Type:Protein
SpeciesReactivity:M
B=Bovine;Ca=Cat;Ch=Chicken;D=Dog;EQ=Equine;GP=GuineaPig;H=Human;M=Mouse;P=Porcine;Pr=Primate;R=Rat;Rb=Rabbit;Y=Yeast;Xe=Xenopus;Ze=Zebrafish;;;;NA-NotApplicable;STP=Step-TactinProteins;AllFGF-8isamemberofthefibroblastgrowthfactorfamilythatwasoriginallydiscoveredasanandrogen-inducedgrowthfactoressentialfortheandrogen-dependentgrowthofmousemammarycarcinomacells.ThemouseFGF-8primarytranscriptisalternativelysplicedtogenerateatleast8secretedisoformsthatdifferonlyattheiraminoterminis.TheFGF-8isoformsdifferentiallyactivatethevariousalternativelysplicedformsoffibroblastgrowthfactorreceptors1-3,andfibroblastgrowthfactorreceptor4.FGF-8bhasbeenshowntoactivatethe‘c’spliceformofFGFR2,FGFR3,andFGFR4.Duringmousedevelopment,expressionofFGF-8wasrestrictedtoembryonicdays9through13.ThepatternofFGF-8expressionduringmousedevelopmentsuggestsaroleforFGF-8inmultipleregionsofectodermaldifferentiationinthepost-gastrulationmouseembryo.Theseincludearoleinoutgrowthandpatterningoftheface,limbs,andcentralnervoussystemofthevertebrate.TheFGF-8locushasbeenmappedtomousechromosome19andhumanchromosome10.ThehumanFGF-8genehasrecentlybeenclonedandshowntoencodeonly4potentialisoforms.MouseandhumanFGF-8aandFGF-8bisoformsare100%identicalandFGF-8eandFGF-8fisoformsare98%identicalattheproteinsequencelevel.However,humanproteinscorrespondingtothemouseFGF-8c,d,gandhisoformsdonotexist(MacArthur,C.A.etal.,1995,Development121:3603-3613;Crossley,P.H.etal.,1996,Cell 84:127-136;Gemel,J.etal.,1996,Genomics35:253-257).
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自噬是一个吞噬自身细胞质蛋白或细胞器并使其包被进入囊泡，并与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物的过程，藉此实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新。
由结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis,Mtb）引起的结核病是一种古老的慢性传染病，并且至今仍是全球死亡人数最多的单一传染病。据世界卫生组织（WHO）报道：2015年全球有1040万新发结核病患者，有180万人死于结核病。Mtb是一种胞内病原菌，可分泌多种效应蛋白至宿主细胞中，进而干扰细胞信号通路和生物学功能，最终促进病原菌在宿主细胞中的存活并导致宿主细胞病变。中国科学院微生物研究所刘翠华课题组长期致力于研究Mtb等重要病原菌与宿主相互作用的分子机制，近年来先后在NatureImmunology,TheJournalofImmunology等杂志发表系列研究工作，发现了Mtb通过分泌一系列效应蛋白调控宿主细胞功能进而逃逸宿主固有免疫清除的新机制，并揭示了病原菌与宿主间相互博弈的动态过程及分子机制，为抗结核药物研发提供了新思路和特异靶点。
