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biopioneerinc/96 well Genomic DNA miniprep kit - Animal Tissue, 5 x 96 well plates/1/GDMIP-96-1
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4000-520-616
BP-10 96-Well Plate Genomic DNA Isolation Kit (For Animal)
Kit Contents:
Components | GDMIP-96-1,5-plates | GDMIP-96-2,10-plates |
ACLSolution PBSSolution AB Solution ProteinaseK WashSolution ElutionBuffer BP-10 96-WellPlate Deep WellCollection Plate 96-well storageplate Sealingfilm Protocol | 200 ml 200 ml 200 ml 200 mg 4x48 ml 50 ml 5 10 5 25 1 | 2x200 ml 2x200 ml 2x200 ml 400 mg 8x48ml 100 ml 10 20 10 50 1 |
- ACL Solution may form a precipitate upon storage. If necessary,dissolve the precipitate by warming the solution at 37ºC.
- Before use, add 2ml of sterilized water to the tube containing 40 mg ofproteinase K, keep at -20 oC for long term.
- Before use, add 200 ml of 100% ethanol to 50ml Wash Solution.
- Elution Buffer is 2.0 mM Tris-HCl pH 8.0~8.5. Although TE buffer pH 8.0or water can be used, yield is generally 10% lower.
Storage: With the exception of theProteinase K, the kit may be stored at room temperature. The proteinase Kshould be stored at 4ºC for short term. The kit is stable for 18 months at roomtemperature. For longer storage, keep all contents cold.
Note: Thepurification method is based on centrifugation. There is a minimum heightrequirement of 75mm for apparatus to hold the assembly -- filter plate and deepwell plate.
Principle:
This kit is designed for fast isolation of genomicDNA from animal tissues. The kit contains a membrane embedded in BP-10 96-WellPlate for binding genomic DNA each well. Nucleotides, proteins, salts, andother impurities do not bind to the Column. Purified genomic DNA can be appliedin most molecular biology experiments including restriction digestion, PCR,Southern-blotting etc.
Applications:
Genomic DNA purificationfrom different animal tissues.
Features:
- Preparation of high quality genomic DNA from variable sources.
- Rapid and economical.
- High yields
- No phenol / chloroform extraction , no ethanol precipitation
Procedure for Isolation of Genomic DNA from Variable Sources.
For Animal Tissue
- Cut up to 30 mg tissue and place in Deep Well Collection Plate.
- Add 300 ul of ACL Solution (Animal Cell Lysis Solution) to Deep WellCollection Plate and 20ul proteinase K, then seal.
- Incubate at 55oC until the tissue is completely lysed (usually 1-3 hours). Occasionallyvortex. Incubation in shaking water bath can reduce lysis time.
- Cool to room temperature. Vortex for 20 seconds and Centrifuge 8,000rpmfor 5 minutes.
- Pipette 300ul of supernatant into a BP-10 96-Well Plate (if pellet notvisible, repeat previous step) and add 300ul of AB Solution, Seal, Mix by occasionallyinverting Plate, and keep for 2 minutes.
- Place a 96-Well Plate on thetop of a fresh Deep Well Collection Plate. Centrifuge at 6,000 rpm for 5 minutes witha rotor for microtiter plates.
- Discard flow-through. Add500 ul Wash Solution to each well of 96-Well Plate and spin at 6,000 rpm for 5minutes. Discard flow-through and place BP-10 96-Well Plate back to the sameDeep Well Collection Plate.
- Add 500 ul Wash Solution toeach well of the BP-10 96-Well Plate, spin at 6,000 rpm for 5 minutes. Discardflow-through and spin once more for 5 minutes to remove residue of WashSolution.
- Transfer the BP-10 96-WellPlate to a 96-well storage plate. Add 30-50 ul Elution Buffer to the BP-1096-well plate; incubate at 50 oC for 2minutes. Centrifuge at 6,000 rpm for 5 minutes.
