(Man)x-GlcNAc2
mannose oligosaccharides with two D-GlcNAc residues
We omit the configurational symbol, the letter denoting ring size, and the locant of the anomeric carbons in the product names below.
All of the monosaccharide units on this page are pyranose rings of the D-form with the anomeric carbon at C1.
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| TRI-019 Manβ-4GlcNAcβ-4GlcNAc | Request Price |
| TET-032 Manα1-3Manβ-4GlcNAcβ-4GlcNAc | Request Price |
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| HEX-027 Manα-6Manα-6[Manα-3]Manβ-4GlcNAcβ-4GlcNAc | Request Price |
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原理?(没有就算了...)
答的好的提高悬赏50分
有原理的追加50分
谢谢啊~~~~
1.目的
学会PCR操作的基本技术。
2.原理
是将待扩增的DNA模板加热变性,与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性,然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环,n次循环后DNA可被扩增(1+X)n倍。其中<25nt的引物退火温度Tm=2(A+T)+4(G+C)。
3.器材
旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,0.2mlPCR微量管,双面微量离心管架,PCR仪,台式离心机,琼脂糖凝胶电泳系统,水漂,恒温水浴。
4.试剂
5U/μlTaqDNA聚合酶,PCR缓冲液(10×,MgCl2free),25mMMgCl2,dNTP,引物,模板质粒pBS-CHI,无菌ddH2O。
5.实验准备
dNTP混合液(每种25mM),TAE电泳缓冲液,荧光染料,10´加样缓冲液,1.5ml离心管装入铝制饭盒(灭菌)、移液器吸头装入相应的吸头盒(灭菌)。合成的引物:Senseprimer5'-GGATCCACAATGATGAGAGCC-3'
Antisenseprimer5'-GATATCATGGTGAGGTAGCTAGCTT-3'
目的基因模板质粒:已经克隆在pBS载体上的1128bp几丁质酶(chitinase,CHI)基因。
待扩增的CHI片段长度:996bp。
6.操作步骤
(1)在0.2mlPCR微量离心管中配制50μl反应体系。(以下加样量供参考,括号内是最终需要量,实验时需参照Taq酶说明书计算)
ddH2O32μl
10×PCRbuffer(不含MgCl2)5μl
25mMMgCl23μl
2.5mmol/LdNTP4μl(每种dNTP终浓度0.2mM)
10μmol/LPrimer12μl(12.5~25pmoles)
10μmol/Lprimer22μl(12.5~25pmoles)
模板质粒1μl(1×10-3pmoles)
5U/μlTaq酶1μl(5U)
总体积50μl
(2)根据厂商的操作手册设置PCR仪的循环程序:
①94℃5min
②94℃1min
③54℃1min
④72℃1min50s
⑤goto②29times
⑥72℃10min
(3)PCR结束后,取10μl产物进行琼脂糖凝胶电泳。观察胶上是否有预计的主要产物带。
(4)清理桌面,撰写实验报告。
(5)PCR产物可以直接与T载体连接(见实验五),然后转化感受态细胞(见实验八)。
7.思考
(1)复性温度如何确定?
(2)为什么要在最后延伸10min?
(3)是否有非特异性扩增产物(或引物二聚体),如何才能消除?
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今天发现,我在核酸技术区开辟的“DIG/Biotin标记的Southern/Northern杂交专题讨论”4个月,今天回帖数破100,点击达1500多次。能和大家一起分享和交流,并且得到共同提高,心情很是愉快。
所以想借PCR技术区的宝地,新开辟“环介导等温扩增技术(Loop-MediatedIsothermalAmplification,LAMP)专题讨论”。我做LAMP一年多了,有些经验。而最近,和我谈起LAMP的朋友明显增多。所以在这方面大家有什么心得、体会、资料和实验困难,希望能一起交流讨论。谢谢支持!
我做的是用锁式探针来检测dna模板的ram,探针80base,其中杂交区40base,引物分别为16、18base,连接酶选取的T4 ligase和Taq DNA ligase两种,分别对应恒温和变温情况下的扩增。水解体系为EXO I和Exo Ⅲ的混合体系,参考的外文文献,应该没什么问题。聚合酶用的是Bst DNA大片段聚合酶。
一开始选择的探针浓度为200pmol/L,扩增效果挺好,当时用的DNA模板是质粒阳性标准品,但是后来在做敏感性的时候发现条带梯度差异几乎没有,而且阴性也出带,后来就没法做敏感性和特异性验证了,实验停滞了2个月一直也没进展。
按理说RAM借助锁式探针扩增的独特方式以及水解体系的存在可以有效防止污染才对,希望大家给点建议该如何解决。
万分感谢!!!!!!!!!!
附一张以前做敏感性的图(marker为2000的DNA ladder)以做参考

