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biospec/Lever Tissue Press/1/317
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biospec
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317
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Lever Tissue Press

The Lever Tissue Press is a top-of-the-line stainless steel garlic press improved in performance by the addition of a silicone-rubber gasket on the lever press piston.The press efficiently macerates or mechanically disaggregates 5 to 50 grams of fresh, soft plant or animal tissue. By 'soft' we mean nonfibrous tissue. Acceptible examples are muscle, brain, liver, plant fruits, some plant roots and tubers. An extra "can" is included to facilitate processing of multiple samples.

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The Lever Tissue Press prepares tissue as an initial mincing step preceeding mechanical homogenization (cell disruption) or preceeding single cells isolation from solid tissue by digestion of  extracellular connective matrix with proteolytic enzyme. The press eliminates tedious chopping of tissue into little pieces with a scissors or scalpel and produces much smaller tissue pieces.  Unlike many other tissue dispersion/blending devices, no buffer is added in its operation.

Special App!  Disaggregation of tissue for primary culture. - Incubation time needed for enzymatic tissue disaggregation is reduced and during the incubation period with the digestive enzymes, diffusion of nutrients and gases into the tissue mass are optimized.  Expect higher yields of viable cells.  For an excellent review of the Method of Enzymatic Disaggregation see http://www.worthington-biochem.com/tissuedissociation/default.html) .

Tissue processed in this press must be "soft", relatively non-fibrous and have high water content.  Acceptible examples are muscle, brain, liver, plant fruits, and some plant roots and tubers.  If the tissue is fatty or partially fibrous, manually trim off the tough or fatty parts before pressing.  Fibrous tissue will interfere with the passage of the soft tissue through the press and lower the yield of dispersed cell material.  Unacceptible tissues are skin, hide, connective tissue, woody or fibrous plant stems, many mature seeds and all dried tissues.

Operating Instructions:

1)  Retract the piston of the Lever Tissue Press from its stainless steel "can".  Add 1 to 10 g of fresh tissue into the cavity of the "can" and insert the piston back into position.

2)  Gripping the two levers, force the piston down the can.  Scrape the dispersed tissue protruding from the bottom of the can with a knife or scapel.  Depending on the amount of connective or fibrous tissue present in the sample, the yield of dispersed tissue will vary from 20-95%.

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有人知道交叉引物核酸恒温扩增(CPA)的扩增原理吗?希望高手不吝赐教,最好是图文并茂的那种,谢谢了先!
PCR技术在食品检测中的应用123
绿萝2015的春天2018-01-24
应用很广泛,因为比荧光定量PCR的操作简单方便,无需专业人员操作,仪器的性价比也比较高,挺受食品企业的追捧,食药系统也用的不少,现在技术越来越成熟,以后的应用会越来越广
分子生物学实验报告123
louise36532021-07-23
前天我做pXJ41-p21质粒扩增,所用的新霉素终浓度是60μg/ml。但经过培养过夜后,昨天下午都未出现菌落,不知是不是新霉素浓度过高?还是感受态细菌的问题?刚开始摸索,未设空白对照。请教各位高手,是何原因?
以下是质粒质粒扩增步骤:
1.取400μlLB液先置于37℃水浴30分钟
2.100μlJM109(存于-80℃)于冰上解冻
3.解冻后加入50ngDNA质粒(对照只加感受态细胞)冰浴30分钟(计时)
4.42℃水浴90秒
5.冰浴2分钟
6.加入400μlLB液
7.37℃恒温摇床200rpm摇匀1小时
8.取200μl平均分布(旋转平皿)于培养基上,倒扣培养皿37℃过夜
目前,我在研究有关LAMP的技术,但做了十几次都没有作出来,国外做的多数是用环介导的扩增试剂盒做的,而我们国内买不到相关的试剂,只能是自己配。不知是我配制的试剂不准,还是方法不对,总之是做不出来。有那位大侠做过这个技术的,希望能给我指点,或者我们交流一下。我qq号码为:86339603
扩增一个鸭的基因,PCR仪Bio-Rad的mycycler系列,通过升级后可以做梯度(8个温度梯度)PCR。
近期老是出问题,梯度(47~53℃)扩增时共6个温度有较明亮的条带,确定恒温再次扩增,却无任何产物。
请教大家了,着急的很!
话说LAMP特异性强,LAMP使用4对引物与靶序列上的6个特定区域结合,即使一个碱基的差异,LAMP也能够区分相应的靶序列进行扩增,因此,比普通PCR具有更好的特异性。
这里所说的一个碱基的差异该怎么检测?如何理解?
(1)严格分区操作,样品提取区、配液区、扩增区、检测区应相互独立,各区耗材及移液器应专用,实验前先用紫外线消毒以破坏残留的核酸。
(2)操作多份样品时,应先配制反应混合液并分装,减少操作,避免污染,同时增加反应的精确度。试剂的配置和分装应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台操作。
(3)移液器和吸头需专用。由于移液器极易受气溶胶或模板核酸的污染,移液器应尽可能使用可替换或可高压处理的,吸头尽可能使用带滤芯的吸头。
(4)防止操作人员污染,使用一次性手套,EP管与吸头应一次性使用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染。
(5)加样或吸取模板核酸时要十分小心,吸样要缓慢,防止样品进入移液器内;吸样时尽量一次性完成,忌多次抽吸,以免交叉污染或产生气溶胶污染。
(6)EP管打开应先离心,将管壁及管盖上的液体甩至管底部。开管动作要轻,以防管内液体溅出。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
(7)模板核酸应密封保存,防止外溢及外来核酸的进入。
(8)设立适当的阴阳性对照及重复实验,既可验证LAMP反应的准确性,又可以协助判断扩增系统的可信性。
(9)扩增产物应妥善处理,尽量避免开盖检测,开盖极易产生气溶胶污染。本公司的试剂均采用闭管检测,有效防止污染发生。展开
实验三PCR扩增制备目的基因123
南昌中洪博元小梅2016-05-09

