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abfrontier/Uracil DNA Glycosylase (UNG), heat-labile/Uracil DNA Glycosylase (UNG), heat-labile, 200 U (200 회)/4035
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제품특징
□ 제품 설명
Uracil DNA Glycosylase (UNG)는 우라실을 포함한 DNA의 deoxyribose sugar와 우라실 염기 사이의 N-glycosylic bond를 가수분해하여 탈필리미딘 부위를 만드는 역할을 한다. 본 효소는 우라실을 포함한 single strand DNA와 double strand DNA는 가수분해하지만, RNA에는 작용하지 않는다.
□ 형상
| 20 mM | Tris-HCl, pH 7.5 (at 25℃) |
| 50 mM | NaCl |
| 1 mM | DTT |
| 0.1% (v/v) | Triton X-100 |
| 50% (v/v) | Glycerol |
□ 기원
Produced in an E. coli ung- strain expressing a recombinant clone of Gadus morhua (cod) liver UNG
□ Specific activity
> 500,000 U/mg
□ 활성의 정의
우라실을 포함한 DNA를 기질로 70 mM Tris-HCl, pH7.5 (at 25℃), 10 mM NaCl, 1 mM EDTA, 100 μg/ml BSA를 포함한 반응액 중 37℃에서 1시간 동안 1 nmol의 우라실을 유리시키는 효소 활성을 1 U로 한다.
□ 순도
1.Endonuclease activity :
50 U의 본 효소와 1 μg의 pGEM DNA를 37℃ 2시간 반응시켜도, DNA의 전기 영동 패턴에 변화는 일어나지 않는다.
2.Exonuclease activity : 50 U의 본 효소와 3H-labelled DNA를 37℃으로 2시간 반응시켜도, 유리의 방사 활성에 의한
exonuclease 활성은검출되지 않는다.
□ 열실활 (Inactivation by heat)
본 효소는 50℃, 10 분간 열처리를 하면, 완전히 비가역적으로 실활된다.
□ 사용 예
[PCR carryover prevention 사용방법] 1. 아래와 같은 PCR 반응액을 조제한다.
TaKaRa Taq Hot Start Version (5 units/μl) | 0.25 μl |
10×PCR Buffer (Mg2+ plus) | 5 μl |
dU plus dNTP Mixture (Code 4035) | 4 μl |
25 mM MgCl2 | 1.5 μl |
UNG (2 U/μl) | 0.5 μl |
Primer 1 | 10~50 pmol |
Primer 2 | 10~50 pmol |
멸균 증류수 | up to 50 μl |
2. 25℃로 10분 반응한다.
3. 95℃로 2분 열실활 한다.
4. 계속해서 PCR 반응을 실시한다.사용 예의 상세한 내용에 대해서는 TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit(Code 6088)의 매뉴얼에서 확인할 수 있습니다. - 본 효소의 최적 사용량은 목적에 따라서 다르지만, 50 μl 반응시 통상 0.1~1 U를 사용한다. - 본 효소는 일반적인 PCR 및 RT-PCR의 반응액 중에서 작용한다.
□ 보존
- 20℃
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
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运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2018-07-15
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2018-07-15
产品名称： 人腺相关病毒载体（AAV）ELISA Kit（elisa试剂盒） 国内优质ELISA厂家 产品简介： 人腺相关病毒载体（AAV）ELISA Kit（elisa试剂盒） 国内优质ELISA厂家 ELISA试剂盒 国产现货 SIXIN生产的优质ELISA试剂盒直供全国。http://www.aatbio.com.cn/elisa/ 人腺相关病毒载体（AAV）ELISA Kit（elisa试剂盒） 国内优质ELISA厂家 进口试剂 查看更多
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2018-08-08
本章将会讨论昆虫来源的杆状病毒展示载体的设计及其潜在的用途。建立展示库的一般步骤和这些基因递送载体的特性也将会在本章中进行阐述。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」 查看更多
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广州市锐博生物科技有限公司在发布的基因3'UTR（质粒）载体构建服务供应信息，浏览与基因3'UTR（质粒）载体构建服务相关的产品或在搜索更多与基因3'UTR（质粒）载体构建服务相关的内容。 查看更多
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2021-07-21
上海北诺生物科技有限公司在发布的pBI101植物双元表达载体供应信息，浏览与pBI101植物双元表达载体相关的产品或在搜索更多与pBI101植物双元表达载体相关的内容。 查看更多
