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eylabs/Colloidal Gold Conjugated Sophora japonica (Pagoda Tree) -SJA-, 1mL 10nm/Colloidal Gold Conjugated Sophora japonica (Pagoda Tree) -SJA-, 1mL/GP-2901-10_蚂蚁淘,【正品极速】生物医学科研用品轻松购|ebiomall 蚂蚁淘商城
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eylabs
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Product Description

Colloidal Gold Conjugated Sophora japonica (Pagoda Tree) -SJA-, available in 5-40nm particle sizes (please select above). Additional sizes available upon request, surcharges will apply.

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The motor defects of Parkinson"s disease are related to the loss of dopaminergic neurons in specific brain regions. Examination of these neurons in diseased ti 查看更多>
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技术原理
同一温度下,首先通过M-MLV反转录酶产生靶标核酸(RNA)的一个双链DNA拷贝,然后利用T7RNA多聚酶从该DNA拷贝上产生多个(100~1000个)RNA拷贝;每一个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增循环;还可以加入荧光探针(分子信标),带有荧光标记的探针和这些RNA拷贝特异结合,产生荧光。该荧光信号可由实时荧光PCR仪实时捕获,直观反映扩增循环情况。

SAT检测技术的优势
→先进的恒温扩增技术
核酸扩增在一个温度下进行(42℃),无需热循环。
→领先的RNA检测技术
SAT技术直接以病原体特异性RNA为扩增靶标,以扩增产物RNA为检测靶标,在实际应用中更显优势意义。
→更高的检测灵敏度和准确性
SAT技术的扩增效率极高,15~30分钟即可将模板扩增109倍,检测灵敏度和准确性远高于其他核酸检测技术。扩增时间短,效率高。
→有效减少假阴性结果
SAT技术采用M-MLV逆转录酶和T7RNA多聚酶进行核酸扩增,相对于其它核酸扩增技术,反应抑制物更少,有效减少假阴性结果。
→有效的解决了扩增产物的污染问题
由于扩增产物为RNA,环境中极易降解,从而大幅度提高检测结果的可靠性。
→大大降低了核酸扩增实验室的要求
实验三PCR扩增制备目的基因123
南昌中洪博元小梅2016-05-09

1.目的
学会PCR操作的基本技术。

2.原理
是将待扩增的DNA模板加热变性,与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性,然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环,n次循环后DNA可被扩增(1+X)n倍。其中<25nt的引物退火温度Tm=2(A+T)+4(G+C)。

3.器材
旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,0.2mlPCR微量管,双面微量离心管架,PCR仪,台式离心机琼脂糖凝胶电泳系统,水漂,恒温水浴。

4.试剂
5U/μlTaqDNA聚合酶,PCR缓冲液(10×,MgCl2free),25mMMgCl2,dNTP,引物,模板质粒pBS-CHI,无菌ddH2O。

5.实验准备
dNTP混合液(每种25mM),TAE电泳缓冲液荧光染料,10´加样缓冲液,1.5ml离心管装入铝制饭盒(灭菌)、移液器吸头装入相应的吸头盒(灭菌)。合成的引物:Senseprimer5'-GGATCCACAATGATGAGAGCC-3'
Antisenseprimer5'-GATATCATGGTGAGGTAGCTAGCTT-3'

目的基因模板质粒:已经克隆在pBS载体上的1128bp几丁质酶(chitinase,CHI)基因。
待扩增的CHI片段长度:996bp。

6.操作步骤
(1)在0.2mlPCR微量离心管中配制50μl反应体系。(以下加样量供参考,括号内是最终需要量,实验时需参照Taq酶说明书计算)
ddH2O32μl
10×PCRbuffer(不含MgCl2)5μl
25mMMgCl23μl
2.5mmol/LdNTP4μl(每种dNTP终浓度0.2mM)
10μmol/LPrimer12μl(12.5~25pmoles)
10μmol/Lprimer22μl(12.5~25pmoles)
模板质粒1μl(1×10-3pmoles)
5U/μlTaq酶1μl(5U)
总体积50μl

(2)根据厂商的操作手册设置PCR仪的循环程序:
①94℃5min
②94℃1min
③54℃1min
④72℃1min50s
⑤goto②29times
⑥72℃10min
(3)PCR结束后,取10μl产物进行琼脂糖凝胶电泳。观察胶上是否有预计的主要产物带。
(4)清理桌面,撰写实验报告。
(5)PCR产物可以直接与T载体连接(见实验五),然后转化感受态细胞(见实验八)。

7.思考
(1)复性温度如何确定?
(2)为什么要在最后延伸10min?
(3)是否有非特异性扩增产物(或引物二聚体),如何才能消除?

