中由CPF延伸所产生单链DNA形成双链产物（结构4）,而结构5相对起始的DNA模板，多了PRs和PFs两个片段序列;
单链结构5中的3’端的PFa和PRs可分别与CPF中的PFs和CPR中的PRa互补结合，可在链置换型DNA聚合酶的作用下延伸和置换出相应的单链产物。延伸产物相对结构5来说又增加了一个PFs区域（结构8）;
因此，扩增引物CPF和CPR的不断杂交和延伸，不仅使得结构5的长度不断的加长,从而引入更多CPF和CPR3’端互补区域，同时也置换出了各种可与CPF和CPR3’端互补的单链产物;
通过CPF和CPR的不断杂交延伸和DNA聚合酶的链置换作用，使得DNA拷贝数不断的增加，从而达到基因扩增的效果。
使用本装置提取临床生物样品的核酸成本低廉，只需几分钟，可以应用于现场检测或实验资源较少的基层医院和经济不发达地区；同时也可以满足大医院特定情况下的需求，如急诊或床边的核酸快速诊断。该技术已申请发明专利，并取得盖茨基金会研发资助。
CPA基本原理如下：
图2CPA扩增的反应原理图
与目前广泛使用的荧光PCR技术相比较，CPA技术有以下几个优点：
反应速度快：反应时间约1小时，使试剂盒可用于检验检疫、突发性传染病的检测与监控现场检测或医院的床边诊断（Point-of-Testing,POCT）；
检测成本低：目前荧光光定量PCR仪价格昂贵，无法在很多中小医院普及。CPA扩增只需要离心机和一台简单的恒温装置，如普通的水浴锅、金属浴，即可进行扩增。
操作简单：对操作人员的技能要求不高，绝大多数人通过简单培训或自学都可掌握，为核酸检测试剂的广泛应用创造了条件。
核酸扩增是核酸分子诊断的关键技术。根据核酸扩增反应中温度变化要求，可以将核酸扩增技术分为两大类：一类是PCR核酸扩增技术，另一类是核酸恒温扩增技术。
PCR技术是指通过控制温度的变化来实现DNA扩增的三个步骤：模板变性（如95℃）－引物杂交（如58℃）－DNA合成（如72℃）。这种温度变化的循环重复（如重复35次）过程通常由精密而复杂的仪器（PCR仪）来控制。核酸恒温扩增技术（NucleicAcidIsothermalAmplification，NAIA）则是扩增反应的全过程均在同一温度下进行，不须象PCR反应那样需要经历几十个温度变化的循环过程。这一特点使得它们对扩增所需仪器的要求大大简化，反应时间大大缩短，因而具有巨大的应用价值，成为分子诊断行业发展中的热点。
目前的NAIA技术主要有滚环扩增技术（RollingCircleAmplification，RCA）、转录酶扩增技术(TranscriptionMediatedAmplification，TMA)、依赖核酸序列扩增技术(NucleicAcidSequenceBasedAmplification，NASBA)、链置换扩增技术(stranddisplacementamplification，SDA)、环介导的等温扩增技术（Loop-MediatedIsothermalAmplification，LAMP）、解链酶扩增技术（HelicaseDependentAmplification，HDA）。上述各种核酸扩增技术均由国外公司所拥有。
交叉引物扩增技术（CrossingPrimingAmplification，CPA）是完全由优思达公司独立研发成功的一种新的核酸恒温扩增技术，也是中国首个具有自主知识产权的核酸扩增技术。CPA与优思达公司其他技术相结合(如快速核酸提取技术、核酸试纸条检测技术等)，形成一个完整的现场快速分子检测平台，可以开发出众多恒温扩增检测试剂盒，广泛应用于分子诊断、防疫检疫、生物医学研究、个体化治疗等领域。该技术已申请中国和美国发明专利，在美国《MolecularDiagnostics》等杂志发表论文二篇，并通过了比尔?盖茨基金会资助申请。
CPA扩增体系中除包含具有链置换功能的BstDNA聚合酶外，还主要包括扩增引物和两条交叉引物。这些寡聚核苷酸链能依靠BstDNA聚合酶的高活性的链置换特性，使DNA的循环扩增能不断的实现。CPA扩增主要包含以下几个步骤：
交叉正向引物CPF中的PFs与模板DNA中PFa互补，启动DNA合成，使得PRa被引入到所扩增的产物中;
外围引物DP1s与PFa前端DP1a序列互补，通过链置换型DNA聚合酶向前延伸，一边置换CPF合成的能与CPR和DP2a结合的单链产物（结构3），一边与模板DNA形成双链产物（结构2）;
在结构3中，DP2a通过链置换型DNA聚合酶向前延伸，置换出由CPR所延伸的单链产物（结构5），同时合成与步骤2中由CPF延伸所产生单链DNA形成双链产物（结构4）,而结构5相对起始的DNA模板，多了PRs和PFs两个片段序列;
单链结构5中的3’端的PFa和PRs可分别与CPF中的PFs和CPR中的PRa互补结合，可在链置换型DNA聚合酶的作用下延伸和置换出相应的单链产物。延伸产物相对结构5来说又增加了一个PFs区域（结构8）;
因此，扩增引物CPF和CPR的不断杂交和延伸，不仅使得结构5的长度不断的加长,从而引入更多CPF和CPR3’端互补区域，同时也置换出了各种可与CPF和CPR3’端互补的单链产物;
通过CPF和CPR的不断杂交延伸和DNA聚合酶的链置换作用，使得DNA拷贝数不断的增加，从而达到基因扩增的效果。
使用本装置提取临床生物样品的核酸成本低廉，只需几分钟，可以应用于现场检测或实验资源较少的基层医院和经济不发达地区；同时也可以满足大医院特定情况下的需求，如急诊或床边的核酸快速诊断。该技术已申请发明专利，并取得盖茨基金会研发资助。
CPA基本原理如下：
图2CPA扩增的反应原理图
与目前广泛使用的荧光PCR技术相比较，CPA技术有以下几个优点：
反应速度快：反应时间约1小时，使试剂盒可用于检验检疫、突发性传染病的检测与监控现场检测或医院的床边诊断（Point-of-Testing,POCT）；
检测成本低：目前荧光光定量PCR仪价格昂贵，无法在很多中小医院普及。CPA扩增只需要离心机和一台简单的恒温装置，如普通的水浴锅、金属浴，即可进行扩增。
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