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Caltag/EZROLL Absorbent Bench Liner, 20x300, CS/1Rolls/Case/EZROLL-ABL
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Caltag/EZROLL Absorbent Bench Liner, 20x300, CS/1Rolls/Case/EZROLL-ABL
品牌 / 
Caltag
货号 / 
EZROLL-ABL
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ZenBio

EZROLL Absorbent Bench Liner, 20"x300", CS/1Rolls

Product Code:
EZROLL-ABL
Pack Size:
Case
Form:
LABWARE
Shipping Temp:
Ambient
Storage Temp:
Ambient
Product Type:
Equipment
Supplier:
ZenBio
Product Category:
Miscellaneous
    Product Code:
    EZROLL-ABL
    Price (Case):
    £173.00 excluding VAT

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    几种表达载体123
    Doctor-pxz2021-09-08

    各位大神,我现在用PET28α作为表达载体,在连接的时候是不是载体要进行双酶切、胶回收?我双酶切的目的片段和PET28α连接后,导入感受态中没有成功,不知道怎么回事,请教各位。

    在RNA干扰实验中
    首先需要构建dsRNA表达载体
    将这种载体导入受体细胞中后
    表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA
    引起具有相同序列的mRNA发生讲解
    导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质
    所以个体会表现出功能缺失表型

    构建表达载体通常选用dsRNA
    需要注意的一些方面是
    dsRNA序列中GC的含量要小于50%
    高GC含量会降低RNAi的效果
    选定的dsRNA序列应通过搜索数据库确保与其他基因无同源性
    以避免对其他同源性基因表达的抑制
    不同区域的dsRNA具有不同的基因沉默效果
    可同时构建两个以上针对同一基因不同靶区域的dsRNA表达载体
    还要充分考虑siRNA的结构特征
    siRNA与mRNA的同源程度对RNAi有明显影响
    启动子区或者编码区与siRNA同源的基因受siRNA抑制
    但siRNA在动物细胞中对mRNA的前体没有影响
    所以含非编码区序列的dsRNA不会引起RNAi
    而且在构建表达载体时
    经常使用U6启动子等RNA聚合酶Ⅲ能够识别的启动子序列
    最后将其转入到质粒中
    这里说的只是一个简单的过程
    总的来说构建表达载体是个比较复杂的过程
    如果要知道详细的技术
    建议还是去看书吧
    这里是说不清的
    目的基因启动子能启动报告基因
    启动子是RNA聚合酶能够识别并与之结合,从而起始基因转录的一段DNA序列,通常位于基因上游.一个典型的启 动子包括CAAT-box和TATA-box,它们分别依赖DNA的RNA聚合酶的识别和结合位点,一般位于转录起始位点上游几十个碱基处.在核心启动子上 游通常会有一些特殊的DNA序列,即顺式作用元件,转录因子与之结合从而激活或抑制基因的转录.一旦RNA聚合酶定位并结合在启动子上即可 启动基因转录,因此启动子是基因表达调控的重要元件,它与RNA聚合酶及其他蛋白辅助因子等反式作用因子的相互作用是启动子调控基因转录的实质.
    根据启动子的转录模式可将其分为3类:组成型启动子、组织或器官特异性启动子和诱导型启动子.
    近期刚接触有关黄色短杆菌(G+)的代谢途径修饰,根据相关文献及实验室已有资料,选择pk18mobsacB这一穿梭型的自杀载体进行敲除。
    目标基因全长1800bp,通过重叠延伸的方式获得的自杀敲除组件,左右同源序列均为500bp左右,构建自杀载体(确认载体没有问题),期望进行目标基因的失活处理,但将近1个月的时间,不见任何目的克隆,故在此请各位战友指点。
    采用电转的方式将自杀载体(约6700bp)导入黄色短杆菌,感受态的细胞制备采用相关文献方式,甘氨酸和吐温-30的方式进行摇菌并制备电转感受态,1800v电转(电压进行过梯度,1200、1500、1800、2200、2500。1800v效果相对较好,故选之),但电转效率仍是较低,复苏2h,浓缩涂板LBG+kan(kan浓度20ug/ml),平板克隆很少,几次都只有20个左右的克隆。
    1)克隆很少,原因可能跟菌株的电转效率有关,不知战友有没有谷氨酸棒杆菌或黄色短杆菌相关较好的电转经验,还请指教?
    2)抗性平板克隆很少,还可能和重组效率有关,但根据pk18mobsacB质粒的特性,既然能在抗性平板生长,理论上应该是已经进行了一次重组了,但结果是不管我用pk18载体本身的Kan序列引物还是最终诱导进行PCR验证,均未证实到一次重组的发生,更不要说获得敲除失活的目的菌株了。问题是这个带有抗性的克隆到底是携带了什么使其同样具有抗性(显微检验不是杂菌)?如何有效提高或促进自杀载体在宿主内的重组效率呢?或是更有效的准确的检测验证手段??
    3)利用自杀载体的方式进行黄色短杆菌(或谷氨酸棒杆菌)的基因敲除缺失比较不易,不知有没有正在做这方面相关研究的战友,希望能够多多交流和学习。。。
    不知道我的疑惑讲清楚了没有,若哪里不清楚还请指出,我再细说。。。期望xdjm们的帮助啊。。。先谢过了。。

