病毒学实验一鸡胚接种培养
| 实验方法原理 | 羊膜腔接种主要应用于从临床材料（如患者咳嗽液等）分离流感病毒等。这种接种途径可直接感染羊膜腔的内胚层，也可被鸡胚咽下或吸入，引起全胚胎感染。另外，病毒也可被排泄到尿囊腔中，使尿囊腔中含有大量病毒。因此，在用羊膜腔接种分离病毒时，除可收获羊水以外，还可收获尿囊液。 | ||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 鸡胚 试剂、试剂盒 | 消毒剂(2.5%碘酒和75%酒精） 仪器、耗材 | 检卵灯照明灯卵杯卵盘鸡胚开孔器等 实验步骤 | 1.接种步骤与方法 (1)将10~12日龄的鸡胚在检卵灯上照视，划出气室范围，并在胚胎最靠近卵壳的一侧做记号。 (2)用2.5%碘酒及75%的酒精分别消毒气室部位的蛋壳，并用开孔器在气室顶端钻出一约10mmX6mm的长方形裂痕，注意勿钻破壳膜。 (3)用2.5%碘酒再次消毒钻孔区后，用灭菌的眼科小镊子除去长方形卵壳和外层壳膜，并滴加灭菌液体石蜡一滴于下层壳膜上，使其透明，以便观察胚胎的位置。 (4)将注射器刺向胚胎的腭下胸前，以针头拨动下颚及腿，当进入羊膜腔内时，可看到鸡胚随针头的拨动而动，此时可注入0.1---0.2ml病毒液。 (5)拔出针头，孔区用2.5%碘酒消毒，然后用沾有碘酒通过火焰的小块胶布将卵壳的小窗口封住，并于33---35℃孵卵器内孵育48---72h比此过程要保持鸡胚的钝端朝上。 2.解剖与收获 (1)收获前鸡胚须置4℃冰箱6h或过夜，但不能放置时间过长（过长会引起散黄）。如急于收获亦可置-20℃冰箱1h左右。预冷的目的是，将鸡胚冻死，使血液凝固，避免收获时流出红细胞，并同尿囊液的病毒发生凝集，造成病毒滴度下降。 (Z)用2.5%碘酒和75%酒精分别消毒气室处的卵壳，并用灭菌剪刀剪去气室部的卵壳，此时勿使其碎片落于未损伤的壳膜上。用无菌毛细吸管吸取尿囊液，然后左手持小镊子夹起羊膜成伞状，右手用毛细吸管插入羊膜腔吸取羊水，平均每胚可收获0.5~1.0ml羊水。 (3)病毒通过胚胎机体后被排泄人尿囊腔，因此当羊水过少时，可用同胚少量尿囊液冲洗羊膜腔并吸取该洗液。
注意事项 | 1.防止污染。为了减少污染的危险，整个过程均需无菌操作，否则鸡胚一经污染，即迅速死亡或影响病毒的培养。 2.适宜的培养温度。接种过的鸡胚，应根据实验病原繁殖需要的温度，放入33-37°C温箱内培养。 其他 | |
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2021-08-30
阅读（134）
▍
相关分类
▍
相关文章
▍
相关问答