- Measure DNA quantity by UV absorption at A260 (1.0 OD unit isequivalent of 50 ug). Assess genomic DNA quality by an analytical 0.7% agarosegel. Isolated genomic DNA should not contain RNA. Its length should be over 50kb.
For Rodent Tail
- Place Deep Well Collection Plate in dry ice.
- Cut 0.5cm to 1cm from end of tails and place in Deep Well CollectionPlate.
- Add 300 ul of ACL Solution (Animal Cell Lysis Solution) to Deep WellCollection Plate and 20ul proteinase K, then seal.
- Incubate at 55 oC overnight with rocking or for several hours with occasional mildvortexing every 15 minutes.
- Cool to room temperature. Vortex20 seconds and Centrifuge 8,000rpm for 5 minutes.
- Pipette 300ul of supernatant into an BP-10 96-Well Plate (if pellet notvisible, repeat previous step) and add 300ul AB Solution, Seal. Mix byoccasionally inverting Plate,and keep for 2 minutes.
- Add 500 ul Wash Solution toeach well of the BP-10 96-Well Plate, spin at 6,000 rpm for 5 minutes. Discardflow-through.
- Repeat washing step 7
- Discard flow- through and spinonce more for 5 minutes to remove residue of Wash Solution.
- Transfer the BP-10 96-WellPlate to a 96-well storage plate. Add 30-50 ul Elution Buffer to the BP-1096-well plate; incubate at 50 oC for 2minutes. Centrifuge at 6,000 rpm for 5 minutes.
- Genomic
For Cultured Animal Cell (NEW!)
- Centrifuge the appropriate number of cells(>5x106) for 5minutes at 2,000rpm.
- Resuspend pellet in 500 ul of PBS Solution.
- Wash the cells 2 times with PBS.
- Resuspend pellet in 300ul of ACL solution buffer.
- Add 20ul of proteinase K.
- Incubate at 55oC for 10 minutes.
- Cool to room temperature.Vortex for 20 seconds and Centrifuge 8,000rpmfor 5 minutes.
- Pipette 200ul of supernatant into an BP-10 96-Well Plate (if pellet notvisible, repeat previous step) and add 200ul AB Solution. Mix by occasionallyinverting Plate, and keep for 2 minutes.
- Centrifuge 6,000rpm for 5 minutes and discard theflow-through.
- Add 500 ul of Wash Solution, and spin at 6,000 rpm for 5 minutes.
- Repeat washing step 10
- Discard flow- through and spin once more for 5 minutes to removeresidue of Wash Solution.
- Transfer the BP-10 96-WellPlate to a 96-well storage plate. Add 30-50 ul Elution Buffer to the BP-1096-well plate; incubate at 50 oC for 2minutes. Centrifuge at 6,000 rpm for 5 minutes.
- Genomic
- Measure DNA quantity by UV absorption at A260 (1.0 OD unit isequivalent of 50 ug). Assess genomic DNA quality by an analytical 0.7% agarosegel. Isolated genomic DNA should not contain RNA. Its length should be over 50kb.
FromParaffin Tissue
- Excise 25~30mgparaffin tissue with a clean, sharp scalpel.And transfer to a DeepWell Collection Plate.
- Add 1.2ml xylene (self-prepared by user) to Deep Well Collection Plate, Seal, and thenvortex for 3minutes.Xylene is used to remove paraffin.
- Centrifuge at 12,000rpm for 5 minute at room temperature.
- Remove the supernatant completely. Keep the pellet.
- Add 1.2ml 100% of ethanol to Deep Well Collection Plate, Seal, Gently vortex for 1min. Incubate at room temperature for 1 minute.
- Centrifuge at 8,000rpm for 5 minute at room temperature. Discard supernatantcompletely.
- Repeat washing steponce from step4 to 6.
- Incubateat 37 oC for10-15 minutes to remove residual ethanol.
- Resuspend the sample in 200ul TE buffer, and continue immediately with Step10.