近年来，越来越多的研究表明病原微生物（包括多种病毒和细菌等）感染引起的慢性炎症可增加肿瘤发生发展的危险性，有关感染相关的慢性炎症诱发肿瘤的分子机制研究已成为当前生物医学领域的热点之一。然而，Mtb导致的慢性感染与肺癌的相关性至今尚无定论，关于Mtb效应蛋白在肿瘤发生发展中的分子调控机制更是知之甚少。刘翠华课题组之前的研究表明：Mtb效应蛋白PtpA（一种真核样酪氨酸磷酸酶）可被分泌至宿主细胞中结合泛素分子并被后者激活，进而去磷酸化宿主的p-JNK和p-p38并抑制JNK/p38信号通路的激活；同时PtpA还能以磷酸酶活性非依赖性的方式抑制NF-κB信号通路的激活（NatureImmunology,2015）。进一步的研究发现PtpA的宿主互作蛋白TRIM27（一种泛素连接酶）可作为宿主限制因子抑制分枝杆菌在巨噬细胞内的存活，而PtpA则可通过结合TRIM27蛋白的RING结构域而拮抗TRIM27介导的抗病原菌感染免疫功能（ScientificReports,2016）。最近，该课题组又发现PtpA不仅可在宿主细胞质中调控固有免疫信号通路，还可进入宿主细胞核内（图1）。ChIP-seq分析结果提示：PtpA在宿主细胞核内可调控一系列宿主基因的表达，这些基因主要涉及免疫调控（如TNFRSF8）以及细胞增殖和迁移（如GADD45A）等生物学功能。进一步研究发现PtpA可直接结合至GADD45A基因的启动子区并抑制该基因的转录，并进而促进人非小细胞肺癌A549细胞的增殖和迁移能力及其在裸鼠中的成瘤能力，且该调控功能依赖于PtpA的DNA结合能力而不依赖于其磷酸酶活性。此外，受PtpA调控的宿主细胞核内的潜在靶基因中还包括某些与肿瘤发生发展密切相关的非编码RNA基因（如miR-488、CASC2和miR-622）（图2）。该研究发现了首个可进入宿主细胞核内调控宿主免疫及细胞增殖功能的Mtb效应蛋白PtpA，揭示了Mtb可通过其分泌的效应蛋白在特定情况下促进肺癌发生发展的分子机制。
相关结果已在国际权威期刊NatureCommunications《自然通讯》在线发表，题为“ThemycobacterialphosphatasePtpAregulatestheexpressionofhostgenesandpromotescellproliferation”。刘翠华课题组的助理研究员汪静、研究生葛浦浦为该文章的共同第一作者，刘翠华研究员为该文的通讯作者。该研究得到了国家科技部、国家自然科学基金委、北京市自然科学基金委和中科院的资助。
文章链接：http://www.nature.com/articles/s41467-017-00279-z.pdf
图1.MtbPtpA可进入宿主细胞核内
图2.宿主细胞核内的MtbPtpA抑制固有免疫功能并促进肿瘤细胞增殖的机制示意图
细胞分化，产生的是不同的细胞，例如造血干细胞可以分化出红细胞。
方式：真核生物的分裂依据过程不同有三种方式，有有丝分裂，无丝分裂，减数分裂。其中有丝分裂是人、动物、植物、真菌等一切真核生物中的一种最为普遍的分裂方式，是真核细胞增殖的主要方式。减数分裂是生殖细胞形成时的一种特殊的有丝分裂。向左转|向右转
首先，可以让学生设想细胞数目增加需要那些方面准备？过程会怎么样？这实际上是学生主体性的体现，有利于学生总体把握细胞增殖的变化规律。
然后，要让学生明白细胞内有好多变化，但我们的学习集中在染色体的变化规律来教学，重点一定要突出染色体这样的变化是为了遗传性状的稳定。复制、螺旋化、移到赤道面、着丝粒分裂、纺锤丝牵拉都是为了染色体结构和数目的稳定，这种动态变化完全可以设想出来，不需要去死记硬背。
最后，由于概念繁杂，一定要对概念进行辨析：染色体和染色质；纺锤体和纺锤丝；赤道面和细胞板。
细胞分裂间期分为G1期S期和G2期 G1期的特点：G1期是从上次细胞增殖周期完成以后开始的。G1期是一个生长期。在这一时期主要进行RNA和蛋白质的生物合成，并且为下阶段S期的DNA合成做准备。如合成各种与DNA复制有关的酶，线粒体、核糖体等都增多了
细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老或死亡的细胞；同时，多细胞生物可以由一个受精卵，经过细胞的分裂和分化，最终发育成一个新的多细胞个体。必须强调指出，通过细胞分裂，可以将复制的遗传物质，平均地分配到两个子细胞中去。可见，细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。
EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。向左转|向右转
本研究从新合成的十种核苷类似物中筛选具有抗肿瘤活性的化合物, 观察其抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用,并探讨可能的作用机制。
非整倍体无限细胞系和癌细胞株中，仍然存在不同细胞亚群，它们的功能和生长特点有些差异，其中有些亚群细胞对培养环境有较大的适应性和具有较强的独立生存能力，细胞集落率高。纯化细胞群来自一个共同的祖细胞，细胞遗传性状、生物学特性相似，利于实验研究。原代培养细胞和二倍体有限细胞系，细胞集落率很低。细胞集落化培养之前，应先测定细胞集落形成率，以了解细胞在极低密度条件下的生长能力。
目前认为仅有肿瘤干细胞具有形成集落的能力，集落抑制率常用于抗癌药物敏感试验、肿瘤放射生物学试验。
集落抑制率=（1-（实验组集落形成率/对照组集落形成率））×100%
（一）原理
细胞集落形成率 单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，称为集落或克隆。每个克隆含有50个以上的细胞，大小在0.3-1.0mm 之间。集落形成率表示细胞独立生存能力。常用方法有平板集落形成试验、软琼脂集落形成试验。
（二）实验用品
1.材料：Hela细胞。
2.器材：（直径 60mm ）培养皿、细胞记数板、烧杯、吸管、离心机、离心管、废液瓶、倒置显微镜、二氧化碳培养箱、超净工作台、水浴锅。
3.试剂：Giemsa染液、0.25%胰蛋白酶消化液、血清细胞培养液、安尔碘、琼脂。
（三）方法
1.平板克隆形成试验
本法适用于贴壁生长的细胞，包括培养的正常细胞和肿瘤细胞。
(1)对指数生长期细胞，采用常规消化传代方法，制成细胞悬液。
(2)细胞悬液反复吹打，使细胞充分分散，单个细胞百分率应在95%以上。细胞记数，并用培养基调节细胞浓度，待用。
(3)根据细胞增殖能力，将细胞悬液倍比稀释。一般按照每皿含50、100、200个细胞的浓度分别接种5ml细胞悬液到培养皿（直径 60mm ）中，以十字方向轻轻晃动培养皿，使细胞分散均匀。
(4)培养皿置 37℃ 、5%CO2中培养2~3周，中间根据培养液pH变化适时更换新鲜培养液。
(5)当培养皿中出现肉眼可见克隆时，终止培养，弃去培养液，PBS液小心浸洗2次，空气干燥。甲醇固定15分钟，弃甲醇后空气干燥。用Giemsa染液染色10分钟，流水缓慢洗去染液，空气干燥。
2.软琼脂集落形成试验
本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。利用琼脂液无粘着性又可凝固的特性，将肿瘤细胞混入琼脂液中，琼脂液凝固使肿瘤细胞置于一定位置，琼脂中肿瘤细胞可能向周围作全方位的移动，因此可以用来检测肿瘤细胞的主动移动能力。肿瘤细胞在适宜培养基中又可以增殖，从而可以测定肿瘤细胞克隆形成率。造血系统软琼脂集落形成试验方法相同，主要用于有关细胞分化的研究，但使用培养基不同。
（1）同上（1）~（3）步骤。
（2）调整细胞悬液密度为1×103个/ml细胞。
（3）制备底层琼脂，完全溶化的5%琼脂和 37℃ 左右预温的新鲜完全培养液以1：9比例在 40℃ 均匀混合，加入培养皿（直径 60mm ）中，每皿含0.5%琼脂培养基2ml，室温下琼脂完全凝固。
（4）制备上层琼脂,取 37℃ 不同密度梯度(按照每皿含50、100、200个)的细胞悬液1.5ml移入小烧杯中，加入 40℃ 、5%琼脂等体积混匀，即成0.25%半固体琼脂培养基。配好的半固体琼脂培养基立即加入铺有底层琼脂的培养皿中，室温下琼脂凝固。 37℃ 、5%CO2静置培养2-3周。
（四）实验结果
1.定期观察细胞培养过程中集落的形成。
2.显微镜下计数大于50个细胞克隆数，然后按下式计算集落形成率：
集落形成率（%）=（集落数/接种细胞数）×100
（五）注意事项
1.琼脂对热和酸不稳定，如果反复加热，容易降解，产生毒性，同时琼脂硬度下降。故琼脂高压灭菌( 10磅 15分钟)后按一次用量进行分装。
2.细胞悬液中，细胞分散度>95%。
3.软琼脂培养时，注意琼脂与细胞混合时温度不要超过 40℃ ，以免烫伤细胞。
4.接种细胞密度不宜过高。
5.细胞在低密度条件下培养，生存率明显下降，无限细胞系和肿瘤细胞株克隆形成率一般在10%以上。但初代培养细胞和有限细胞系仅为0.5~5%,甚至为零。为提高集落形成率，必要时在培养基中添加胰岛素、地塞米松等促细胞克隆形成物质。