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各位大侠好!我最近在做滚环扩增的时候遇到问题了,来和大家讨论一下,希望各路高手不吝赐教!
我做的是用锁式探针来检测dna模板的ram,探针80base,其中杂交区40base,引物分别为16、18base,连接酶选取的T4 ligase和Taq DNA ligase两种,分别对应恒温和变温情况下的扩增。水解体系为EXO I和Exo Ⅲ的混合体系,参考的外文文献,应该没什么问题。聚合酶用的是Bst DNA大片段聚合酶。
一开始选择的探针浓度为200pmol/L,扩增效果挺好,当时用的DNA模板是质粒阳性标准品,但是后来在做敏感性的时候发现条带梯度差异几乎没有,而且阴性也出带,后来就没法做敏感性和特异性验证了,实验停滞了2个月一直也没进展。
按理说RAM借助锁式探针扩增的独特方式以及水解体系的存在可以有效防止污染才对,希望大家给点建议该如何解决。
万分感谢!!!!!!!!!!
附一张以前做敏感性的图(marker为2000的DNA ladder)以做参考

需要根据不同的样品来源,和相关的致病菌检测国家标准进行检测,也就是说对不同的样品其检测方法是不同的。一般情况下,需要先进行增菌,因为致病菌的含量往往很低,直接检测很可能检测不出,增菌过后再使用不同的培养基划线接种,分离出致病菌后进行生化鉴定,或者使用一些更先进的方法,比如PCR、质谱等等。恒温扩增法也有企业在用,但是新推出的技术,使用度比荧光定量PCR的要少一些
目前,我在研究有关LAMP的技术,但做了十几次都没有作出来,国外做的多数是用环介导的扩增试剂盒做的,而我们国内买不到相关的试剂,只能是自己配。不知是我配制的试剂不准,还是方法不对,总之是做不出来。有那位大侠做过这个技术的,希望能给我指点,或者我们交流一下。我qq号码为:86339603
基因扩增技术(PCR)聚合酶链反应(polymerase chain reaction简称PCR)又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分子的分析
PCR技术在食品检测中的应用123
绿萝2015的春天2018-01-24
应用很广泛,因为比荧光定量PCR的操作简单方便,无需专业人员操作,仪器的性价比也比较高,挺受食品企业的追捧,食药系统也用的不少,现在技术越来越成熟,以后的应用会越来越广
恒温PCR一种新式恒温核酸扩增方法,其原理是采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶,反应全过程恒定63℃,不到1h的时间里进行核酸的指数级扩增,其扩增效率可达到109个~ 1010个拷贝数量级。在扩增反应中产生茎-环结构,保证引物与其杂交启动新一轮核酸合成。配合恒温荧光检测设备可实时监测扩增情况。该扩增法具有简单、快速、准确、易检测、适用面广等优点。迪澳转基因快速检测箱,配置了高通量恒温荧光检测仪DEAOU-308C、转基因快速检测试剂、植物基因组核酸提取试剂及必备的实验耗材。为客户提供了精确高效、功能全面、经济实用的转基因检测手段。
各位战友:

今天发现,我在核酸技术区开辟的“DIG/Biotin标记的Southern/Northern杂交专题讨论”4个月,今天回帖数破100,点击达1500多次。能和大家一起分享和交流,并且得到共同提高,心情很是愉快。

所以想借PCR技术区的宝地,新开辟“环介导等温扩增技术(Loop-MediatedIsothermalAmplification,LAMP)专题讨论”。我做LAMP一年多了,有些经验。而最近,和我谈起LAMP的朋友明显增多。所以在这方面大家有什么心得、体会、资料和实验困难,希望能一起交流讨论。谢谢支持!
主要是该方法使用了Bst酶,双链的DNA有一个特性,就是在65度时双链之间的结合较为松散,称之为动态平衡状态,所以不需要预变性使双链解开,而Bst酶在65度时的活性是最高的,这样LAMP反应就能正常进行了
大家好,现在做LAMP结果颠倒了,阴性对照会出现LAMPladder条带,而加了基因组DNA的反而扩增不出来,有没有人遇见这种情况?最后如何解决了呢?
(1)严格分区操作,样品提取区、配液区、扩增区、检测区应相互独立,各区耗材及移液器应专用,实验前先用紫外线消毒以破坏残留的核酸。
(2)操作多份样品时,应先配制反应混合液并分装,减少操作,避免污染,同时增加反应的精确度。试剂的配置和分装应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台操作。
(3)移液器和吸头需专用。由于移液器极易受气溶胶或模板核酸的污染,移液器应尽可能使用可替换或可高压处理的,吸头尽可能使用带滤芯的吸头。
(4)防止操作人员污染,使用一次性手套,EP管与吸头应一次性使用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染。
(5)加样或吸取模板核酸时要十分小心,吸样要缓慢,防止样品进入移液器内;吸样时尽量一次性完成,忌多次抽吸,以免交叉污染或产生气溶胶污染。
(6)EP管打开应先离心,将管壁及管盖上的液体甩至管底部。开管动作要轻,以防管内液体溅出。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
(7)模板核酸应密封保存,防止外溢及外来核酸的进入。
(8)设立适当的阴阳性对照及重复实验,既可验证LAMP反应的准确性,又可以协助判断扩增系统的可信性。
(9)扩增产物应妥善处理,尽量避免开盖检测,开盖极易产生气溶胶污染。本公司的试剂均采用闭管检测,有效防止污染发生。展开
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