- Add 300 ul of ACL Solution(Animal Cell Lysis Solution) to Deep Well Collection Plate and add 20ulproteinase K, then seal it.
- Incubate at 55oC until the tissue is completely lysed (usually1-3 hours). Occasionally vortex.
- Cool to room temperature.Vortex for 20 seconds and Centrifuge 12000rpm for 5 minutes.
- Pipette 300ul of supernatantinto an BP-10 96-Well Plate (if pellet not visible, repeat previous step) andadd 300ul of AB Solution, Seal. Mix by occasionally inverting Plate, andkeep for 2 minutes.
- Centrifuge 6000rpm for 2 minutes and discard theflow-through.
- Add 500 ul of Wash Solution,and spin at 6,000 rpm for 5 minutes.
- Repeat washing step 15.
- Discard flow-through. Spinat 6,000 rpm for 5 minutes to remove residual amount of Wash Solution.
- Place the BP-10 96-WellPlate to 96-well storage plate. Add 30-50 ul Elution Buffer into the BP-10 96-WellPlate. Incubate the tube at 37 or 50 oC for 2minutes. Incubate at 37 or 50 oC couldincrease recovery yield.
- Spin at 8,000 rpm for 5minutes to elute
- Measure
Biopioneer Brand:
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
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2021-08-30
聚合酶链式反应简称PCR（Polymerase Chain Reaction） (又称：多聚酶链式反应) PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核... 查看更多
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2017-11-22
全系列采用6枚定制美国Marlow半导体制冷片，*变温速率大于6度每秒，循环次数大于100万次。该产品融合多种*技术于一体：WINCE操作系统，彩色全触控屏幕，六温区独立控制技术，电脑联机功能，打印功能，超大数据存储量及扩展功能等；都将定性PCR产品的功能完善到极致，强大的功能将满足更高要求的实验所需。GET96-PLUS 智能6路基因扩增仪特点：1). 6个温度循环器专用长寿命Peltier模块，可独立控制6个温区；2). 阳极氧化 查看更多
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2021-07-17
货号：PKT0051K 查看更多
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2021-07-20
北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司在发布的 美国ABI 9700型PCR扩增仪 单槽（96孔）供应信息，浏览与 美国ABI 9700型PCR扩增仪 单槽（96孔）相关的产品或在搜索更多与 美国ABI 9700型PCR扩增仪 单槽（96孔）相关的内容。 查看更多
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2021-09-10
杭州柏恒科技有限公司在发布的0.5ml大体系智能梯度基因扩增仪供应信息，浏览与0.5ml大体系智能梯度基因扩增仪相关的产品或在搜索更多与0.5ml大体系智能梯度基因扩增仪相关的内容。 查看更多
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2021-07-15