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2018-05-26
2018-01-08
上海宾智生物科技有限公司在发布的AKR-517 pCMV-GFP-Grin1 Expression Vector pCMV-GFP-GRIN1表达载体供应信息，浏览与AKR-517 pCMV-GFP-Grin1 Expression Vector pCMV-GFP-GRIN1表达载体相关的产品或在搜索更多与AKR-517 pCMV-GFP-Grin1 Expression Vector pCMV-GFP-GRIN1表达载体相关的内容。 查看更多
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苏州泓迅生物科技股份有限公司在发布的泓迅亚克隆/转载体供应信息，浏览与泓迅亚克隆/转载体相关的产品或在搜索更多与泓迅亚克隆/转载体相关的内容。 查看更多
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北京义翘神州科技有限公司(Sino Biological Inc.)在发布的人 SLC19A1 基因 ORF cDNA clone (克隆载体)供应信息，浏览与人 SLC19A1 基因 ORF cDNA clone (克隆载体)相关的产品或在搜索更多与人 SLC19A1 基因 ORF cDNA clone (克隆载体)相关的内容。 查看更多
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2021-08-27
品牌：jiamaylab 查看更多
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2018-08-08
本章将会讨论昆虫来源的杆状病毒展示载体的设计及其潜在的用途。建立展示库的一般步骤和这些基因递送载体的特性也将会在本章中进行阐述。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」 查看更多
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几种表达载体123
Doctor-pxz2021-09-08
各位大神，我现在用PET28α作为表达载体，在连接的时候是不是载体要进行双酶切、胶回收?我双酶切的目的片段和PET28α连接后，导入感受态中没有成功，不知道怎么回事，请教各位。
RNA干扰载体的构建的实验流程123
血刺SC3422017-11-06
在RNA干扰实验中
首先需要构建dsRNA表达载体
将这种载体导入受体细胞中后
表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA
引起具有相同序列的mRNA发生讲解
导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质
所以个体会表现出功能缺失表型
构建表达载体通常选用dsRNA
需要注意的一些方面是
dsRNA序列中GC的含量要小于50%
高GC含量会降低RNAi的效果
选定的dsRNA序列应通过搜索数据库确保与其他基因无同源性
以避免对其他同源性基因表达的抑制
不同区域的dsRNA具有不同的基因沉默效果
可同时构建两个以上针对同一基因不同靶区域的dsRNA表达载体
还要充分考虑siRNA的结构特征
siRNA与mRNA的同源程度对RNAi有明显影响
启动子区或者编码区与siRNA同源的基因受siRNA抑制
但siRNA在动物细胞中对mRNA的前体没有影响
所以含非编码区序列的dsRNA不会引起RNAi
而且在构建表达载体时
经常使用U6启动子等RNA聚合酶Ⅲ能够识别的启动子序列
最后将其转入到质粒中
这里说的只是一个简单的过程
总的来说构建表达载体是个比较复杂的过程
如果要知道详细的技术
建议还是去看书吧
这里是说不清的
首先需要构建dsRNA表达载体
将这种载体导入受体细胞中后
表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA
引起具有相同序列的mRNA发生讲解
导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质
所以个体会表现出功能缺失表型
构建表达载体通常选用dsRNA
需要注意的一些方面是
dsRNA序列中GC的含量要小于50%
高GC含量会降低RNAi的效果
选定的dsRNA序列应通过搜索数据库确保与其他基因无同源性
以避免对其他同源性基因表达的抑制
不同区域的dsRNA具有不同的基因沉默效果
可同时构建两个以上针对同一基因不同靶区域的dsRNA表达载体
还要充分考虑siRNA的结构特征
siRNA与mRNA的同源程度对RNAi有明显影响
启动子区或者编码区与siRNA同源的基因受siRNA抑制
但siRNA在动物细胞中对mRNA的前体没有影响
所以含非编码区序列的dsRNA不会引起RNAi
而且在构建表达载体时
经常使用U6启动子等RNA聚合酶Ⅲ能够识别的启动子序列
最后将其转入到质粒中
这里说的只是一个简单的过程
总的来说构建表达载体是个比较复杂的过程
如果要知道详细的技术
建议还是去看书吧
这里是说不清的
目的基因启动子能启动报告基因吗123
█绪凡█2832017-11-05
目的基因启动子能启动报告基因
启动子是RNA聚合酶能够识别并与之结合,从而起始基因转录的一段DNA序列,通常位于基因上游.一个典型的启 动子包括CAAT-box和TATA-box,它们分别依赖DNA的RNA聚合酶的识别和结合位点,一般位于转录起始位点上游几十个碱基处.在核心启动子上 游通常会有一些特殊的DNA序列,即顺式作用元件,转录因子与之结合从而激活或抑制基因的转录.一旦RNA聚合酶定位并结合在启动子上即可 启动基因转录,因此启动子是基因表达调控的重要元件,它与RNA聚合酶及其他蛋白辅助因子等反式作用因子的相互作用是启动子调控基因转录的实质.