    我想用pGL3-ControlVector质粒与某基因构建重组载体与MicroRNA共转染进行荧光素酶报告基因检测,这样可行吗?

    标记基因通常用来检验重组DNA载体转化成功与否,或者检测目的基因在植物细胞或组织中的定位。常用的标记基因是一些抗生素抗性基因,如卡那霉素抗性基因、潮霉素标记基因等。如:某种具有氨苄抗性基因质粒(该基因即可认为标记基因),与外源DNA片段组合形成重组质粒,并被转入受体细胞后,就可以根据受体细胞是否具有氨苄抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。当用选择培养基(比如含有氨苄的培养基),来培养受体细胞时,能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功的导入了外源DNA,标记基因就起作用了。作为报告基因,在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件:(1)已被克隆和全序列已测定;(2)表达产物在受体细胞中不存在,即无背景,在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;(3)其表达产物能进行定量测定。目前常用的报告基因有氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、荧光素酶基因(luc)、β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)、分泌型碱性磷酸酶基因(seap)、绿色荧光蛋白基因(gfp)等。如:绿色荧光蛋白(gfp)基因。绿色荧光蛋白来源于海洋生物水母,其基因可在异源组织中表达并产生光,GFPCdnad开放阅读框架长度约740bp,编码238个氨基酸残基,其肽链内部第65-67位丝氨酸-脱氢酪氨酸-甘氨酸通过自身环化和氧化形成一个发色基因,在长紫外波长或蓝光照射下发出绿色荧光。转染后的细胞可在荧光显微镜或流式细胞仪(FACS)中直接观察基因的表达。
    我有个质粒真核载体,需要RFP(红色荧光蛋白)序列作为报告基因,但是本人没有RFP的核酸片段。之前也从没看到别人谈论报告基因的来源,很多都是自己实验室已经有的载体去PCR得到。
    我也找公司了,却没有合成好的RFP片段,需要订购合成,但是RFP是常见报告基因啊,应该有现成的吧。
    第一次做载体,见笑了
    各位大神最好能提供有关公司名称
    谢谢啦

    各位好,最近构建慢病毒沉默载体,问题是提完质粒酶切验证是阳性,但是测序检测不到插进去的shRNA,已经重复连接转化多次,依旧没有得到阳性质粒,请大神帮忙分析下原因,感谢!!

    1 确定基因中同源性小的片段做干扰载体的目的片段,防止干扰到材料中含有的其他同源基因;
    2 确定干扰载体中可以用的2个酶切位点,
    3 设计2对带有不同酶切位点的引物,分别扩增正、反向片段,并检查序列是否正确没有突变;
    4 将正向片段连接到酶切过的干扰载体中,pcr鉴定;
    5 再将反向片段连上去,pcr鉴定。
    怎么抑制基因表达,本人高考过了,有一定生物基出,想问问
    表达载体构建正义和反义,一般用于基因功能的研究,正义为强势表达
    (forced expression)或过表达(overexpression),以观察基因表型,反义则是用来抑制基因表达,以观察在目的基因的表达受到抑制的情况下表型的变化
    目前想做发根农杆菌的转基因实验,目的基因已经转入pART27和PBI121载体中。请问:再用发根农杆菌ATCC15834转化的过程中,还需要特异的双元载体么?
    谢谢各位,邮箱250754675@qq.com
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