医流商城提供ABI 9700基因扩增仪 报价、参数、图片、特点、咨询等有效信息,100%正品保证,是您网上购买ABI 9700基因扩增仪 的放心平台 查看更多
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默瑞生物创立以来,已经陆续导入TwistDx,enzymatics,KAPA BIOSYSTEMS,BioDynami,Jackson,Echelon,ChromoTek,Nanocs,Biotechrabbit,Lee Biosolutions, magtivio等优质国际品... 查看更多
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2021-08-17
细胞是构成生命体的结构和功能的基本单位，不同类型的细胞形态迥异，功能也各不相同。即使是同类细胞间看似相同，相互间也存在着广泛的细胞异质性。传统的群体细胞分析检测能更快速方便的获得大量数据并利于进行有效的统计学分析，但是随着研究的深入，这种基于群体细胞分析所获得的平均性数据，往往忽略了细胞个体间的差异，在很大程度上掩盖了不少稀有、微量样本的作用以及在生命体内广泛存在的随机行为，这些“平均”结果带来的数据缺失，甚至是与事实相反的错误结果，都 查看更多
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2021-08-19
金思德生物销售的ABI 9700型PCR仪是为PCR核酸扩增技术所设计的自动化仪器，它具有ABI公司（原PE公司） 9600型PCR仪的性能和2400型PCR仪的操作界面，用户界面包括全数字式键盘，软触摸按键 查看更多
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2021-09-02
QuantStudio™ 12K Flex Real-Time PCR Systeml-Time PCR System 品牌: Life Technologies 产地: 美国 样本: 【暂无】 信息完整度: 典型用户: 0 分享:... 查看更多
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2018-03-24
郑州博邦科贸有限公司在发布的MGL96G基因扩增仪\郑州PCR仪\河南PCR仪\PCR仪价格\PCR仪厂家供应信息，浏览与MGL96G基因扩增仪\郑州PCR仪\河南PCR仪\PCR仪价格\PCR仪厂家相关的产品或在搜索更多与MGL96G基因扩增仪\郑州PCR仪\河南PCR仪\PCR仪价格\PCR仪厂家相关的内容。 查看更多
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2021-08-22
在塑料配混中，改善合成树脂与无机填充剂或增强材料的界面性能的一种塑料添加剂。又称表面改性剂。它在塑料加工过程中可降低合成树脂熔体的粘度，改善填充剂的分散度以提高加工性能，进而使制品获得良好的表面质量及机械、热和电性能。其用量一般为填充剂用量的0.5～2%。偶联剂一般由两部... 查看更多
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环介导等温扩增技术的临床应用进展123
火烈鸟20172021-07-28
请问一下，目前环介导等温扩增技术在临床上的应用怎么样？
恒温扩增 LAMP的特异性问题 00问答网123
jinzxcvbn2018-01-24
话说LAMP特异性强，LAMP使用4对引物与靶序列上的6个特定区域结合，即使一个碱基的差异，LAMP也能够区分相应的靶序列进行扩增，因此，比普通PCR具有更好的特异性。
这里所说的一个碱基的差异该怎么检测？如何理解？
这里所说的一个碱基的差异该怎么检测？如何理解？
LAMP(环媒介导恒温扩增法),LAMP (Loopmediated isothermal ...123
momanqian2021-07-26
目前，我在研究有关LAMP的技术，但做了十几次都没有作出来，国外做的多数是用环介导的扩增试剂盒做的，而我们国内买不到相关的试剂，只能是自己配。不知是我配制的试剂不准，还是方法不对，总之是做不出来。有那位大侠做过这个技术的，希望能给我指点，或者我们交流一下。我qq号码为：86339603
【原创】一种新的RNA恒温扩增技术SAT技术_问答123
rdbio2010-08-03
技术原理
同一温度下，首先通过M-MLV反转录酶产生靶标核酸（RNA）的一个双链DNA拷贝，然后利用T7RNA多聚酶从该DNA拷贝上产生多个（100～1000个）RNA拷贝；每一个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增循环；还可以加入荧光探针（分子信标），带有荧光标记的探针和这些RNA拷贝特异结合，产生荧光。该荧光信号可由实时荧光PCR仪实时捕获，直观反映扩增循环情况。
SAT检测技术的优势
→先进的恒温扩增技术