1.目的
学会PCR操作的基本技术。

2.原理
是将待扩增的DNA模板加热变性,与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性,然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环,n次循环后DNA可被扩增(1+X)n倍。其中<25nt的引物退火温度Tm=2(A+T)+4(G+C)。

3.器材
旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,0.2mlPCR微量管,双面微量离心管架,PCR仪,台式离心机琼脂糖凝胶电泳系统,水漂,恒温水浴。

4.试剂
5U/μlTaqDNA聚合酶,PCR缓冲液(10×,MgCl2free),25mMMgCl2,dNTP,引物,模板质粒pBS-CHI,无菌ddH2O。

5.实验准备
dNTP混合液(每种25mM),TAE电泳缓冲液荧光染料,10´加样缓冲液,1.5ml离心管装入铝制饭盒(灭菌)、移液器吸头装入相应的吸头盒(灭菌)。合成的引物:Senseprimer5'-GGATCCACAATGATGAGAGCC-3'
Antisenseprimer5'-GATATCATGGTGAGGTAGCTAGCTT-3'

目的基因模板质粒:已经克隆在pBS载体上的1128bp几丁质酶(chitinase,CHI)基因。
待扩增的CHI片段长度:996bp。

6.操作步骤
(1)在0.2mlPCR微量离心管中配制50μl反应体系。(以下加样量供参考,括号内是最终需要量,实验时需参照Taq酶说明书计算)
ddH2O32μl
10×PCRbuffer(不含MgCl2)5μl
25mMMgCl23μl
2.5mmol/LdNTP4μl(每种dNTP终浓度0.2mM)
10μmol/LPrimer12μl(12.5~25pmoles)
10μmol/Lprimer22μl(12.5~25pmoles)
模板质粒1μl(1×10-3pmoles)
5U/μlTaq酶1μl(5U)
总体积50μl

(2)根据厂商的操作手册设置PCR仪的循环程序:
①94℃5min
②94℃1min
③54℃1min
④72℃1min50s
⑤goto②29times
⑥72℃10min
(3)PCR结束后,取10μl产物进行琼脂糖凝胶电泳。观察胶上是否有预计的主要产物带。
(4)清理桌面,撰写实验报告。
(5)PCR产物可以直接与T载体连接(见实验五),然后转化感受态细胞(见实验八)。

7.思考
(1)复性温度如何确定?
(2)为什么要在最后延伸10min?
(3)是否有非特异性扩增产物(或引物二聚体),如何才能消除?

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请问一下,目前环介导等温扩增技术在临床上的应用怎么样?
主要是该方法使用了Bst酶,双链的DNA有一个特性,就是在65度时双链之间的结合较为松散,称之为动态平衡状态,所以不需要预变性使双链解开,而Bst酶在65度时的活性是最高的,这样LAMP反应就能正常进行了
大家好,现在做LAMP结果颠倒了,阴性对照会出现LAMPladder条带,而加了基因组DNA的反而扩增不出来,有没有人遇见这种情况?最后如何解决了呢?
食品药品监管总局办公厅关于恒温核酸扩增检测仪等22个产品分类界定的通知食药监办械管〔2015〕75号2015年06月11日发布各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局:
  为适应医疗器械监督管理工作的需要,总局组织有关单位和专家对恒温核酸扩增检测仪等22个产品的管理类别进行了界定。现通知如下:
  一、作为Ⅲ类医疗器械管理的产品(1个)
  恒温核酸扩增检测仪:由检测系统、加热模块、温控系统、触摸屏和随机软件组成。基于荧光检测的恒温核酸扩增检测技术,定性检测样本中的目标核酸有无扩增。分类编码:6840。
  