根据启动子的转录模式可将其分为3类：组成型启动子、组织或器官特异性启动子和诱导型启动子.
启动子是RNA聚合酶能够识别并与之结合,从而起始基因转录的一段DNA序列,通常位于基因上游.一个典型的启 动子包括CAAT-box和TATA-box,它们分别依赖DNA的RNA聚合酶的识别和结合位点,一般位于转录起始位点上游几十个碱基处.在核心启动子上 游通常会有一些特殊的DNA序列,即顺式作用元件,转录因子与之结合从而激活或抑制基因的转录.一旦RNA聚合酶定位并结合在启动子上即可 启动基因转录,因此启动子是基因表达调控的重要元件,它与RNA聚合酶及其他蛋白辅助因子等反式作用因子的相互作用是启动子调控基因转录的实质.
根据启动子的转录模式可将其分为3类：组成型启动子、组织或器官特异性启动子和诱导型启动子.
【求助】有关黄色短杆菌自杀载体基因敲除_问答详情_载体_其他分子...123
阿呆硕士2018-01-22
近期刚接触有关黄色短杆菌（G+）的代谢途径修饰，根据相关文献及实验室已有资料，选择pk18mobsacB这一穿梭型的自杀载体进行敲除。
目标基因全长1800bp，通过重叠延伸的方式获得的自杀敲除组件，左右同源序列均为500bp左右，构建自杀载体（确认载体没有问题），期望进行目标基因的失活处理，但将近1个月的时间，不见任何目的克隆，故在此请各位战友指点。
采用电转的方式将自杀载体（约6700bp）导入黄色短杆菌，感受态的细胞制备采用相关文献方式，甘氨酸和吐温-30的方式进行摇菌并制备电转感受态，1800v电转（电压进行过梯度，1200、1500、1800、2200、2500。1800v效果相对较好，故选之），但电转效率仍是较低，复苏2h，浓缩涂板LBG+kan（kan浓度20ug/ml）,平板克隆很少，几次都只有20个左右的克隆。
1）克隆很少，原因可能跟菌株的电转效率有关，不知战友有没有谷氨酸棒杆菌或黄色短杆菌相关较好的电转经验，还请指教？
2）抗性平板克隆很少，还可能和重组效率有关，但根据pk18mobsacB质粒的特性，既然能在抗性平板生长，理论上应该是已经进行了一次重组了，但结果是不管我用pk18载体本身的Kan序列引物还是最终诱导进行PCR验证，均未证实到一次重组的发生，更不要说获得敲除失活的目的菌株了。问题是这个带有抗性的克隆到底是携带了什么使其同样具有抗性(显微检验不是杂菌）？如何有效提高或促进自杀载体在宿主内的重组效率呢？或是更有效的准确的检测验证手段？？
3）利用自杀载体的方式进行黄色短杆菌（或谷氨酸棒杆菌）的基因敲除缺失比较不易，不知有没有正在做这方面相关研究的战友，希望能够多多交流和学习。。。
不知道我的疑惑讲清楚了没有，若哪里不清楚还请指出，我再细说。。。期望xdjm们的帮助啊。。。先谢过了。。
目标基因全长1800bp，通过重叠延伸的方式获得的自杀敲除组件，左右同源序列均为500bp左右，构建自杀载体（确认载体没有问题），期望进行目标基因的失活处理，但将近1个月的时间，不见任何目的克隆，故在此请各位战友指点。
采用电转的方式将自杀载体（约6700bp）导入黄色短杆菌，感受态的细胞制备采用相关文献方式，甘氨酸和吐温-30的方式进行摇菌并制备电转感受态，1800v电转（电压进行过梯度，1200、1500、1800、2200、2500。1800v效果相对较好，故选之），但电转效率仍是较低，复苏2h，浓缩涂板LBG+kan（kan浓度20ug/ml）,平板克隆很少，几次都只有20个左右的克隆。
1）克隆很少，原因可能跟菌株的电转效率有关，不知战友有没有谷氨酸棒杆菌或黄色短杆菌相关较好的电转经验，还请指教？
2）抗性平板克隆很少，还可能和重组效率有关，但根据pk18mobsacB质粒的特性，既然能在抗性平板生长，理论上应该是已经进行了一次重组了，但结果是不管我用pk18载体本身的Kan序列引物还是最终诱导进行PCR验证，均未证实到一次重组的发生，更不要说获得敲除失活的目的菌株了。问题是这个带有抗性的克隆到底是携带了什么使其同样具有抗性(显微检验不是杂菌）？如何有效提高或促进自杀载体在宿主内的重组效率呢？或是更有效的准确的检测验证手段？？
3）利用自杀载体的方式进行黄色短杆菌（或谷氨酸棒杆菌）的基因敲除缺失比较不易，不知有没有正在做这方面相关研究的战友，希望能够多多交流和学习。。。
不知道我的疑惑讲清楚了没有，若哪里不清楚还请指出，我再细说。。。期望xdjm们的帮助啊。。。先谢过了。。