核酸扩增在一个温度下进行（42℃），无需热循环。
→领先的RNA检测技术
SAT技术直接以病原体特异性RNA为扩增靶标，以扩增产物RNA为检测靶标，在实际应用中更显优势意义。
→更高的检测灵敏度和准确性
SAT技术的扩增效率极高，15～30分钟即可将模板扩增109倍，检测灵敏度和准确性远高于其他核酸检测技术。扩增时间短，效率高。
→有效减少假阴性结果
SAT技术采用M-MLV逆转录酶和T7RNA多聚酶进行核酸扩增，相对于其它核酸扩增技术，反应抑制物更少，有效减少假阴性结果。
→有效的解决了扩增产物的污染问题
由于扩增产物为RNA，环境中极易降解，从而大幅度提高检测结果的可靠性。
→大大降低了核酸扩增实验室的要求
同一温度下，首先通过M-MLV反转录酶产生靶标核酸（RNA）的一个双链DNA拷贝，然后利用T7RNA多聚酶从该DNA拷贝上产生多个（100～1000个）RNA拷贝；每一个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增循环；还可以加入荧光探针（分子信标），带有荧光标记的探针和这些RNA拷贝特异结合，产生荧光。该荧光信号可由实时荧光PCR仪实时捕获，直观反映扩增循环情况。
SAT检测技术的优势
→先进的恒温扩增技术
核酸扩增在一个温度下进行（42℃），无需热循环。
→领先的RNA检测技术
SAT技术直接以病原体特异性RNA为扩增靶标，以扩增产物RNA为检测靶标，在实际应用中更显优势意义。
→更高的检测灵敏度和准确性
SAT技术的扩增效率极高，15～30分钟即可将模板扩增109倍，检测灵敏度和准确性远高于其他核酸检测技术。扩增时间短，效率高。
→有效减少假阴性结果
SAT技术采用M-MLV逆转录酶和T7RNA多聚酶进行核酸扩增，相对于其它核酸扩增技术，反应抑制物更少，有效减少假阴性结果。
→有效的解决了扩增产物的污染问题
由于扩增产物为RNA，环境中极易降解，从而大幅度提高检测结果的可靠性。
→大大降低了核酸扩增实验室的要求
恒温扩增RPA实验中如何避免污染123
xiaohe199004252018-01-24
(1)严格分区操作，样品提取区、配液区、扩增区、检测区应相互独立，各区耗材及移液器应专用，实验前先用紫外线消毒以破坏残留的核酸。
(2)操作多份样品时，应先配制反应混合液并分装，减少操作，避免污染，同时增加反应的精确度。试剂的配置和分装应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台操作。
(3)移液器和吸头需专用。由于移液器极易受气溶胶或模板核酸的污染，移液器应尽可能使用可替换或可高压处理的，吸头尽可能使用带滤芯的吸头。
(4)防止操作人员污染，使用一次性手套，EP管与吸头应一次性使用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染。
(5)加样或吸取模板核酸时要十分小心，吸样要缓慢，防止样品进入移液器内；吸样时尽量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或产生气溶胶污染。
(6)EP管打开应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部。开管动作要轻，以防管内液体溅出。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
(7)模板核酸应密封保存，防止外溢及外来核酸的进入。
(8)设立适当的阴阳性对照及重复实验，既可验证LAMP反应的准确性，又可以协助判断扩增系统的可信性。
(9)扩增产物应妥善处理，尽量避免开盖检测，开盖极易产生气溶胶污染。本公司的试剂均采用闭管检测，有效防止污染发生。展开
(2)操作多份样品时，应先配制反应混合液并分装，减少操作，避免污染，同时增加反应的精确度。试剂的配置和分装应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台操作。
(3)移液器和吸头需专用。由于移液器极易受气溶胶或模板核酸的污染，移液器应尽可能使用可替换或可高压处理的，吸头尽可能使用带滤芯的吸头。
(4)防止操作人员污染，使用一次性手套，EP管与吸头应一次性使用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染。
(5)加样或吸取模板核酸时要十分小心，吸样要缓慢，防止样品进入移液器内；吸样时尽量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或产生气溶胶污染。
(6)EP管打开应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部。开管动作要轻，以防管内液体溅出。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
(7)模板核酸应密封保存，防止外溢及外来核酸的进入。