  二、作为Ⅱ类医疗器械管理的产品(7个)
  (一)免疫磁微粒捕获仪:由蠕动泵、管路、永磁铁及其他必要辅助器具组成。用于磁微粒免疫分析中捕获磁微粒复合物,是临床免疫磁微粒检验分析的前处理设备。分类编码:6841。
  (二)精液采集器:由精液收集套、润滑剂、精液采集管、采集漏斗、袖珍剪组成。产品以无菌型式提供。临床上用于收集成年男性精液,为评价男性生育能力提供完整标本。分类编码:6841。
  (三)干式血细胞微量样品测试管:由测试管体、封管器、浮子、肝素钠抗凝剂和荧光吖啶橙染料组成。用于收集末梢血样和静脉血样,临床上与干式血细胞计数仪配合使用,对样本染色、抗凝和分类。分类编码:6841。
  (四)胎盘生长因子检测试剂盒(时间分辨荧光法):由校准品、铕标示踪抗体、分析缓冲液、生物素抗体、链霉亲和素微孔板条、条形码标签等组成。用于定量测定孕妇血清中的胎盘生长因子。临床上用于辅助筛查妊娠妇女孕早期唐氏综合症风险。分类编码:6840。
  (五)脂联素检测试剂盒(免疫比浊法):由试剂1(缓冲液)和试剂2(乳胶抗体试剂)组成。用于体外定量检测人血清或血浆中脂联素浓度。临床上用于评估2型糖尿病和心血管疾病的风险。分类编码:6840。
  (六)小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒(直接清除法):由试剂(含过氧化氢酶、胆固醇氧化酶、胆固醇脂酶、显色剂的缓冲液)和试剂(含过氧化物酶、酶稳定剂、显色剂的缓冲液)组成。用于体外定量检测人血清中小而密低密度脂蛋白胆固醇的含量,临床上用于动脉粥样硬化的辅助诊断。分类编码:6840。
  (七)尿液游离LamBDa-轻链测定试剂盒(免疫比浊法):由定标液、试剂缓冲液和试剂(游离Lambda-轻链抗血清)组成。用于体外定量测定尿液游离Lambda-轻链浓度,临床上用于单克隆丙种球蛋白增多症的辅助诊断。分类编码:6840。
  三、作为第Ⅰ类医疗器械管理的产品(13个)
  (一)制片染色一体机:通常由离心模块、制片模块、染色模块、控制系统等功能模块组成。用于病理分析前对人体细胞或细菌样本进行制片及染色。分类编码:6841。
  (二)细胞分离制片染色一体机:通常由控制系统、过滤器、多路阀注射泵、贮液瓶、废液瓶等组成。适用于病理分析前对人体外周血或组织样本中细胞的分离、过滤、制片和染色。分类编码:6841。
  (三)试剂卡孵育器:由塑料外壳、温控模块、电器元件组成。用于特定试剂卡的孵育。分类编码:6840。
  (四)细胞过滤采集器:由软管、过滤收集病变细胞装置、抽吸装置组成。用于病理分析前对人体内脱落病变细胞的采集。分类编码:6841。
  (五)液基细胞和微生物处理、保存试剂:主要由细胞保存液、细胞裂解液、提取液、稀释液、消化酶、防腐剂等及必要的细胞承载或制片器具组成。用于临床检验分析前细胞或微生物的保存、运输、提取、分离、沉淀、固定、制片等。分类编码:6840。
  (六)病理分析前处理试剂:主要由组织固定液、组织脱水液、透明液、清洗剂等组成。用于病理分析前组织标本的固定、梯度脱水、透明、浸蜡和包埋制片。分类编码:6840。
  (七)脱蜡液:由脱蜡液、防腐液、专用水等组成。用于对样本进行染色前预处理,去除石蜡包埋组织样本上的石蜡。分类编码:6840。
  (八)触发缓冲液:由0.9%的氯化钠等渗溶液组成。与血小板功能分析仪及配套检测试剂盒配套使用,用于在检测前润湿生化活性膜。分类编码:6840。
  (九)流式细胞分析用鞘液:由含盐缓冲液和防腐剂组成。用于与流式技术相关的分析中对样本进行检测时形成鞘流,以利于仪器进行计数分析。分类编码:6840。
  (十)流式细胞分析用溶血剂:由浓度小于2%的甲醛和浓度小于15%的甘油组成。用于快速裂解人类外周血中红细胞,维持白细胞基本形态,临床上用于流式细胞仪检测前样本处理。分类编码:6840。
  (十一)抗体稀释液:由缓冲液和防腐剂组成。用于临床检验时抗血清的稀释。分类编码:6840。
  (十二)溶痰剂:由次氯酸钠、表面活性剂组成。用于抗酸染色前痰标本的均质化处理,以提高阳性检出率。分类编码:6840。
  (十三)精液液化剂:由菠萝蛋白酶和蔗糖组成。用于精液检查前促进液化迟缓的精液标本的液化、降低精液的粘稠度。分类编码:6840。
  四、不按照医疗器械管理的产品(1个)
  瓷珠菌种保存管:由表面多孔的小瓷珠、胰蛋白脉大豆肉汤、甘油和蔗糖按一定比例混合组成。用于微生物检验中菌种的保存。
  自本文件发布之日起,对于不作为医疗器械管理的,如已受理尚未完成注册审批的,食品药品监管部门应按规定不予注册,相关注册申请资料予以存档。尚在有效期内的医疗器械注册证书不得继续使用。
                            食品药品监管总局办公厅
                             2015年6月11日