一种新型双荧光素酶报告基因表达载体的构建123
逗比2号2021-09-18
请教如何构建双报告基因表达载体123
落帅09912021-08-12
标记基因通常用来检验重组DNA载体转化成功与否，或者检测目的基因在植物细胞或组织中的定位。常用的标记基因是一些抗生素抗性基因，如卡那霉素抗性基因、潮霉素标记基因等。如：某种具有氨苄抗性基因质粒（该基因即可认为标记基因），与外源DNA片段组合形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有氨苄抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。当用选择培养基（比如含有氨苄的培养基），来培养受体细胞时，能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功的导入了外源DNA，标记基因就起作用了。作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件：(1)已被克隆和全序列已测定；(2)表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物；(3)其表达产物能进行定量测定。目前常用的报告基因有氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、荧光素酶基因(luc)、β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)、分泌型碱性磷酸酶基因(seap)、绿色荧光蛋白基因(gfp)等。如：绿色荧光蛋白(gfp)基因。绿色荧光蛋白来源于海洋生物水母，其基因可在异源组织中表达并产生光，GFPCdnad开放阅读框架长度约740bp，编码238个氨基酸残基，其肽链内部第65-67位丝氨酸-脱氢酪氨酸-甘氨酸通过自身环化和氧化形成一个发色基因，在长紫外波长或蓝光照射下发出绿色荧光。转染后的细胞可在荧光显微镜或流式细胞仪(FACS)中直接观察基因的表达。
【求助】【RFP】求RFP核酸片段,作为报告基因用于构建载体 核酸...123
li41102015-01-14
慢病毒载体构建及结构优化 实验方法123
11的久久日2021-08-10
各位好，最近构建慢病毒沉默载体，问题是提完质粒酶切验证是阳性，但是测序检测不到插进去的shRNA，已经重复连接转化多次，依旧没有得到阳性质粒，请大神帮忙分析下原因，感谢！！
怎样构建RNA干扰载体求具体的答案谢谢123
guiping08592021-08-30
1 确定基因中同源性小的片段做干扰载体的目的片段，防止干扰到材料中含有的其他同源基因；
2 确定干扰载体中可以用的2个酶切位点，
3 设计2对带有不同酶切位点的引物，分别扩增正、反向片段，并检查序列是否正确没有突变；
4 将正向片段连接到酶切过的干扰载体中，pcr鉴定；
5 再将反向片段连上去，pcr鉴定。
2 确定干扰载体中可以用的2个酶切位点，
3 设计2对带有不同酶切位点的引物，分别扩增正、反向片段，并检查序列是否正确没有突变；
4 将正向片段连接到酶切过的干扰载体中，pcr鉴定；
5 再将反向片段连上去，pcr鉴定。
哪些方法可以抑制细胞的基因表达_123
49827282017-10-01
怎么抑制基因表达，本人高考过了，有一定生物基出，想问问
【求助】表达载体为什么要构建正义和反义? 形态学与生理生化...123
▇爱新觉罗▇厐2017-11-07
表达载体构建正义和反义,一般用于基因功能的研究,正义为强势表达
(forced expression)或过表达(overexpression),以观察基因表型,反义则是用来抑制基因表达,以观察在目的基因的表达受到抑制的情况下表型的变化
(forced expression)或过表达(overexpression),以观察基因表型,反义则是用来抑制基因表达,以观察在目的基因的表达受到抑制的情况下表型的变化
科研人员利用转基因技术将乙烯形成酶(EFE)反义基因导入番茄中获得...123
wbq_19812021-09-23
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