(8)设立适当的阴阳性对照及重复实验，既可验证LAMP反应的准确性，又可以协助判断扩增系统的可信性。
(9)扩增产物应妥善处理，尽量避免开盖检测，开盖极易产生气溶胶污染。本公司的试剂均采用闭管检测，有效防止污染发生。展开
交叉引物恒温扩增技术（CPA）研究进展_爱学术123
qiqishichaoren2021-07-25
实验三PCR扩增制备目的基因123
南昌中洪博元小梅2016-05-09
1．目的
学会PCR操作的基本技术。
2．原理
是将待扩增的DNA模板加热变性，与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性，然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环，n次循环后DNA可被扩增（1+X）n倍。其中<25nt的引物退火温度Tm=2（A+T）+4（G+C）。
3．器材
旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，0.2mlPCR微量管，双面微量离心管架，PCR仪，台式离心机，琼脂糖凝胶电泳系统，水漂，恒温水浴。
4．试剂
5U/μlTaqDNA聚合酶，PCR缓冲液（10×，MgCl2free），25mMMgCl2，dNTP，引物，模板质粒pBS-CHI，无菌ddH2O。
5．实验准备
dNTP混合液（每种25mM），TAE电泳缓冲液，荧光染料，10´加样缓冲液，1.5ml离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌）。合成的引物：Senseprimer5＇-GGATCCACAATGATGAGAGCC-３＇
Antisenseprimer５＇-GATATCATGGTGAGGTAGCTAGCTT-３＇
目的基因模板质粒：已经克隆在pBS载体上的1128bp几丁质酶（chitinase，CHI）基因。
待扩增的CHI片段长度：996bp。
6．操作步骤
（1）在0.2mlPCR微量离心管中配制50μl反应体系。（以下加样量供参考，括号内是最终需要量，实验时需参照Taq酶说明书计算）
ddH2O32μl
10×PCRbuffer（不含MgCl2）5μl
25mMMgCl23μl
2.5mmol/LdNTP4μl（每种dNTP终浓度0.2mM）
10μmol/LPrimer12μl（12.5~25pmoles）
10μmol/Lprimer22μl（12.5~25pmoles）
模板质粒1μl（1×10-3pmoles）
5U/μlTaq酶1μl（5U）
总体积50μl
（2）根据厂商的操作手册设置PCR仪的循环程序：
①94℃5min
②94℃1min
③54℃1min
④72℃1min50s
⑤goto②29times
⑥72℃10min
（3）PCR结束后，取10μl产物进行琼脂糖凝胶电泳。观察胶上是否有预计的主要产物带。
（4）清理桌面，撰写实验报告。
（5）PCR产物可以直接与T载体连接（见实验五），然后转化感受态细胞（见实验八）。
7．思考
（1）复性温度如何确定？
（2）为什么要在最后延伸10min？
（3）是否有非特异性扩增产物（或引物二聚体），如何才能消除？
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PCR技术在食品检测中的应用123
绿萝2015的春天2018-01-24
应用很广泛，因为比荧光定量PCR的操作简单方便，无需专业人员操作，仪器的性价比也比较高，挺受食品企业的追捧，食药系统也用的不少，现在技术越来越成熟，以后的应用会越来越广
病毒基因组DNA/RNA快速提取试剂盒(离心柱型 )_上海超研生物科技...123
2018-01-24
恒温PCR一种新式恒温核酸扩增方法，其原理是采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶，反应全过程恒定63℃，不到1h的时间里进行核酸的指数级扩增，其扩增效率可达到109个～ 1010个拷贝数量级。在扩增反应中产生茎-环结构，保证引物与其杂交启动新一轮核酸合成。配合恒温荧光检测设备可实时监测扩增情况。该扩增法具有简单、快速、准确、易检测、适用面广等优点。迪澳转基因快速检测箱，配置了高通量恒温荧光检测仪DEAOU-308C、转基因快速检测试剂、植物基因组核酸提取试剂及必备的实验耗材。为客户提供了精确高效、功能全面、经济实用的转基因检测手段。
谁有Genie II 等温扩增荧光检测仪使用经验?123
百知投票2018-01-24
比较简易的装置，可携带。但是通量小
分子生物学实验报告123
louise36532021-07-23
恒温扩增可取代变温PCR?技术优劣势看这里!123
bitianxuan2018-01-24
就是原跟过程不一样,结果都一样的吧?不懂啊
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